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1、快速筛选方法在食品检验中的应用快速筛选方法在食品检验中的应用快速筛选方法在食品检验中的应用快速筛选方法在食品检验中的应用 王家栋王家栋王家栋王家栋博士博士博士博士 DuPontTMQualicon Apr 15, 2010 西安 杜邦公司愿景：成为世界上最具活力的公司，致力于创造可持续的解决 方案，让全球各地的人们生活得更美好、更安全和更健康。 杜邦公司成立于杜邦公司成立于杜邦公司成立于杜邦公司成立于年年年年，是全球是全球是全球是全球强企业中历史最悠久的公司之一强企业中历史最悠久的公司之一强企业中历史最悠久的公司之一强企业中历史最悠久的公司之一。 杜邦是一家科学公司杜邦是一家科学公司杜邦是一家
2、科学公司杜邦是一家科学公司 Technique Rules! 三个增长战略三个增长战略三个增长战略三个增长战略 五个增长平台五个增长平台五个增长平台五个增长平台 302亿美元营业额亿美元营业额亿美元营业额亿美元营业额 杜邦安全与防护杜邦安全与防护杜邦安全与防护杜邦安全与防护 DuPont Safety Developing countries 95%. 食品安全食品安全食品安全食品安全 近年来，由病源菌污染问题导致的食源性疾病的发病居高不下。如： ? 2008年年年年9 月美国花生酱沙门氏菌污染事件月美国花生酱沙门氏菌污染事件月美国花生酱沙门氏菌污染事件月美国花生酱沙门氏菌污染事件 ? 200
3、8年年年年3 月欧美肉制品李斯特菌污染事件月欧美肉制品李斯特菌污染事件月欧美肉制品李斯特菌污染事件月欧美肉制品李斯特菌污染事件 ? 维维豆奶遭受金色葡萄球菌污染中毒事件维维豆奶遭受金色葡萄球菌污染中毒事件维维豆奶遭受金色葡萄球菌污染中毒事件维维豆奶遭受金色葡萄球菌污染中毒事件 ? 婴幼儿乳粉检出阪崎肠杆菌婴幼儿乳粉检出阪崎肠杆菌婴幼儿乳粉检出阪崎肠杆菌婴幼儿乳粉检出阪崎肠杆菌 ?。 食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性食品微生物
4、检测在食品安全中的重要性食品微生物检测在食品安全中的重要性 重要食源性致病菌监测趋势 2000-2006年我国熟肉制品中主要致病菌检出率变化趋势图 0.00% 2.00% 4.00% 6.00% 8.00% 2000200120022003200420052006 沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌 单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌 O O O O157157157157：H H H H7 7 7 7 2000-2006年我国水产品中主要致病菌检出率变化趋势图 0.00% 10.00% 20.00% 30.00% 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 沙门
5、氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌 单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌 O O O O157157157157：H H H H7 7 7 7 副溶副溶副溶副溶 2000-2006年我国生肉类食品中主要致病菌检出率变化趋势图 0.00% 2.00% 4.00% 6.00% 8.00% 10.00% 12.00% 14.00% 16.00% 2000200120022003200420052006 沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌 单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌单增李氏菌 O157:H7O157:H7O157:H7O157:H7 Qualicon: 始终致力于提供微生物快速解决方案始终致力于提供微
6、生物快速解决方案始终致力于提供微生物快速解决方案始终致力于提供微生物快速解决方案 食品微生物快速筛选食品微生物快速筛选食品微生物快速筛选食品微生物快速筛选 病原菌快速鉴定分型病原菌快速鉴定分型病原菌快速鉴定分型病原菌快速鉴定分型 BAX SYSTEM Q7全自动病原微生物检测系统全自动病原微生物检测系统全自动病原微生物检测系统全自动病原微生物检测系统 RiboPrinterRiboPrinterRiboPrinterRiboPrinter 全自动微生物基因指纹鉴定系统 全自动微生物基因指纹鉴定系统全自动微生物基因指纹鉴定系统全自动微生物基因指纹鉴定系统 BAX SYSTEM Q7全自动病原微生
7、物检测系统全自动病原微生物检测系统全自动病原微生物检测系统全自动病原微生物检测系统 BAXSystem Q7 以以以以DNA 为基础为基础为基础为基础检测检测检测检测食源性致病菌食源性致病菌食源性致病菌食源性致病菌，适合食品和环境样品的检测适合食品和环境样品的检测适合食品和环境样品的检测适合食品和环境样品的检测，在同一平台上提供食在同一平台上提供食在同一平台上提供食在同一平台上提供食 品安全和食品质量控制的解决方案品安全和食品质量控制的解决方案品安全和食品质量控制的解决方案品安全和食品质量控制的解决方案 BAXSystem 试剂盒种类 Each kit contains 96 tests: 药
8、片化PCR试剂 光学盖 裂解液 聚合酶链式反应聚合酶链式反应聚合酶链式反应聚合酶链式反应 基于遗传性的基于遗传性的基于遗传性的基于遗传性的 / DNA 或或或或RNA 并不依赖于表型的表达并不依赖于表型的表达并不依赖于表型的表达并不依赖于表型的表达 检测限达到检测限达到检测限达到检测限达到 104cfu/ml 不会受样本来源复杂性及竞争性菌落因素的影响不会受样本来源复杂性及竞争性菌落因素的影响不会受样本来源复杂性及竞争性菌落因素的影响不会受样本来源复杂性及竞争性菌落因素的影响 BAXSystem 产品开发认证历程 1995-6 First BAX System introduced BAX S
9、ystem named to the R E. coli O157:H7 MP; Listeria monocytogenes; Campylobacter jejuni/coli/lari; Enterobactersakazakii USDA-APHIS NPIP Brazil MAPA Health Canada Danish Veterinary and Food Administration Russian Rospotrebnadzor Japanese Ministry of Health, Labour and Welfare 各国政府对各国政府对各国政府对各国政府对BAX 方
10、法的批准方法的批准方法的批准方法的批准 USDA-FSIS 被美国农业部食品安全检测机构被美国农业部食品安全检测机构被美国农业部食品安全检测机构被美国农业部食品安全检测机构 采纳作为标准检测方法采纳作为标准检测方法采纳作为标准检测方法采纳作为标准检测方法 BAX方法也已得到方法也已得到方法也已得到方法也已得到AOAC 认证认证认证认证，作为作为作为作为 突发食源性致病菌污染事件应急反应突发食源性致病菌污染事件应急反应突发食源性致病菌污染事件应急反应突发食源性致病菌污染事件应急反应 的标准检测方法的标准检测方法的标准检测方法的标准检测方法 AOAC食源性致病菌爆发 紧急方法：Salmonella
11、 in PEANUT BUTTER （花生酱） http:/www.aoac.org/testkits/20 09_ERVPB_BAXDuPont.pdf BAXsystem 在国际上的应用 检测原理1：SYBR Green I No SignalSignal Increasing temperature Fluorescent dye bound to double-stranded DNA emits signal Unbound dye does not emit signal 检测原理2：实时荧光定量PCR 5 3 5 5 3 5 Forward Primer Reverse Prim
12、er Probe RQ Target-specific Reporter dyeQuencher dye Quencher dye greatly reduces fluorescent signal from Reporter dye Polymerization begins Probe is intact 5 3 5 5 3 5 R Q Extension progresses Probe is displaced Reporter dye begins to move away from Quencher dye 5 3 5 5 3 5 R Q Extension progresses
13、 Probe is cleaved Reporter dye separates from Quencher dye and emits fluorescent signal 5 3 5 5 3 5 RQ Extension complete probe is removed Fluorescent signal intensity is proportional to amount of amplicon produced. 检测原理3：Scorpions 探针 标准试剂盒标准试剂盒标准试剂盒标准试剂盒（SYBR Green I): ?Salmonella ?E. coli O157:H7
14、MP (multiplex) ?Genus Listeria ?Genus Listeria 24E ?Listeria monocytogenes ?Listeria monocytogenes 24E ?Enterobacter sakazakii ?Yeast and mold 实时荧光定量实时荧光定量实时荧光定量实时荧光定量PCR试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒: ?Campylobacter jejuni/coli/lari ?E. coli O157:H7 ?Staphylococcus aureus ?Vibrio cholerae/parahaemolyticus/vuln ificu
15、s 逆转录试剂盒逆转录试剂盒逆转录试剂盒逆转录试剂盒： ?Listeria species BAXSystem 试剂盒种类 无引物无引物无引物无引物PCR试剂片试剂片试剂片试剂片 BAXSystems 检测时间总揽 11.5 - 27.5 hr 3 hr30 min8 - 24 hr (beef)E. coli O157:H7 MP Express 29 - 33 hr3.5 hr70 min24 - 28 hrGenus Listeria 24E or L. mono 24E 48 hr 4 hr for direct test 3.5 hr30 min44 hr none for dire
16、ct test Yeast and Mold 28 hr 27 - 35 hr 35 - 55 hr 12 - 28 hr 18 - 28 hr 24 - 33 hr 12 28 hr with MP media Total Time to Result 3.5 hr30 min24 hrEnterobacter sakazakii 3.5 hr70 min22 - 30 hrGenus Listeria 3.5 hr70 min30 - 50 hrListeria monocytogenes 3.5 hr30 min8 - 24 hrE. coli O157:H7 MP 3.5 hr30 min14 - 24 hr (beef)E. coli O157:H7 3.5 hr30 min20 - 29
