胆碱酯酶抑制剂加兰他敏对脓毒症炎症反应的作用及其机制研究

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1、浙江大学医学院 博士学位论文 胆碱酯酶抑制剂加兰他敏对脓毒症炎症反应的作用及其机制研 究 姓名：马岳峰 申请学位级别：博士 专业：临床医学（急诊） 指导教师：江观玉 20090501 浙江大学博士学位论文摘要 胆碱酯酶抑制剂加兰他敏对 脓毒症炎症反应的作用及其机制研究 浙江大学医学院 博士研究生 临床医学( 急诊) 马岳峰 导师江观玉教授 中文摘要 脓毒症是创伤、烧伤、休克，感染、外科大手术后常见的并发症，严重者可 进一步发展为脓毒症休克、多器官功能障碍综合征( m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o n s y n d r o m e ，M O

2、 D S ) ，已成为临床危重病患者的重要死亡原因之一，是当前危重病 医学面临的困难问题。由于脓毒症的发病本质是失控性的炎症反应，近年来的药物 研究主要为开发炎症介质特异性抑制剂、阻断剂或中和剂，其思路是针对脓毒症的 每个具体环节，试图阻止脓毒症的发生和发展。尽管很多在动物实验中取得了满意 的结果，但是在临床应用中却大多未能成功。 迷走神经是重要的副交感神经，其纤维广泛分布于拥有网状内皮系统的器官， 如肝、肺、脾、肾和肠等。除了调节这些内脏活动外，新近研究发现电刺激迷走 神经传出支可抑制内毒素血症大鼠肝、脾、心脏组织肿瘤坏死因子a ( t u m o rn e c r o s i s f a

3、c t o ra ，T N F 0 【) 的合成并降低血清中T N F - O 【浓度，减少脓毒症休克的发生率；迷 走神经递质乙酰胆碱可抑制内毒素刺激的巨噬细胞释放T N F Q 、白介素 ( i n t e r l e u k i n ，I L ) 1 p 、I L 6 及I L 1 8 ，却不影响抗炎细胞因子I L 1 0 的合成、释放； 迷走神经切除后显著提高了炎症刺激下T N F 0 【的合成与释放，增强内毒素对实验动 物的致死性。这些研究提示兴奋迷走神经可降低全身炎症反应一一由于其递质为 T T 浙江大学博士学位论文摘要 乙酰胆碱，故称胆碱能抗炎通路。研究表明，a 7 烟碱型乙酰胆碱

4、受体( a 7 n A C h R ) 在巨噬细胞、单核细胞、内皮细胞等表面具有表达，起着联系胆碱能系统和固有 免疫系统的重要作用。胆碱能抗炎通路的提出，为我们提供了一种新的寻找脓毒 症治疗方法的思路激活胆碱能抗炎通路，激活胆碱能抗炎通路可以有两种途 径，一种是直接电刺激迷走神经，一种是通过药物作用。进一步研究中枢胆碱能 系统在胆碱能抗炎通路中的作用，发现激动中枢毒蕈碱型( M ) 乙酰胆碱受体( 特 别是M I 亚型) 或增加中枢乙酰胆碱释放( 激动突触前M 2 自调节受体) ，可激活胆 碱能能抗炎途径，增加迷走神经传出活动并降低循环T N F 释放；而直接激动外周M 受体则不能产生抗炎作用

5、。 激动中枢胆碱能系统可以有多种途径，包括使用乙酰胆碱前体、乙酰胆碱酯 酶抑制剂( a c e t y l c h o l i n e s t e r a s ei n h i b i t o r ，A c h E I ) 、选择性胆碱能受体激动剂、或是 乙酰胆碱释放调节剂。其A c h E I 是目前公认治疗A l z h e i m e r 病( A l z h e i m e r Sd i s e a s e ， A D ) 有效，且应用与研究较多的药物，也是迄今为止唯一一类通过美国食品药品 管理局批准用于治疗A D 的药物。其中加兰他敏( g a l a n t a m i n e )

6、 除了抑制乙酰胆碱 的降解外，还可以刺激脑内神经细胞释放更多的乙酰胆碱，这是该类药物中唯一 具有这一机制的药物，其有效成分最初是从一种植物中提取而出的，目前已经可 以通过化学方法来合成，美国食品药品管理局于2 0 0 1 年批准了加兰他敏对阿尔茨 默痴呆小剂量到中剂量的治疗，目前已进入国内用于临床。 本研究采用内毒素腹腔感染大鼠及体外细胞培养方法，研究加兰他敏对感染 时炎症反应的影响及其作用机理，探索临床脓毒症治疗的新的途径。实验分两部 分：第一部分为胆碱酯酶抑制剂加兰他敏对内毒素腹腔感染大鼠全身炎症反应的 影响及作用机理；第二部分为胆碱酯酶抑制剂加兰他敏对内毒素刺激后R A W 2 6 4

7、7 细胞活化的影响。 I I I 浙江大学博士学位论文摘要 目的： 研究胆碱酯梅抑制剂加兰他敏对内毒素腹腔感染大鼠循环T N F 的影响，迷走神 经在加兰他敏炎症抑制效应中的作用；并研究加兰他敏对内毒素刺激后巨噬细胞 活化的影响，阐述加兰他敏炎症调控作用的机理。 方法： 第一章加兰他敏对内毒素腹腔感染大鼠循环T N F 的影响以及迷走神经在 加兰他敏炎症抑制效应中的作用：建立内毒素腹腔感染大鼠动物模型和双侧颈部 迷走神经切断动物模型，分别将大鼠分成正常对照组( C o n t r a l ，n = 8 ) 、内毒素组 ( L P S ，n = 8 ) 、内毒素+ 加兰他敏组1 ( L P S

8、+ G a l1 ，n = 8 ) 、内毒素+ 加兰他敏组2 ( L P S + G a l2 ，n = 8 ) 、内毒素+ 加兰他敏组3 ( L P S + G a l3 ，n = 8 ) 5 组，和假手术对 照组( S h a m ，n = 8 ) 、迷走神经切断组( V g ，n = 8 ) ，迷走神经切断+ 内毒素组( V g + L P S ， n = 8 ) 、迷走神经切断+ 内毒素+ 加兰他敏治疗组( V g + L P S + G a l ，n = 1 2 ) 4 组，分别 测定各组血浆T N F 值。统计学分析采用S i g m a s t a t 统计软件，组间比较采用A

9、N O V A 及N e w m a n k e u l s 检验分析。P O0 5 塑! 鳇! = ! ! 竺 1 h b I e3 U n a d j u s t c d0 R so fc I i n i c a lr i s kf 缸t o r sa 疵c t i n gm o r t a l i t y i ns e V e r em u l t i p I et r a u m ap a t i e m sw i t hA L Is u r v i V i n gb e y O r l d 2 1 ：Q g ! n 2 P i l 3 鲤里i ! 墅! 璺 、龟r f a b l c

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11、 a t l cs h o c k M u I t i D I eb I o O d 盯丑n s f h s i O n si n6h O D e r a t I o n H e p a t i ci n a d e q u a c y 融n a l i n a d o q u a c y G a s t r o I n t e s t i n a Ih e m O r r h a 弘 D 圮 G l n c O c a m c O l dd O 赡 O0 8 9 - 01 6 2 08 0 0 J5 1 3 l1 6 I l5 1 3 I3 1 5 l4 0 l lo o l O3 4 3

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14、r i e n c ea n da n a l y s i so ft h ed a t ac o l l e c t e di n t h i ss t u d y a sm o s to fs e V e r en a u m ap a t i e n t sd e V e J o p e d A R D So rd i e dw i t h i n7 9 6h o u r sa 缸ri n i u 吼t h em o d e l w a sc O n s e q u e n t l yr e f i 位e dt oe x c l u d ep a t i e n t sw h od i

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