五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究硕士博士学位论文

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1、硕士(博士)学位论文五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究Study on compatibility of trogopterus dung and panax ginsengchanges in chemical and pharmacological activity in vitro 独 创 性 声 明本人郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师指导下,独立进行研究所取得的成果。尽我所知,除文中特别加以标注和致谢所列内容外,论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何

2、贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处,本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日关于论文使用授权的声明1、 本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定,即:研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有,并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学,学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人 (同意/不同意,务必打印后填写)吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版(涉

3、密学位论文解密后应遵守此协议)。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果,必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日导师签名: 签字日期: 年 月 日五灵脂与人参配伍化学成分及体外药理活性变化研究摘 要五灵脂与人参,是中药十九畏中临床应用较多的一对配伍,本论文对五灵脂与人参配伍进行了实验研究,可为临床合理配伍提供科学有效的重要依据。本论文包括化学实验研究和药理实验研究两大部分。在化学方面主要进行了以下研究:1.运用硅胶柱层析法分别从五灵脂的乙酸乙酯提取物中分离得到2个化合物,分别为:-谷甾醇和原儿茶酸;从人参中分离提取得到3个化

4、合物,分别为:人参皂苷Rd、Rc、Rb1。2.本论文对五灵脂脂肪酸及其他脂溶性成分进行了GC-MS分析,鉴定出42种化合物,其中脂肪酸15种,占脂溶性成分总含量的49.162%,非脂肪酸类成分27种,占脂溶性成分总含量的44.184%。本论文还采用水蒸气蒸馏法提取了五灵脂的挥发油。3.本论文通过中医药数据库中五灵脂与人参配伍应用的方剂考证,选取了4个应用较广泛的配伍比例,分别为:五灵脂与人参配伍5:1、3:1、1:1、1:3。并分别用紫外分光光度法、高效液相法对不同比例配伍后样品中的总黄酮、原儿茶酸、总皂苷和9种单体皂苷的含量变化进行了考察,结果表明:对人参皂苷的含量测定表明:二者并用后使人参

5、皂苷类活性成分含量普遍降低,总皂苷及不同配伍比例的人参皂苷类活性成分降低程度有区别;但配伍比例变化与含量变化并不成线性关系,且经配伍后的样品中人参皂苷Rb3含量明显升高。对总黄酮的含量测定表明:配伍后溶液中的总黄酮含量变化显著,但并不成线性相关,且五灵脂与人参配伍为3:1时,溶液中总黄酮含量达到一个接近于单一五灵脂溶液中的总黄酮含量值。对原儿茶酸的含量测定表明:配伍后溶液中的原儿茶酸含量变化显著,且五灵脂与人参配伍为5:1,3:1,1:1时,溶液中的原儿茶酸含量都明显高于单味五灵脂中的原儿茶酸含量。在药理实验方面主要进行了以下研究:1.抗氧化方面,本论文采用DPPH法,对五灵脂不同溶剂提取物及

6、其挥发油、五灵脂与人参不同比例配伍后的醇提物进行体外抗氧化活性研究,结果表明:各组分均对DPPH自由基有清除能力。五灵脂的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物对DPPH有较强的清除能力;五灵脂的清除DPPH自由基能力比人参更好,合用后,随着五灵脂量的减少,添加人参量的增加,其清除DPPH的能力逐渐减弱。2.抑菌方面,本文选择了大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对五灵脂不同溶剂提取物及其挥发油、五灵脂与人参不同比例配伍后的醇提物的体外抑菌活性进行研究,结果表明:各组分对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538均表现出不同的抑制其生长的活性。五灵脂不同溶剂提取物中,氯仿提取物和乙酸乙酯提取物对两种菌

7、的抑菌效果都尤为显著,其中在氯仿提取物浓度为25 mg/ml时,对两种菌的抑制率都最高,达到60.06%和57.81%,与空白对照组比较有极显著差异(P0.01);五灵脂的挥发油对大肠杆菌ATCC8099和金黄色葡萄球菌ATCC6538的生长均具有抑制作用,但抑菌效果并不明显;五灵脂与人参的醇提物对两种菌的生长也都具有抑制作用,但五灵脂与人参二者醇提物比较,五灵脂醇提物的抑菌作用明显优于人参醇提物抑菌作用,随着配伍比例中五灵脂量的减少,配伍后的醇提物对两种菌生长的抑制作用也逐渐降低,以5:1配伍的醇提物浓度为25 mg/ml时,抑制率最高,达到73.55%和60.58%,与空白对照组比较有极显

8、著差异(P0.01),且以5:1比例配伍的醇提物,其抑菌效果最为显著甚至强于单一五灵脂的抑菌效果。关键词:五灵脂,人参,化学成分,配伍实验,抗氧化活性,抑菌活性Study on compatibility of trogopterus dung and panax ginsengchanges in chemical and pharmacological activity in vitroAbstract Trogopterus dung and Panax ginseng, is one pair of nineteen herbs of mutual antagonism. Was pr

9、escription in common use in clinical practice. Experiments on compatibility of the tow medicines were practiced and summarized in this thesis.Chemical and pharmacology studies are tow main parts of the thesis. In chemical works, tow compounds were isolated from EtOAc fraction of trogopterus dung abs

10、tract they were Beta sitosterol and proto-catechuic acid. Three compounds were isolated from Ginseng abstract, they were saponin Rd, Rc and Rb1. Fat-soluble composition in trogopterus dung was analysed by GC-MS method, 42 compounds were identified and 15 of them were fat-acid, with a content of 49.1

11、62 percent. Volatile oil in trogopterus dung was extracted by steam distillation. Four commonly used compatibility proportion of the tow medicines were compared, 5:1, 3:1, 1:1 and 1:3. Variation of content of total flavonoid and saponin were determined by UV, while content of protocatechuric acid an

12、d other nine saponins were determine by HPLC. Results showed under polypharmacy condition, saponin in ginseng declined except Rb3, and there was no linear relationship between proportion and the content. Content of protocatechuric acid varied as change of compatibility proportion, under condition of

13、 5:1, 3:1 and 1:1, protocatechuric acid in extract had a higher content than in single trogopterus dung.In pharmacology study, antioxidation activity was tested by DPPH method. Activity of extracts from trogopterus dung by different solvent, volatile oil, and different compatibility proportion were

14、compared, EtOAc and n-BuOH fraction of trogopterus dung had stronger activity in eliminating DPPH radical, and the activity decreased as gingseng goes to a higher proportion in compatibility. Bacteriostatic study was carried on colibacillus and staphylococcus aureus, all above groups performed inhib

15、ition, chloroform and ethyl acetate extract of trogopterus dung showed outstanding inhibition ratio, under 25 mg/ml condition, the ratio came to 60.06% and 57.81%. Volatile oil of trogopterus dung also showed inhibition activity, but was not significant. Both gingseng and trogopterus dung ethanol extract were able to inhibit colibacillus and staphylococcus aureus, while trogopterus dung group performed stronger. Proportion 5:1 came to the highest inhibition ratio at concentration of 25

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