《肺癌开题报告.》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肺癌开题报告.（29页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、<p><p>&lt;p&gt;&amp;lt;p&amp;gt;&amp;amp;lt;p&amp;amp;gt;黄芪对肺癌小鼠模型的干预机 制研究 导师:孙广仁教授 学生： 选题依据 ? 选题目的： ? 通过建立小鼠肺癌模型，探讨黄芪对肺癌的抑制 和转移的作用机制，以期在临床上能有效的运用 黄芪对肺癌治疗提供实验依据。建立肺癌小鼠肺 模型，观察黄芪对小鼠生存时间，小鼠瘤组织的 重量及抑瘤率、小鼠肺转移灶的影响。采用免疫 组化方法，观察黄芪对小鼠肿瘤坏死因子及
2、基质 金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化。从微观机制研究 黄芪对小鼠肺癌的作用机制，为临床防治提供实 验依据。 选题意义 根据中国卫生部肿瘤防治办公室提供的2006年中国肿瘤发病 率和十大恶性肿瘤发病率排序显示，肺癌居男性恶性肿瘤 发病首位，男女恶性肿瘤死亡率最高的均为肺癌2。 2000年世界卫生组织的统计资料表明，每年全球的肺癌新 发病例位1.2百万，占全部恶性肿瘤的12.3，死亡1.1百 万，占肿瘤全部死因的17.8。更为严重的是，凡是烟草 消费大国，其肺癌新发病率乃在不断增长，成为越来越严 重的危害人民生命和健康的常见疾病3。原发性肺癌是发 达国家的主要肿瘤，以美国为例，1997年全美国
3、肺癌的发 生数男性为98300例，女性为79800例，分别是男女肿瘤 发病率第二位。1997年因肺癌死亡的人数为160400人， 居恶性肿瘤死亡率第1位，占全美国肿瘤死亡病人的29 4。 ? 中医药在治疗肺癌上有其自己的优势，近几年来应用辨证 论治、专方、专药及新药新剂型等方法治疗肺癌均有一定 的进展，在稳定病灶、改善症状、提高生存质量、延长生 存期等方面都具有一定的疗效和优势。因此研究中医药在 肺癌治疗中的作用有其很高的应用价值，能更好的服务于 临床中肺癌的治疗。 ? 肺癌属“肺积”、“息责”等范畴，属于祖国医学“咳嗽”、“咯 血”、“肺积”，这与肺癌的临床表现有相似之处。中医学认 为，肺癌
4、是由于人体正气不足，尤其是肺脾肾虚损，再加 上六淫和七情等因素长期作用，导致肺气不足，肺阴亏虚 ，升降失调，气血瘀滞，内结于肺，形成积块而发生的6 。 ? 本研究主要是在建立小鼠肺癌模型，并在 此基础上用黄芪对该病进行治疗，通过观 察小鼠的一般情况，小鼠瘤组织的重量及 抑瘤率、小鼠肺转移灶的影响。采用免疫 组化方法，观察黄芪对荷瘤小鼠肿瘤坏死 因子及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化。 从微观机制研究黄芪对小鼠肺癌的作用机 制。预期成果不仅可为防治该病证提供新 思路和理论依据，指导临床对肺癌的预防 、治疗和康复，同时为的深层次机制和研 究中药微观作用机制的研究进行资料积累 ，提供新思路和理
5、论支撑。 课题设计 ? 研究内容与研究方法： ? 以小鼠转移肺癌模型为研究对象，采用中 西药对比进行治疗，动态观察小鼠的体重 改变、抑瘤率的比较、肺组织内基质金属 蛋白酶MMP-9肿瘤坏死因子TNF-等细胞 因子的变化，从细胞分子水平阐释这些变 化，及黄芪和紫杉醇对肺癌的作用的相关 性，观察探讨黄芪对肺癌的干预作用的动 态变化及时效性，为防治肺癌提供新思路 和理论依据。 技术路线 ? 动物实验 ? 1.肺癌的临床诊断：肺癌的临床诊断必须依据临 床表现和各种影像结果进行综合分析，但最后的 确诊必须取得细胞学或病理组织学的证据。任何 没有病理学或病理组织学证据的诊断，都不能为 最后的诊断结果。依据
6、这样的原则，肺癌的诊断 可分为肺癌的定位诊断和肺癌的定性诊断两种， 所有的影像学诊断法方可认为是定位诊断，而所 有以获取细胞学或病理组织学为目的的诊断科认 为是定性诊断。定位诊断是基础，定性诊断是关 键。 2. 肺癌模型建立的方法 ? （1）肺癌小鼠造模：在本院三级动物实验室中， 无菌操作，取肺癌瘤小鼠腹水，稀释至含瘤细胞 2 &amp;amp;amp;#215;1010 /L，置冰上，每小鼠右腋皮下接种 0. 2ml ，分别给模型组、中药组和西药组接种。接种次 日24h后进行药物抑药瘤试验；实验设空白组和 模型对照组，中药组和西药组。模型对照组中， 每只小鼠腹腔注射等体积生理
7、盐水，中药组中每 只小鼠腹灌胃 0.4ml，100mg/ml。西药对照组中 。每只小鼠腹腔注射紫杉醇注射液0.2ml， 20mg/ml 。每只小鼠每天用药 1 次，连续用药 15 天，停药次日处死小鼠，剥离肿瘤，称体重及瘤 重，计算抑瘤率。 （2）药物干预阶段 ? 造模24h后，空白组、肺癌模型组小鼠不予药物干预，以 生理盐水灌胃。中药治疗组小鼠黄芪煎汤灌胃。 ? 药物制备：黄芪25g加8倍水，浸泡半小时，头次煎煮半小 时，滤出药渣后加水至药面以上3ml，再煎20分钟。将两 次药液混合、过滤，加压浓缩至100%（即每毫升含生药 1.0g）的水提剂。 ? 用药方法：将药物按成人日服量换算，计算出
8、小鼠日服量 ，每日对治疗组小鼠灌服中药煎剂0.4ml/100g体重，对空 白组及肺癌模型组小鼠灌服生理盐水0.4ml/100g体重。 ? 连续用药15天，第16天处理所有小鼠。后脱颈处死小鼠, 完整剖取接种的瘤块,电子天平称重，按公式:抑瘤率=(空 白组平均瘤重-给药组平均瘤重) /空白组平均瘤重&amp;amp;amp;#215;100% 。小鼠处死后，将整个肺取下。在双盲条件下,计数肺转 移瘤灶的数目，按公式:肺转移抑制率=(空白组平均肺转移 瘤灶数目-给药组平均肺转移瘤灶数目) /空白组平均肺转移 瘤灶数目&amp;amp;amp;#215;100%。 3
9、.检测指标 ? （1）整体观测：在实验过程中观察小鼠症状、体 重、生存时间、呼吸、被毛情况、食量、饮水量 ，胸腔，纵膈，胸水。（2）瘤体重测定：小鼠处 死后，去肿瘤组织，精密电子天平称重。（3）血 生化指标检测：小鼠腹主动脉取血，以ELISA法 测定、TNF-的含量，放免法测定血浆中MMP-9 的含量（4）瘤组织处理：肿瘤组织用福尔马林液 充分固定，常规脱水，二甲苯透明，石蜡包埋， 常规切片，HE染色，光镜下观察期组织学变化。 肺组织用福尔马林固定12h,进行HE染色,在光学显 微镜下观察读片,以进一步确认转移灶的病理性质 及特征。 4.统计学处理 ? 计量资料以&amp;am
10、p;amp;#177;S表示，多组间比较用单 因素方差分析，组间两两比较用q检验 ，计数资料用2检验，P0.05为显著 性差异，P0.01为非常显著性差异， 均用SAS软件进行统计学处理。 技术路线图 SPF级昆明级小鼠55只 随机分组 空白组10只模型组15只中药组15只 实验全过程观察小鼠的 体重、一般情况、生存时 间、胸腔、纵隔、 胸水 肿瘤接种 血生化指标检测：TNF-、MMP-9的蛋 白表达 肺组织切片：肺病理观察 瘤体重的测定 14天后停止用药 西药组15只 24h后开始用药，模型组用生理盐水， 中药组用黄芪，西药组用紫杉醇 可行性分析 ? 1根据内经中“在天为气，在地成形，形气
11、相感而化生万物矣”，“五气入鼻，藏于心肺”，“肺 者，气之本。”，“诸气者，皆属于肺。”等论述， 肿瘤的病因不外乎内因和外因两个方面。“正气存 内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚”。所以肺 癌的发生也不外乎是气虚所致。以此采用以补气 为主的黄芪治疗。肺癌的发生与人体的免疫力下 降有很大的关系，而现代的药理研究显示黄芪具 有提高人体免疫力的作用，故采用黄芪干预肺癌 的形成机制是可行的。所以理论上通过肿瘤种植 建立转移性肺癌的造模方法，建立肺癌的模型是 可行的。 ? 2实验方法：本课题针对中医对肿瘤的病因病机 和临床表现的认识，借鉴现代医学实验方法，在 建立肺癌小鼠模型的基础上，并对模型进行了病
12、 理检查、炎症因子等方面的检测以及方药验证。 研究的思路和方法注重中医药理论的指导，对实 验结果的分析和相应对策也是从中医学中气的本 源出发，立足于病药相应的原则。 ? 3实施保障：我们依托于山东中医药大学细胞生 物学实验室，属国家中医药管理局三级重点实验 室，为开放实验室，具备完成该项研究的实验条 件和所用仪器设备基本能够满足，实验室操作人 员经验丰富，具体实验操作熟练，预计可以实现 本项目的预期目标。实验中所涉及到的材料和试 剂均为商品，在国内能够买到。 本课题特色、预期取得的结果 ? 创新点： ? 1采用中医学和现代医学相比较的治疗的方法，在肺癌 病因和临床表现的基础上，用直接种植肿瘤的
13、办法建立转 移性肺癌的小鼠模型。 ? 2在肺癌小鼠模型建立的基础上用单味中药黄芪和紫杉 醇相比较对该病证进行对照治疗，分析小鼠肺改变，明确 肺组织内基质金属蛋白酶MMP-9肿瘤坏死因子TNF-等细 胞因子的变化规律，从微观角度阐释该病证在治疗过程中 的动态变化，并初步明确药物的作用机制或作用靶点。 ? 3该课题观察肺癌小鼠模型在黄芪的干预下的变化，以 评价模型的稳定性和确定中药干预的最佳时机，具有创新 性。 国内外研究动态 ? 1小鼠肺癌模型研究概况 ? 目前常用的小鼠肺癌动物模型有：（1）将肺癌细 胞接种于裸鼠或其他免疫缺陷小鼠的皮下。（2） 将小鼠的气管分离，经过反复冻融处理，然后将 肺癌
14、细胞接种到气管，结扎气管两端后12，再 将气管移植到重度复合免疫缺陷小鼠的皮下 。（ 3）切开胸壁皮肤，将肺癌细胞或肺癌组织直接种 植到肺内13-14。此方法有一定的创伤性和死亡 率，肺癌细胞生长在肺实质内，但只能使 70%- 90%的接种小鼠产生肿瘤，对进行进一步的肺癌 研究造成一定的影响。（4）将肺癌细胞直接注入 重度复合免疫缺陷型小鼠的气管以建立细支气管 内的肺癌模型15。 ? 有学者采用将人类癌组织或肿瘤细胞悬液 直接植入支气管的方法，可以很好模拟支 气管肺癌的临床特征，但是其技术要求较 高，成功率较低8-9。也有人采用外科手 术移植方法，同样也是成功率低于 10%10 。彭鹏11采用
15、清洁级小鼠C57 BL/6小鼠的 腋后线第 6肋间胸腔( 胸腔模型组)或小鼠腋 部皮下（皮下模型组）分别移植鼠源性 Lewis肺癌细胞 0.2ml可作为晚期肺癌动物 模型。 ? 现在常用的转移性肺癌动物模型有： 将肺癌细胞接种于裸鼠或其他免疫 缺陷小鼠的皮下。将小鼠的气管分 离,经过反复冻融处理 ,然后将肺癌细胞 接种到气管，结扎气管两端后，再将 气管移植到重度复合免疫缺陷小鼠的 皮下21。胸壁皮肤，将肺癌细胞或 肺癌组织直接种植到肺脏内22，23。 也有经静脉注射或心室内注射等，建 立肺癌转移模型。 2肺癌的治疗研究概况 ? 肺癌的治疗需依据病人的身体情况及肺癌的类型和分期采 取不同的治疗方
16、案。一般而言，非小细胞肺癌采取手术为 主的综合治疗，小细胞肺癌则采用以化疗放疗为主的综合 治疗3。在化疗方面，临床上分为小细胞肺癌和非小细胞 肺癌两种化疗方案。小细胞癌被列入有可能用化疗治愈的 疾病，目前的标准化疗方案是CAV(环磷酰胺CTX，阿霉 素ADR，长春新碱VCR)和EP（鬼臼乙叉VP-16，顺铂 DDP）非小细胞肺癌对化疗不敏感，常用的化疗方案有 EP（鬼臼乙叉VP-16，顺铂DDP）NP（去长春花碱NVB, 顺铂DDP）GP(吉西他滨GEM，顺铂和卡铂Carboplatin ）TP(紫杉醇TAX，顺铂和卡铂Carboplatin）DP（多西紫 杉醇DOP ，顺铂和卡铂Carbop
17、latin）。并且21世纪恶性 肿瘤一个重要的治疗方向是分子靶向治疗，目前应用于肺 癌的分子靶向药物有表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 的吉非替尼和埃罗替尼。这类药物有一个非常显著的特点 是靶人群，如吉非替尼对女性不吸烟的肺腺癌有特别的效 果3。 ? 从中医理论上看，正气虚损(气虚或阴虚)容易发生肿瘤。 周延峰用消瘤方治疗非小细胞肺癌显示消瘤方能提高机体 免疫功能，降低患者血液粘度，抑制肿瘤血管生成，促进 肿瘤细胞凋亡，下调突变性P53基因27。陈璐7指出补 肾化癖解毒方药对小鼠移植性肺癌及小鼠肺转移均有明显 的抑制作用并且补肾化癖解毒方药能提高西药顺铂(DDP) 对两者的抑制率。黄健飞28指出极低浓度的丹参注射液 对荷瘤小鼠的移植瘤有明显抑制作用，其余浓度的丹参注 射液对荷瘤小鼠的移植瘤无明显抑制作用，不同浓度的丹&amp;amp;lt;/p&amp;amp;gt;&amp;lt;/p&amp;gt;&lt;/p&gt;</p></p>
