《膀胱移行细胞癌血小板衍化内皮细胞生长因子研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《膀胱移行细胞癌血小板衍化内皮细胞生长因子研究（73页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、复旦大学 博士学位论文 膀胱移行细胞癌血小板衍化内皮细胞生长因子研究 姓名：李纲 申请学位级别：博士 专业：泌尿外科 指导教师：张元芳 20031018 星旦太堂攫硒宜生坐逃监窑 5 。D F U R 5 - d e o x y 一5 一f l u o r o u r i d i n e 5 F U5 一f l u o r o u r a c i l 英文缩写词 去氧氟尿苷 5 一氟尿嘧啶 H G P R T h y p o x a n t h i n ep h o s p h o r i b o s y l t r a n s f e r a s e次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 I C 5 0 5
2、 0 i n h i b i t i o nc o n c e n t r a t i o n I F N y I n t e r f e r o ng a m m a M M C m i t o m y c i n C m R N A m e s s a g e f i b o n u e t c i ea c i d P C R p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n 5 0 抑制浓度 v 干扰素 丝裂霉素C 信使核糖核酸 聚合酶连反应 P D - E C G F p l a t e l e t d e r i v e de n d o t
3、h e l i a lc e l lg r o w t hf a c t o r f f l _ f d , 板衍化内皮细胞生长因子 R Tr i v e r s et r a n s c r i p t i o n 逆转录 T N M t u m o r , l y m p h o n o d e a n dm e t a s t a s i s 肿瘤，淋巴结和远处转移 T P t h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s e胸苷磷酸化酶 V E G Fv o s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c
4、 t o r 血管内皮生长因子 W H OW o r l dH e a l t hO r g n i z a t i o n 2 世界卫生组织 星旦右坐越皿究生生业i 盘室 膀胱移行细胞癌血小板衍化内皮细胞生长因子研究 ( 摘要) 背景与目的 膀胱移行细胞癌是最常见的泌尿系恶性肿瘤，近年发病率明显上升。该肿瘤 大部分是浅表性的，常用经尿道电切的方法治疗，但一旦出现肌层浸润，不管用 何种方法治疗，治疗效果不理想，预后差。目前还没有发现能早期发现或预测该 肿瘤肌层浸润的标记物。大量研究表明血管生成是实体肿瘤生长、浸润进展和转 移的必要条件，而血管生成因子的活性增高在肿瘤血管生成过程中起着十分重要
5、的作用。近年发现血小板衍化内皮细胞生长因子( P D E C G F T P ) 在多种恶性肿 瘤的生长、浸润进展和转移过程中起着重要作用。另方面P D - E C G F T P 又有 酶活性，具有胸苷磷酸化酶( T P ) 的作用，是体内代谢活化去氧氟尿苷和5 氟 尿嘧啶的重要酶，P D E C G F F F P 的酶活性增高在胃、结肠和乳腺癌等多种恶性肿 瘤中证实能增加去氧氟尿苷和5 氟尿嘧啶的抗癌作用。 本课题用逆转录聚合酶链反应( R T P C R ) 和W e s t e r n 印迹方法研究了Y 干扰 素对膀胱癌R T - 4 和T 2 4 细胞P D E C G F T P
6、 m R N A 和蛋白质表达的影响，及这种 影响与去氧氟尿苷和5 氟尿嘧啶对膀胱癌R T 4 和T 2 4 细胞的毒性作用之关系， 同时用R T - P C R 和免疫组织化学染色法研究了膀胱移行细胞癌组织中 P D E C G F T P 的m R N A 和蛋白质的表达情况，探讨P D E C G F T P 的m R N A 和蛋 白质的表达与膀胱移行细胞癌的浸润与复发等生物学行为的关系。 第1 部分T 干扰素诱导的P D - E C G F T P 增强膀胱癌T 2 4 和R T - 4 细胞对去 氧氟尿苷和5 一氟尿嗜啶技摩性 材料与方法 分别用R T - P C R 和W e s
7、 t e r n 印迹检测高分化和低分化膀胱移行细胞癌的代表 细胞株R T 4 和T 2 4 细胞中P D E C G F T Pm R N A 和蛋白质的表达，M T S 法确定 去氧氟尿苷、5 一氟尿嘧啶和丝裂霉素C 对膀胱癌R T - 4 和T 2 4 细胞的细胞毒性作 用。 结果 未经7 干扰素处理的R T - 4 和T 2 4 膀胱癌细胞，P D E C G F T Pm R N A 表达很 低，T 干扰素处理的R T - 4 和T 2 4 膀胱癌细胞的P D - E C G F T Pm R N A 表达明显增 强，与浓度呈正相关。汗扰素作用4h 即见到P D E C G F T
8、Pm R N A 表达增加， 3 复里太生监鲤窥生生北让塞 1 6h 达峰：W e s t e m 印迹检测到P D E C G F T P 蛋白质表达呈现出与m R N A 表达 相同的剂量依存性增强。 Y 干扰素1 0 0 0 0U m l 单独时与R T 一4 或T 2 4 膀胱瘸细胞作用4 8h 未见明显细胞毒 性作用。经5 0U m l y 干扰素预处理2 4h 的R T 一4 和T 2 4 膀胱癌细胞对去氧氟尿苷和 5 一氟尿嘧啶的敏感性都明显增加，在R T 一4 细胞中，去氧氟尿苷的I C 。从( 9 7 0 2 ) m m o l L 降至( 3 3 0 9 ) m m o l
9、 L ( = 8 6 4 ，尸= 0 0 0 1 ) ，5 - 氟尿嘧啶的I C 。从( 1 3 0 O 2 1 2 ) p m o l L 降至( 4 9 3 1 8 4 ) p m o l L ( t = 3 5 2 ，P = 0 0 2 ) ，丝裂霉 素C 的I C 。在对照组为( 1 5 - - + 0 5 ) p m o l L ，Y 干扰素预处理组为( 1 4 0 3 ) p m o l L ， 差异无显著性意义( = 0 3 0 ，P = 0 7 8 ) ；在T 2 4 细胞中，去氧氟尿苷 的I c 从( 1 6 0 3 6 ) m m o l L 降至( 6 2 0 9 ) m
10、 m o l L ( r = 2 8 2 ，P = 0 0 4 8 ) ，5 一 氟尿嘧啶的I C 。从( 8 2 6 7 1 5 5 1 ) u m o l L 降至( 3 4 6 7 3 8 9 ) p m o l L ( t = 3 6 8 ，P = 0 0 2 1 ) ，丝裂霉索c 的I c 。在对照组为( 2 0 0 3 ) “m o l L ，Y 干扰素 预处理组为( 2 3 0 6 ) p m o l L ，差异无显著性意义( t = - 0 5 8 ，P = 0 5 9 ) 。 第2 部分膀胱移行细胞癌中P D E C G F f r Pm R N A 表达的研究 材料与方法
11、有明确病理学诊断的3 5 例膀胱移行细胞癌，其中T 。期1 4 例，T l 期1 2 例， T 2 - 4 期9 例；W H O 分级：G l 级4 例，G 2 级1 4 例，G 3 级1 7 例，另有6 例正常膀 胱粘膜取自非肿瘤患者。膀胱癌组织的总R N A 抽提按照I S O G E N 试剂盒说明进 行，取2P - g 总R N A 逆转录酶合成e D N A ，5 倍稀释后取2 “l 进行P C R ，所有标 本用H G P R Tm R N A 作内对照，目的P C R 条带用N I HI m a g e l 6 2 软件根据面积与 吸光度定量分析，每一标本的P D E C G F
12、 T P 或V E G Fm R N A 表达用H G P R T 标准 化，结果表示为P D E C G F ，r Pm R N A 或v E G Fm R N A 与H G P R Tm R N A 的比值。 结果 膀胱癌中P D E C G F T Pm R N A 表达水平是正常膀胱粘膜的3 8 6 倍( f = 2 3 6 ， P = 0 0 2 4 ) ，其中T 。、T l 和T ：。期膀胱癌分别是正常膀胱粘膜的1 3 3 倍( ，= 1 1 8 ，P = O 1 3 0 ) 、4 0 2 倍( t = 6 1 5 ，P 0 0 5 ) 。T a 期1 8 倒，P D E C G
13、l 7 阳性袭达3 例( 1 67 ) ；T l 瑚1 4 例阳性表 进5 例( 3 57 ) ；攫润肌腥以上的B 一期2 3 倒陷 性裘进1 7 倒( 7 3 9 ) 。随曹膀兢癌分期的升高 肿瘾细胞的P DE C G F 础惶表达率也增高( 一= 1 40 ， tc f h m3 1r j “1 “。r I l l 0 0 I ”du h e nc c l K n 删I “1 I h l f 、 “( br “g i l l m - ! _ s2 H r - “n k v L J m j nJ 仆f W L “r tC h e m im ，J ! f 巾7 鬃麟篙怒纛黧蒸瑟鬻照篇端。搿篇絮
14、麓鬻臻裂戮蒸燮嚣 |愁辫篓誉嬲 豆型登盥鲤垃置垒登! 噬奎一 一 璺奠即c 州：o 曼墨盥型! ! 翌羔，：m 拱粤苎L ， 1 1 1 。q m * l k uJ 一1 p uJ 1 1 E1 ) 1 ：u Rl LJ m lu 1 I I ”N n 1 l “K f l r “ k I j j 一o ) - KM ( S 。1 ，“l h ，d l J ，f 1 1 “l n 。- f l d rrc t c # ，s n f l ”1 0 I “n ld “n t l I o I H u r L I m f - n k 、fI - l “ cI I “ ，n h t e l l l c
15、nr n l T mL “日I h oI I m | l l r 1 1 o 【 u c d r ( 1n 1d I “I 斛”I n f l 1 r 1 1 H 1 17 I l 讣tH a r r ：m t m L kH E n h ；c f 州l ”l “l q m cl N Hc I m j m ， “l I c t m J m “o c “ l l s 】c s P xT I P I YJ 、v c l * r | c 川_ l I 帅， t l m “1 1l I t ；1 m = l p l ! ，l “l n - 。I “I I ch l I o J r 川r 1 、l I k t n 1 1t h ；= ，、I P 1 n c dI I 】K f # “rl r ht m ”I 、u _ Ih l “ r 、t 【 l f I l l ，i n c u J r - d n k ”J l I l l f m I “J ：ln 1 “? 7 l I mr l o I r l l “a l c I I
