发酵工业培养基.

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1、第3章 发酵工业培养基设计 培养基：人工配制的供M或动植物细胞 生长、繁殖、代谢和合成人们 所需产物的营养物质和原料。 3.1 发酵工业培养基的基本要求 必须提供合成M细胞和发酵产物的基本成分 有利于提高单位营养物质的转化率 有利于提高产物的浓度 有利于提高产物的合成速度 尽量减少副产物的形成 原料价格低廉、来源广泛、质量稳定 尽可能减少对发酵中通气搅拌和氧传递的影响 尽可能减少产生工业三废物质 3.2 发酵工业培养基的成分和来源 基本营养源 成分 水 生长调节物质 一、基本营养源 1、碳源： 凡可提供微生物菌种的生长繁殖所需的 能源及合成菌体和产物所必需的碳骨架成分 的营养物质。 常用的碳源

2、有： 糖类、油脂、有机酸和低碳醇等 （1）糖类 糖类是最广泛的碳源，主要有、糖蜜、淀 粉 单糖：如G，所有的微生物都能利用G（速 效碳源），但过多的G会存在G分解阻 遏效应。 二糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖 多糖：糊精、淀粉、纤维素等。不能直接被 M利用，需先水解成小分子 糖蜜：制糖生产时的结晶母液，它是制糖工 业的副产物，主要含蔗糖，杂质较多 （）油脂类： 各种动、植物油 能利用这类碳源的M一般都有比较活 跃的脂肪酶。M利用这类碳源时所消耗的溶 解氧会增加，当供氧不足时，大量的脂肪 酸和有机酸中间体积累，会引起pH下降。 常用的油脂类有：豆油、菜籽油、棉 籽油、鱼油、猪油等。 （）有机酸 有机酸的

3、利用常会引起发酵体系pH上升 ，尤其是有机酸盐氧化时，常伴随有碱性物 质的产生，使pH进一步上升。 常用的有机酸有：乳酸、醋酸、柠檬酸 等。 如以醋酸盐为碳源时，反应如下： CH3COONa + 2O2 2CO2 + H2O + NaOH （）烃和低碳醇类 正烷烃以用于有机酸、氨基酸、抗生 素、维生素和酶制剂发酵中，甘油也常用 作抗生素生产和甾体转化的碳源。 、氮源：凡可构成细胞和代谢产物中氮素 来源的物质。 常用的氮源分两大类：有机氮源和无机氮源。 （）无机氮源 种类：氨盐、硝酸盐和氨水 特点：微生物对它们的吸收快，所以也称之谓速 效氮源。但无机氮源的迅速利用会引起pH 的变化 (NH4)2

4、SO4 2NH3 + 2H2SO4 NaNO3 + 4H2 NH3 + 2H2O + NaOH 无机氮源被菌体利用后，培养液 中就留下了酸性或碱性物质，这种经微 生物生理作用后能形成酸性物质的无机 氮源叫生理酸性物质，如硫酸胺，若菌 体代谢后能产生碱性物质的则此种无机 氮源称为生理碱性物质，如硝酸钠。正 确使用生理酸碱性物质，对稳定和调节 发酵过程的pH有积极作用。 （）有机氮源 来源：工业上常用的有机氮源都是一些廉 价的原料，花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、 玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉 、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟 玉米浆是用亚硫酸浸泡玉米而得的浸泡液的浓缩 液，也是玉米淀粉生

5、产的副产品。 虽然主要用作氮源，但它含有丰富的氨基酸、核 酸、维生素、无机盐等，常用作为提供生长因子的 物质。 有机氮源成分复杂，除提供丰富的蛋白质 、氨基酸外，还含糖类、脂肪、无机盐及生 长因子。由于有机氮源营养丰富，M在含有 机氮源的培养基中表现出生长旺盛、菌丝浓 度迅速增加等特点。 、无机盐及微量元素 这类物质一般在低浓度时对M生长和产 物合成有促进作用，但在高浓度时常表现出 明显的抑制作用。 二、水 微生物细胞的含水量约占细胞鲜重的 7090%。 水对微生物的生理作用： 起到溶剂与运输介质的作用，营养物质的吸 收与代谢产物的分泌以水为介质才能完成 参与细胞内一系列生化反应 维持蛋白质等

6、生物大分子稳定的天然构象 水的比热高，热的传导性好，能有效地吸收 代谢过程中放出的热，并将吸收的热散发出去 ，避免导致细胞内温度陡然升高； 维持细胞的正常形态 M通过水合和脱水作用控制由多亚基组成的结 构。 对于发酵工厂来说，恒定的水源是至关 重要的，因为在不同水源中存在的各种因 素对微生物发酵代谢影响甚大，特别是水 中的矿物质组成对酿酒工业和淀粉糖化影 响甚大。 水源质量的主要参数包括pH值、溶解氧 、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成 和含量。 三、生长调节物质 、生长因子 M自身不能合成但生长不可缺少的微量有 机物质。有机氮源是这些生长因子的重要来源， 多数有机氮源含有一些M生长不可缺少

7、的生长因 子。 、前体 指某些化合物加入到发酵培养基中，能直 接被微生物在生物合成过程中合成到产物分子中 去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物 的产量却因加入前体而有较大的提高。 青霉素：分子量356苯乙酸:分子量136 前体使用时普遍采用流加的方法。 前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生 长不利；前体相对价格较高，添加过多，容易 引起挥发和氧化；流加也有利于提高前体的转 化率。 、产物合成促进剂和抑制剂 指那些非细胞生长所必须的营养物， 又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂 。 它们通过促进或抑制某一反应途径来调 节微生物的代谢，使生化反应途径集中在目 标产物的形成上，从而提高产量和

8、质量。 促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因是 多方面的。 各种促进剂的效果除受菌种、菌龄的影响外，还与 所用的培养基组成有关，即使是同一种促进剂，用同 一菌株，生产同一产物，在使用不同的培养基时效果 也会不一样。 如在酶制剂生产中，有些促进剂本身是酶的诱导物； 有些促进剂是表面活性剂，可改善细胞的透性，改善 细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产，也有人认 为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用；有些促进 剂的作用是沉淀或鳌合有害的金属离子。 例如 巴比妥可增加链霉素产生菌的抗自溶能力 ，推迟自溶时间，增加链霉素积累。 谷氨酸棒杆菌生产赖氨酸时，加入红霉素 可提高产量25%以上。 如酵母厌氧

9、发酵中加入亚硫酸盐或碱类，可 以使酒精发酵受到抑制，而转入甘油发酵 M的培养基类型 合成培养基 按组成分 天然培养基 半合成培养基 固体培养基 按物理状态分 液体培养基 半固体培养基 孢子培养基 按用途分 种子培养基 发酵培养基 1、孢子培养基（也称为斜面培养基） 用途：供微生物生长繁殖孢子或保藏菌种之用， 提供细胞生长繁殖所需的各类营养物质。 措施：培养基营养不能太丰富，碳、氮源不宜 过多，否则易长菌丝而少产孢子。 无机盐浓度应适量，否则影响孢子的颜 色和数量。 注意培养基的pH和湿度，并供给必要 的生长因子和微量元素。 生产上常用的有：麸皮培养基、大米培养基等 2、种子培养基 用途：供孢子

10、发芽、生长和繁殖大量菌丝体， 并使菌丝长得粗壮，成为活力强的种子。 措施：有较完全和丰富的营养物质，特别是 充足的氮源和生长因子。 碳源和氮源应提供一些易于利用的成 分。 各种营养物浓度不必太高，有利于溶 氧，且最后一级种子培养基的成分应较 接近发酵培养基，以便种子进入发酵罐 后能迅速适应环境。 3、发酵培养基 用途：供菌体生长、繁殖和合成大量产物。 措施： 碳氮源速效和迟效相互搭配，多用 迟效少用速效 合适的碳氮比，加缓冲剂稳定pH 添加菌体生长所必需的生长因子和 产物合成所需的前体、促进剂和抑 制基等。 3.4 发酵培养基的设计与优化 3.4.1、发酵培养基的设计原理 一般来讲，培养基的设

11、计首先是确定培 养基的组成成分，然后再决定各组分之间的最 佳配比。 （）菌体的同化能力 （）培养基对菌体代谢的阻遏与诱导的影响 （）合适的碳氮比 （）合适的pH 3.4.2、发酵培养基的优化方法 培养基设计与优化一般都要经过以下几个 步骤： 根据前人的经验和培养基成分确定时必须考 虑的一些问题，初步确定可能的培养基成 分 ； 通过单因子实验确定最适的各培养基组分和 最适浓度； 最后通过多因子实验，进一步优化培养基的 各种成分及其浓度。 初步确定可能的培养基组分 单因子实验确定最适培养基组分及浓度 多因子实验（正交）进一步优化 第5章 发酵工业的种子制备 种子制备：也称为种子的扩大培养，是 指将

12、保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状 态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过 扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养，最终获 得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培 养物称为种子。 一、种子扩培的目的： 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 二、种子的质量要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 三、 种子制备的过程 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养 箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养 过程一般都在菌种室完成，因此形象地将这些 培养过程称为实验室种子制备阶段。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进 行，一般在工厂归为发酵车间

13、管理，因此形 象地称这些培养过程为生产车间阶段。 1、实验室阶段 目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种 的特点最终的培养物可分为两类： 对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶 段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌 体，如谷氨酸的种子培养。 对于产孢子的微生物，获得一定数量和 质量的孢子。 培养基选择的原则： 培养基的选择应该是有利于菌体或孢子 的生长。 在原料方面，实验室种子培养阶段，规 模一般比较小，因此为了保证培养基的质量 ，培养基的原料一般都比较精细。 2、生产车间阶段 在生产车间阶段，最终一般都是获得一 定数量的菌丝体。 目的： 缩短发酵时间 有利于获得好的发酵结果 培养基选择的原

14、则 为获得一定数量和质量的菌体，因此 培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子 的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵 培养基丰富。 在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而 是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的 原因: 一是成本 二是驯化 3、发酵级数的确定 谷氨酸：二级发酵 摇瓶种子 一级种子（小罐）发酵 青霉素：三级发酵 一级种子 （小罐）二级种子（中罐）发酵 一般由菌丝体培养开始计算发酵级数， 但有时，工厂从第一级种子罐开始计算发酵级 数，如： 发酵级数确定的依据 级数受发酵规模、菌体生长特性、接种量 的影响 级数大，难控制、易染菌、易变异，管 理困难，一般2-4级。 二、影响种子质量的主要因素 1、培养基：质量、营养成分 2、培养条件：pH、T、通气和搅拌等 3、种龄和接种量 4、种子罐的级数 5、斜面冷藏时间 6、染菌