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1、分类号：R l 卯 密级：( 秘密、机密、绝密) 学校代码：1 0 0 5 7 研究生学号：0 6 8 1 3 0 0 8 松籽油中皮诺敛酸的提取纯化与减肥功能的研究 S t u d i e so nt h eE x t r a c t i o n ，P u r i f i c a t i o na n dW e i g h tR e d u c t i o n o nP i n o l e n i cA c i di nP i n eN u t0 i l 专业名称：营养与食品卫生学( 医) 指导教师姓名：张泽生教授 研究生姓名：孙宇 申请学位级别：医学硕士 论文提交日期：2 0 0 9 年3
2、 月 论文课题来源：企业合作项目 学位授予单位：天津科技大学 天津科技大学 学位论文原创性声明 I I IILII I I I I II l r lI I I I Il Y 2 0 8 3 013 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的 成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发 表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而 使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：吾q 、g 日期：) 川年弓月坯日 知识产权和
3、专利权保护声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持 下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学； 所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后， 以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技 大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：衫小箩 日期： 加年弓月巧日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内 容，允许论文被查阅和借阅
4、。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本 学位论文。 保密lI ( 请在方框内打“”) ，在 年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密l L I ( 请在方框内打“1 J ”) 。 作者签名：计牟日期：砷年弓月F 1 剔磴轹溯钐嗍2 彳钙眇R 摘要 本文对松籽油做了较为系统的研究，并着重研究了松籽油中特有的皮诺敛 酸，为松籽油的开发利用提供理论基础。 用索氏提取法测得松籽含油率为6 5 5 。对热回流法和超声波提取松籽油的 方法进行了对比，结果表明：超声波辅助提取松籽油是一种较为理想的方法。通 过正交实
5、验得出最佳处理条件，可使提取率可达到6 1 3 5 。测定了松籽油的酸 价、皂化价及过氧化值，并通过气相色谱质谱联用法( G C M s ) 分析了松籽油 的主要脂肪酸组成，即：棕榈酸( C 1 6 ：0 ) 、硬脂酸( C 1 8 0 ) 、油酸( C 1 8 ：1 ) 、 亚油酸( C 1 8 ：2 ) 、皮诺敛酸( C 1 8 ：3 ) 、9 ，1 2 二十碳二烯酸( C 2 0 ：2 ) 、8 ， 1 l ，1 4 二十碳三烯酸( C 2 0 ：3 ) 、花生四烯酸( C 2 0 ：4 ) 及两种未知脂肪酸。 其中，皮诺敛酸的含量为1 0 6 0 。 采用尿素包合法对松籽油中皮诺敛酸进
6、行纯化。通过正交实验得出最佳条 件：混合脂肪酸：尿素为1 ：1 5 ( W W ) ，尿素：乙醇为l ：8 ( W ) ，结晶温 度为0 。C ，结晶时间是2 4 h 。在此条件下，纯化后皮诺敛酸的含量可达6 7 0 8 。 研究了皮诺敛酸对营养性肥胖小鼠的减肥作用。用高营养饲料造模，分为低、 中、高剂量组( 用皮诺敛酸含量为6 7 0 8 的混合脂肪酸2 、4 、8 9 k g d 一灌胃) 和阳性对照组( 8 9 k g d 。1 大印象减肥茶灌胃) 。实验结束后，计算L e e s 指数， 脂肪指数，肝、肾指数，测定血脂、血糖水平，将脂肪组织固定、染色后4 0 0 倍 显微镜下计数单个视
7、野内脂肪细胞个数，测量视野内脂肪细胞最大径。结果表明， 皮诺敛酸可显著( p ；一9 8 ) 石蜡( 溶点5 6 5 8 。0 )上海标本模型厂 总胆固醇试剂盒北京中生生物工程高技术公司 低密度脂蛋白胆固醇试剂盒北京中生生物工程高技术公司 高密度脂蛋白胆固醇试剂盒北京中生生物工程高技术公司 甘油三酯试剂盒北京中生生物工程高技术公司 葡萄糖试剂盒北京中生生物工程高技术公司 2 2 2 仪器 J y 9 2 2 D 超声细胞粉碎机宁波新芝生物科技股份有限公司 旋转蒸发仪R E 2 0 0 0 A上海亚荣生化仪器厂 电热鼓风干燥箱天津市天宇实验仪器有限公司 循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司
8、T D L 5 A 型离心机上海安亭科学仪器厂 多功能食品粉碎机佛山市顺德区容桂家成电器厂 电子天平( 感量0 0 0 0 1 9 ) H e r a e u s 旋涡振荡器广州仪科实验技术有限公司 T D A 8 0 0 2 型水浴锅天津市中环实验电炉有限公司 冷冻离心机美国奥立龙公司 显微镜O L Y M P U S 气相色谱仪( 7 8 9 0 1 1 ) 上海天美 V a r i a n4 0 0 0 M S 气相色谱一质谱联美国瓦里安( V a r i a n ) 公司 用仪 2 材料与方法 显微成像系统( D M B 5 5 ) 尼康E C L I P S E9 0 i 落射荧光显
9、微 镜 全自动酶标仪6 8 0 L E I C AR M2 0 1 5 组织切片机 K D H 烘片机 K D P 摊片机 K D B MI I 电脑生物组织包埋机 载玻片 9 6 孔板 2 3 方法 M O T I C 尼康公司 美国B I O R A D 伯乐 浙江金华市科迪仪器设备公司 浙江金华市科迪仪器设备公司 浙江金华市科迪仪器设备公司 浙江金华市科迪仪器设备公司 2 5 x 7 5 e m ，1m m 2 m m 厚 C o m i n gI n c o r p o r a t e dc o s t a l “ 2 3 1 松籽油制备方法 2 3 1 1 原料预处理【7 2 】 将
10、松子仁置于电热鼓风干燥箱中，8 5 4h ，以去除水分，经多功能食品粉碎机 粉碎后，备用。 2 3 1 2 松籽油的制取方法 ( 1 ) 超声波辅助提取松籽油： 加入正己烷至设定容量，置超声波探头于烧杯中，深约3c m ，设定功率、时间进 行超声波处理。处理结束后，以转速5 0 0 0r r a i n ，离心1 5r a i n 。倾出上清液，用旋转蒸 发仪回收溶剂，然后将提取物放X 0 0 5 - 1 ) 的烘箱中鼓风烘干2h ，直至前后2 次重 量差不超过0 0 0 1g 为止，按下式计算松籽油提取率。 松籽油体) = 器1 0 。 ( 2 - 1 ) 以超声波功率、时间、料液比、提取次
11、数以及误差项为影响因素，设计单因素和 正交实验L 1 6 ( 4 5 ) 。正交实验的因素水平见表2 1 ，实验设计见表2 2 。 天津科技大学硕士学位论文 表2 1 影响超声波辅助提取松籽油的因素及水平 T a b l e2 - 1I n f l u e n c e o f f a c t o r sa n dl e v e l so ne x t r a c t i o nr a t eo f p i n em u to i lb yu l t r a s o n i c t r e a t m e n t 表2 2 超声波辅助提取松籽油的正交实验设计 T a b l e2 - 2C r
12、o s se x p e r i m e n t sO ne x t r a c t i o nr a t eo f p i n em u to i lb yu l t r a s o n i c t r e a t m e n t ( 2 ) 热回流提取松籽油 将原料置于圆底烧瓶中，加入设定量的石油醚，水浴回流一定时间，冷却后，以 转速5 0 0 0r m i n ，离心1 5m i n 。倾出上清液，用旋转蒸发仪回收溶剂，计算松籽油提 2 材料与方法 取率。 以提取时间、次数、料液比及误差项为影响因素，设计单因素和正交实验L 9 ( 3 4 ) 。 F 交实验的因素及水平见表2 3 ，实验
13、设计见表3 4 。 表2 _ 3 影响热回流提取松籽油的因素及水平 T a b l e2 - 3I n f l u e n c eo f f a c t o r sa n dl e v e l so ne x t r a c t i o nr a t eo f p i n em u to i lb yd i s t i l l a t i o n 表2 4 热回流提取松籽油的正交实验设计 T a b l e2 - 4C r o s se x p e r i m e n t so ne x t r a c t i o nr a t eo f p i n em u to i lb yd i s t
14、 i l l a t i o n 2 3 2 松籽油基本理化指标的测定 2 3 2 1 松籽油粗脂肪含量的测定 索氏抽提法：【4 8 1 ( 1 ) 样品处理 将样品置于8 0 1 0 0 烘箱内4h ，待冷却后称取2g ，置于研钵中研磨细。将样品 及擦净研钵的脱脂棉一并用脱脂滤纸包扎好，勿使样品漏出。 天津科技大学硕士学位论文 ( 2 ) 抽滤 将洗净的索氏提取瓶在1 0 5 烘箱内烘干至恒重，记录重量。将无水乙醚加到提 取瓶内，约为容积的1 2 至2 3 ，将样品包放入提取管内。把提取器各部分连接好，接 口处不能漏气。水浴加热回馏6h 。控制水浴温度，每小时回流3 5 次为宜。直到用滤 纸
15、检验提取管中的乙醚液无油迹为止。 提取结束后，迅速取下提取管，用镊子把滤纸筒取出，再次连接冷却管，继续回 馏一次，若烧瓶中乙醚几乎全部移入抽屉管，立刻卸下烧瓶进行加温，将乙醚完全蒸 发掉，烧瓶外侧用纱布擦干，放入1 0 0 1 0 5 烘干1h 。再移至干燥器内放置、冷却， 冷却后称重，计算。 ( 3 ) 计算 粗月匕肪的含量似) = 斋器1 0 0 ( 2 - 2 ) 式中：W o 一接收瓶重( g ) 5 W 一提取脂肪干燥后接收瓶重( g ) ； 2 3 2 2 松籽油脂肪酸成份分析 ( 1 ) 脂肪酸甲酯化 精确称取lm L 松籽油于具塞试管中； 加入2 m L l 4 的B F 3
16、甲醇溶液，lm L 甲苯； o 在试管内充入氮气后，迅速密封； 高速振荡试管，使其中药品与松籽油充分混匀； 水浴加热，1 0 0 ，3 0m i n ； 反应结束后，冷却至室温； 用3m L 正己烷溶解出脂肪酸甲酯物，振荡混匀，加lm L 水，振摇； 静置5m i n ，移出上层液至另一试管； 用氮气吹上层液体，以帮助正己烷的挥发； 将上清置于棕色瓶中4 保存，以备气相色谱分析； ( 2 ) 气相色谱质谱联用对松籽油进行分析条件 色谱条件 色谱柱：V F 5 h t ，3 0 m x 0 2 5m m ( 内径) X O 2 5g m ( 膜厚) ；升温程序：1 2 0 保持5 m i n ， 以1 0 m i I l 升至3 0 0 ，保持2m i n ；载气( H e ) ( 9 9 9 9 9 ) 流速1m L m i n ，进样 量lu L ；分流比5 0 -
