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1、成都中医药大学 博士学位论文 松节多糖免疫促进作用及其机理的实验研究 姓名：夏隆江 申请学位级别：博士 专业：中药学 指导教师：沈映君 2007-04 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 3 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 A Absorbance value 吸光度 APC Antigen- presenting cell 抗原提呈细胞 BCG Bacille calmette- guerin 卡介苗 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 cAMP Cyclic adenosine monomphsopate 环腺苷酸, 环腺苷一磷酸 CD
2、Cluster of differentiation 分化群 cGMP Cyclic guanosine monophosphate 环磷鸟苷, 环鸟苷一磷酸 ConA Concanavalin A 刀豆蛋白 A CP Corynebacterium parvun 厌氧短棒杆菌菌苗 CR Complement receptor 补体受体 CSF colony- stimulating factor 集落刺激因子 CTL Cytotoxic T lymphocyte 细胞毒性 T 淋巴细胞 Cy Cyclophosphamide 环磷酰胺 DC Dendritic cell 树突状细胞 DEPC
3、 diethylpyrocarbonate 二乙基焦磷酰胺 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 DNFB Dinitrofluorobenzene 二硝基氟苯 DTH delayed- typehypersensitivity 迟发型超敏反应 EIA Enzyme immunoassay 酶免疫测定法 ER Endoplasmic reticulum 内质网 FACS Fluorescent activated cell sortor 荧光活化细胞分类仪 FCM Flow cytometry 流式细胞仪 FITC Fluorescein isothiocyanat
4、e 异硫氰酸荧光素 GM- CSF Granulocyte/macrophage（monocyte） colony- stimulating factor 粒细胞- 巨噬（单核）细胞 集落刺激因子 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 4 Glu glucose 葡萄糖 HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱 HC50 50% hemolysis cost 半数溶血值 HPC Hematopoietic progenitor cell 造血祖细胞 IC Immune complex 免疫复合物 ICAM Intercell
5、ular adhesion molecue 细胞内粘附分子 iDC immature DC 未成熟 D C Ig Immunoglobulin 免疫球蛋白 ig intragastric 灌胃 I p Intraperitoneal injection 腹腔注射 IL interleukin 白细胞介素 IFN Interferon 干扰素 LAK Lymphokine activated killer cell 淋巴因子活化的杀伤细胞 LD50 50% lethal dose 半数致死量 LC Langerhans cell 朗罕细胞 LPS Lipopolysaccharide 脂多糖 L
6、DC lymphoid derived subset 淋巴细胞系起源的淋巴系 D C LFA Lymphocyte function associated antigen 淋巴细胞功能相关蛋白 MBL Mannosan bond lectin 甘露聚糖结合凝集素 MDC myeloid derived subset 髓系起源的髓系 D C MHC Major histocompatibility complex 主要组织相容性复合体 M- CSF macrophage colony- stimulating factor 巨噬细胞集落刺激因子 MTT 3- (4，5- dimethyithia
7、zol- 2- y1)- 2， 5- diphenylte- trazolium bromide 3 - ( 4 , 5 ) - 双甲基- 乙- 唑噻 - ( 2 , 5 ) - 二甲基溴化四氮唑 蓝，简称唑噻蓝 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 NBS Newborn Bovine Serum 新生牛血清 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 5 NIM Neuroendocrine immunomodulation 神经内分泌免疫调节 NSS Nan Shan Song N S S NO Nitric Oxide 一氧化氮 NO2 ni
8、trogen dioxide 二氧化氮 NOS Nitric oxide synthase N O 合成酶 NK Natural killer cell 自然杀伤细胞 NF- B Nuclear factor- B 核因子B OD Optical density 光密度 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 PCR Polymerase chain reaction 多聚合酶链反应 PMA Phorbol myristate acetate 巴豆酯 PE Phycoerythrin 藻红蛋白荧光素 PKA Protein kinase A 蛋白激酶 A
9、 PKC Protein kinase C 蛋白激酶 C PM peritoneal Macrophages 腹腔巨噬细胞 PHA phytohemagglutinin 植物血凝素 PFC Plaque- forming cell 空斑形成细胞 PTK Protein tyrosine kinase 酪氨酸蛋白激酶 RBC Red blood cell 红细胞 ROS Reactive oxygen species 活性氧 RES Reticulo- endothelial system 网状内皮系统 RNA Ribonucleic acid 核糖核酸 rpm revolutions per
10、minute 每分钟转数, 转/ 分 RT- PCR Reverse transcription PCR 逆转录 P C R SA Streptavidin 链霉亲和素 SAMR SAM- resistence 抗快速老化亚系 SRBC Sheep red blood cell 绵羊红细胞 TCR T cell receptor T 细胞受体 TNFa Tumor necrosis factor a 肿瘤坏死因子 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 6 Topo I Topoismerase I 拓扑异构酶 I Th T helper 辅助( 性) T 淋巴细胞 Ti T indu
11、cibility 诱导性 T 淋巴细胞 Tc T cytotoxic 细胞毒( 性) t 淋巴细胞，杀 伤( 性) t 淋巴细胞 Ts T suppressor 抑制性 T 淋巴细胞 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 132 申明 博士学位论文 松节多糖免疫促进作用及其机理的实验研究 是本人在成都中医药大学攻读硕/博士学位期间在导师指导下完成 的，该论文著作权归成都中医药大学所有。由于本人提供了该学位论 文撰写的主要经费， 故该论文涉及的有关知识产权等， 按事先已有的 约定执行。 博士生签名： 导 师 签 名： 2007 年 4 月 30 日 成都中医药大学 2 0 0 4 级博
12、士学位论文 7 引言 松节为松科植物油松 P i n u s t a b u l a e f o r m i s C a r r . 、马尾松 P . m a s s o n i a n a L a m b . 的枝干结节。全国大部分地区均产，全年可采。晒 干，切片，生用。松节作为药物使用，始见于名医别录 ，其主治 病症为： “百节久风，风虚，脚痹疼痛。 ” 滇南本草谓其“味酸， 性平。行经络，治痰火、筋骨疼痛、湿痹痿软，强筋舒骨。 ” 本草征 要曰： “松节，味苦，性温，无毒。入肝、肾二经。舒筋止肢节之 痛，去湿搜骨肉之风。苦燥温通、能燥血中之湿。 ” 本草易读言其： “治历节风痛，疗脚弱痛
13、痹。燥血中之湿寒，漱风蛀之牙痛。 ” 本草 通玄云： “松节，搜风舒筋，燥血中之湿。 ” 本草备要则认为： “松节，燥湿，去风；松之骨也，坚劲不凋，故取其苦温之性，以治 骨节间之风湿。 ” 本草崇原说到： “松节气味苦温，无毒。主治百 邪，久风，风虚脚痹，疼痛，酿酒，主脚软骨节风。 ” 本草便读中 说：松节治肢节有功。燥湿宣风痹可去。味苦温无毒。骨强筋利病能 除。 ” 本草纲目 指出其 “筋骨间风湿诸病宜之。 ” 中华临床中药学 将其功效总结为“祛风燥湿、通络止痛。 ”松节历来被当作祛风湿药 使用，临床长期被用来治疗寒湿痹痛、关节屈伸不利等症。笔者在临 床使用松节治疗风湿性关节炎、类风湿性关节
14、炎、腰腿痛、结石等病 症时，发现其还有极好的增强免疫的作用。能快速有效的改善患者体 质，配伍治疗某些慢性疾病，有加速疾病痊愈的作用，有类似“补虚 固本”的功效。多年来用之治疗易感儿、哮喘、再生障碍性贫血、肿 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 8 瘤等疾病，确有较好疗效。经我们实验室的初步筛选发现，松节具有 免疫活性的部位是其多糖部分。 随着现代社会生活节奏的加快，环境和食物的污染加重，人们 工作压力的增加，户外运动的减少等因素，现代人的免疫力有降低的 趋势，导致肿瘤、病毒性疾病的发病率逐年上升，因此，研究和开发 具有增强和改善免疫功能的药物非常有必要。 而多糖类药物因其具有 多方
15、面的免疫活性，并且主要通过宿主起作用，没有明显的毒副作用 而受到全世界的关注。6 0多年来，人们从动物、植物、微生物中提 取分离了大量多糖和多糖类物质用作治疗或辅助治疗药物。 目前已有 3 0 0 多种多糖类化合物从天然产物中被分离提取出来，其中从植物尤 其是从中药中提取的水溶性多糖尤为重要， 已发现 1 0 0 多种中药中的 多糖类化合物具有免疫促进作用。 这类多糖已经成为当今新药的发展 方向之一 1 。中药多糖来源广泛且细胞毒性较低. 毒副作用小，因此 对中药多糖的研究己成为医药界的热点。 我们从中药松节中提取了多 糖成分，并准备从非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫方面观察 N S S 的免
16、疫药理作用，并从 N S S 对巨噬细胞释放 N O 、R O S 的影响；对补体 C 3 、I g G 、I g M 、I g A的影响；N S S对 T细胞亚群、N K 、B 、D C细胞的 影响；以及 N S S 对细胞因子的影响等方面， 揭示其是否确有免疫促进 作用， 其作用环节在哪里？为传统中药的功效和临床应用提供补充和 有价值的实验依据，丰富中药学内容，同时也为从祖国医药宝库中寻 找新的安全有效的现代免疫调节新药， 提供有用的研究思路和有益的 参考。 成都中医药大学 2 0 0 4 级博士学位论文 9 第一部分：N S S 的提取与分析 1 . N S S的提取 1 . 1生药材 松节药材购自成都五块石中药市场，经成都市药检所鉴定为油松 P i n u s t a b u l a e f o r m i s C a r r . 松节 1 . 2提取方法 松节原料（鲜品或干燥后的药材）经粉碎得松节粗颗粒，颗粒大 小 5 m m ，再加 3 1 0倍量
