《脂肪酶固定化及一种黄酮醇对酷氨酸酶抑制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脂肪酶固定化及一种黄酮醇对酷氨酸酶抑制的研究（80页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、密级：公开 兰州理工大学硕士学位论文 脂肪酶固定化及一种黄酮醇对 酪氨酸酶抑制的研究 _ ， l ：、， T h eR e s e a r c ho nI m m o b i l i z a t i o no fL i p a s ea n dt h eI n h i b i t i o n o fak i n do fF l a v o n o lo nT y r o s i n a s e b y X I N GL a n k u n B E ( H e b e iU n i v e r s i t yo f E c o n o m i c sa n dB u s i n e s s )
2、2 0 0 9 At h e s i ss u b m i t t e di np a r t i a ls a t i s f a c t i o no ft h e R e q u i r e m e n t sf o r t h ed e g r e eo f M a s t e ro f E n g i n e e r i n g B i o c h e m i c a lE n g i n e e r i n g i nt h e C o l l e g eo f P e t r o c h e m i c a lE n g i n e e r i n g o f L a n z h
3、 o u U n i v e r s i t yo fT e c h n o l o g y S u p e r v i s o r A d j u n c tP r o f e s s o rY a n gY u n s h a n g J u n e ，2 0 1 2 L ， B k 兰州理工大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个 人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果 由本人承
4、担。 作者签名：邢兰卅孛日期：2 口2 年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查 阅和借阅。本人授权兰州理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本 学位论文。 本学位论文属于 l 、保密口，在年解密后适用本授权书。 2 、不保密团。 ( 请在以上相应方框内打“”) 作者签名： 导师签名： 日期：2 D 侄年月1 日 日期：2 0 1 2 年月1 日 细学 粕榉 硕+ 学位论文 目录 摘要I A B S T
5、 R A C T 。I l l 第l 章绪论。1 1 1 酶固定化技术1 1 1 1 酶固定化技术的发展l 1 1 2 固定化酶的优点2 1 1 3 酶固定化方法2 1 1 4 酶固定化载体5 1 1 5 固定化酶的应用7 1 2 磁性载体材料8 1 2 1 磁性F e 3 0 4 纳米粒子的制备方法9 1 2 2 磁性二氧化硅F e 3 0 4 微球的制备方法9 1 2 3 壳聚糖微球的制备方法1O 1 3 酪氨酸酶及其抑制剂的研究概况1 0 1 3 1 酪氨酸酶的研究概况1 0 1 3 2 酪氨酸酶活性中心的结构1l 1 3 3 酪氨酸酶抑制剂的抑制机理1 2 1 3 4 酪氨酸酶抑制剂的
6、应用和研究前景l3 1 4 本课题研究意义和主要研究内容1 3 第2 章磁性复合粒子的制备与表征。1 6 2 1 前言16 2 2 实验试剂和仪器l7 2 2 1 实验试剂1 7 2 2 2 实验仪器l7 2 3 实验方法18 2 3 1F e 3 0 4 磁性纳米粒子的制备18 2 3 2 油酸修饰F e 3 0 4 纳米粒子的制备18 2 3 3 以F e 3 0 4 O A 粒子为基础合成F e 3 0 4 S i 0 2 粒子1 8 2 3 4 壳聚糖包被F e 3 0 4 S i 0 2 的磁性复合载体的制备”1 9 2 4 3 透射电镜分析”2 3 2 4 4 磁学性能分析一2 5
7、 2 5 结论。2 6 第3 章磁性复合粒子固定化脂肪酶的研究2 8 3 1 前言。2 8 3 2 实验试剂及仪器。2 9 3 2 1 实验试剂2 9 3 2 2 实验仪器3 0 3 3 实验方法3 0 3 3 1 磁性复合粒子的氨基化3 0 3 3 2 戊二醛交联法固定化脂肪酶3 0 3 3 3 脂肪酶含量的测定方法3l 3 3 4 酶活的测定方法”3 l 3 4 结果与讨论3 2 3 4 1 固定化条件对酶活的影响一3 2 3 4 2 固定化酶性质分析3 4 3 4 3 固定化酶重复使用性的测定3 6 3 5 结论。3 7 第4 章黄酮醇l 对酪氨酸酶抑制的研究3 8 4 1 前言。3 8
8、 4 2 实验试剂与仪器3 8 4 2 1 实验试剂一3 8 4 2 2 实验仪器3 9 4 3 实验方法。3 9 4 3 1 黄酮醇l 对非酶氧化反应的抑制作用“3 9 4 3 2 黄酮醇1 对酪氨酸酶作用的研究3 9 4 3 3 黄酮醇l 对酪氨酸酶抑制类型的判断4 0 4 3 4 黄酮醇l 对酪氨酸酶抑制动力学分析4 0 4 3 5 主要计算公式4 0 U 馨 附录A攻读学位期间所发表的学术论文目录5 8 I I I L 酶反应。本学位论文较系统地综述了固定化酶的方法、载体材料、磁性 载体材料及国内外研究进展，由此设计和制备了壳聚糖和二氧化硅共同 包被F e 3 0 4 纳米粒子的磁性复
9、合纳米载体，并将其用于脂肪酶的固定化。 本学位论文主要包括以下实验内容： 1 采用化学共沉淀法制备具有超顺磁性的F e 3 0 4 磁性纳米粒子。粒 子平均粒径在l0 15 n m 的，饱和磁感应强度为7 0 8e m u g 。使用表面活 性剂油酸对磁性F e 3 0 4 纳米粒子进行疏水性改性，有效地改善了磁性 F e 3 0 4 纳米粒子与非极性溶剂的相容性。 2 将F e 3 0 4 油酸粒子先分散甲苯溶液中，然后再分散在醇水相中， 利用甲苯与醇可以互溶的特性，使F e 3 0 4 油酸粒子均匀分散在醇水相中。 然后使用溶胶凝胶法中的S t 6 b e r 法，利用正硅酸乙酯的水解缩聚
10、反应生 成S i 0 2 ，替代F e 3 0 4 粒子表面的油酸，由此制备成F e 3 0 4 S i 0 2 磁性纳米 粒子。该磁性复合纳米粒子的平均粒径为2 0 2 5 n m ，饱和磁感应强度为 3 9 2e m u g ，且无剩磁和矫顽力，具有超顺磁性。再使用离子凝胶法利用 壳聚糖与聚阴离子化合物三聚磷酸钠之间的离子凝胶化作用形成离子交 联网，来制备壳聚糖包被F e 3 0 4 S i 0 2 的磁性纳米粒子，该复合纳米粒子 的饱和磁感应强度为30 1e m u g ，无剩磁和矫顽力，具有超顺磁性。并对 制备的磁性复合纳米粒子进行了X 射线粉末衍射分析，结果表明以上对 F e 3 0
11、 4 纳米磁性粒子进行的表面修饰没有引起F e 3 0 4 纳米粒子晶体结构的 相变化。 3 以上述制备的磁性复合纳米粒子为载体采用戊二醛交联法对脂肪 酶进行固定化，对固定化过程中的戊二醛浓度、固定化的p H 值和固定化 时间进行优化，同时研究了游离脂肪酶及固定化脂肪酶的最适p H 值和最 适温度，并对固定化脂肪酶的操作稳定性做了考察。结果表明，以此载 体制备固定化酶的固定化的最佳条件为戊二醛浓度为8 、固定化时的 p H = 7 5 、固定化时间1O h 。游离脂肪酶的最适p H 值为7 5 ，固定化脂肪 酶的最适p H 值为7 O ，同游离脂肪酶相比，固定化脂肪酶最适p H 向酸 性方向偏移了0 5 。游离脂肪酶的最适温度为4 0 ，固定化脂肪酶的只是 脂肪酶同定化及一种黄酮醇对酪氨酸酶抑制的研冗 温度为5 0 ，脂肪酶固定化比游离脂肪酶的最适温度提高了l0 。当固 定化酶重复使用7 次后，其相对酶活力依然保持在5 0 左右，表明固定 化酶具有很好的操作稳定性，壳聚糖包裹F e 3 0 4 S i 0 2 制得
