《氧化应激和dna甲基化在同型半胱氨酸诱导神经管畸形中的作用机制探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《氧化应激和dna甲基化在同型半胱氨酸诱导神经管畸形中的作用机制探讨（98页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、北京协和医学院博士毕业论文 博士学位论文 学校代码：1 0 0 2 3 学号：b 2 0 0 7 4 3 8 氧化应激和D N A 甲基化在同型半胱氨酸 诱导神经管畸形中的作用机制探讨 所院 ： 姓名 ： 指导教师： 导师小组： 学科专业： 研究方向： 完成日期： 国家人口计生委科学技术研究所 韩仲吉 马旭研究员 马旭研究员夏红飞副研究员 遗传学 m i R N A 与发育 2 0 1 0 年5 月3 0 日 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得其他
2、教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同 志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：两和研彳 签字日期：口 年月多日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解j 丝塞协塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的管理办 法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借 阅。本人授权j 量塞迹塑医堂随可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) ， 学位论文作者签名：一乇彩肌乏 导师签名： 签字日期：枷年占月3 E
3、l 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址： 圆 签字日期：如仞年石月夕日 电话： 邮编： 2 鸡胚生存能力检测1 0 3 石蜡切片l0 4 H E 染色一l2 5 活性氧检测1 2 6 脂质过氧化检测一1 3 7 超氧化物岐化酶( S O D ) 活性检测1 4 8 谷胱甘肽过氧化物酶( G P X ) 活性检测15 9 谷胱甘肽( G S S G ) 含量检测16 1 0 全胚免疫荧光检测5 甲基胞嘧啶含量1 8 1 1 W e s t e r nb l o t 检测D N M T I 和D N M T 3 a 蛋白表达l9 1 2 H P L C 佥测S A M 和S A H 2
4、 2 1 3 鸡胚内m i 1 2 4 a 水平的测定2 3 1 4 免疫组化检钡t J ( s p ) 检测方法 2 6 l5 鸡胚电转( i nO V Oe l e c t r o p o r a t i o n ) 2 6 l6 牛物信息学分析I 。3 0 1 7 统计学处理3 0 结果3 1 1 H C Y 对鸡胚生存力的影响。3l 2 H C Y 对鸡胚神经管的影响3 2 3 H C Y 处理后氧化应激相关指标的变化。3 3 4 H C Y 导致鸡胚基凶组D N A 的整体低甲基化3 7 5 H C Y 导致D N M T l 和D N M T 3 a 表达减少3 8 6 H C Y
5、 对S A M 和S A H 含量的影响。3 9 7 H C Y 对m i R 1 2 4 表达的影响4 0 8 H C Y 对S C P l 、P a x 6 和T u j l 表达的影响4 l 9 敲低或过表达m i R 12 4 对神经管的影响。4 3 1 0 敲低或过表达m i R - 1 2 4 对S C P I 、P a x 6 和T u jl 表达的影响4 4 讨论4 7 1 H C Y 导致的氧化应激与D N A 甲基化的关系4 7 2 H C Y 干扰一碳代谢与D N A 甲基化的关系4 8 3 H C Y 可能通过表观遗传修饰下调m i R 12 4 的表达4 9 4 m
6、i R 1 2 4 在神经管发生中的作用5 0 5 H C Y 导致N T D s 的可能的分子机制5 0 结论5l 参考文献一5 2 附j 素5 7 北京协和医学院博士毕业论文 砷暴露干扰一碳代谢致鸡胚神经管畸形与氧化应激有关 综述一 同型半胱氨酸代谢异常与神经管畸形研究进展 综i 苤二 m i R 1 2 4 研究进展8 4 个人简历9 2 博士期间发表文章一9 3 致谢9 4 2 l j 北京协和医学院博+ 毕业论文 缩略语表 缩写英文全称中文全称 H C Y H o m o c y s t e i n e同型半胱氨酸 N T D sN e u r a lt u b ed e f e c
7、 t s神经管畸形 N A C N a c e t y l - c y s t e i n eN - 乙酰半胱氨酸 C H OC h o l i n e胆碱 H P L C H i g hp e r f o r m a n c el i q u i d 高效液相色谱 c h r o m a t o g r a p h y R O Sr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s活性氧 M D A M a l o n d i a l d e h y d e丙二醛 G S S GG l u t a t h i o n谷胱甘肽 G P XG l u t a t h i
8、 o n ep e r o x i d a s e e谷胱甘肽过氧化物酶 S A M S - a d e n o s y l m e t h i o n i n eS - 腺苷甲硫甘酸 S A H S - a d e n o s y l h o m o c y s t e i n e S - 腺苷同型半胱氨酸 5 - A Z A 5 - a z a 一2 - d e o x y c y t i d i n e 5 - 氮杂胞苷 D N M TD N A m e t h y l t r a n s f e r a s eD N A 甲基化转移酶 m i R N Am i c r o R N A微
9、小R N A 3 北京协和医学院博士毕业论文 氧化应激和D N A 甲基化在同型半胱氨酸诱导神经管畸形中的作用机制探讨 摘要 背景：同型半胱氨酸( h o m o c y s t e i n e ，H C Y ) ，是一种含硫氨基酸，是一碳代谢的中 间产物。神经管畸形( N e u r a lT u b eD e f e c t sN T D s ) 是指胚胎发育早期，由于遗传因素 和环境因素的影响，致神经管的发生和分化紊乱而出现的人类出生缺陷中最常见和 最严重的一组畸形。近年来的研究表明：体内H C Y 升高与N T D s 关系密切，但H C Y 致N T D s 的分子机制尚不完全清楚。
10、 目的：研究H C Y 导致N T D s 的新的致病机制，并针对致病机制提出保护措施，为 神经管畸形的治疗和预防提供基础。 方法：以鸡胚为动物模型，研究H C Y 对鸡胚神经管发育的影响及可能的分子机制。 通过石蜡切片和H E 染色分析H C Y 对鸡胚神经管的影响：检测H C Y 对活性氧 ( I 的S ) 、丙二醛( M D A ) 、总谷胱甘肽( G S S G ) 、超氧化物岐化酶( S O D ) 、谷胱 甘肽过氧化物酶( G P X ) 等氧化应激相关指标的影响；高效液相色谱( H P L C ) 、全 胚免疫荧光、w e s t e mb l o t 检测H C Y 对D N
11、A 甲基转移能力的影响；T a q m a nr e a lt i m e P C R 检测H C Y 处理后m i R - 1 2 4 的变化；免疫组化分析S C P l 、P a x 6 和T u j l 蛋白的 表达；通过鸡胚卵内电转对m i R 1 2 4 进行敲低和过表达，分析其对神经管发育的影 响。 结果：( 1 ) H C Y 能显著降低鸡胚的生存能力，影响胚胎外血管发育，导致脊柱裂畸 形，与抗氧化剂N 乙酰半胱氨酸( N A C ) 或胆碱( C H O ) 联合处理能部分恢复以 上表型，表明H C Y 导致的脊柱裂与氧化应激和一碳代谢异常有关。 ( 2 ) H C Y 导致R
12、 O S 明显增加，M D A 含量明显增加，M n S O D 活性和G P X 活性明 显下降，与N A C 联合处理能部分恢复以上改变。 ( 3 ) H C Y 导致基因组D N A 整体低甲基化，S 腺苷甲硫氨酸( S W ) 含量下降， S 腺苷同型半胱氨酸( S A H ) 含量上升，S A M S A H 下降，D N M T l 和D N M T 3 a 蛋 白表达下降，C H O 与H C Y 联合处理能部分恢复以上改变。 ( 4 ) N A C 与H C Y 联合处理能部分恢复H C Y 导致的基因组整体低甲基化和D N M T l 及D N M T 3 a 蛋白表达的下降，S A M 、S A H 及S A M S A H 则没有明显差别。 ( 5 ) H C Y 导致m i R 1 2 4 表达明显下调，与去甲基化药物5 氮杂脱氧胞苷( 5 A Z A ) 联合处理能部分恢复表达，表明m i R - 1 2 4
