《木鳖子皂甙对口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究(1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《木鳖子皂甙对口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究(1)（169页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、浙江大学动物科学学院 博士学位论文 木鳖子皂甙对口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究 姓名：Kedsirin Sakwiwatkul 申请学位级别：博士 专业：Preventive Veterinary Medicine（Microbiology and Immunology） 指导教师：Songhua HU 20090601 木鳖子皂甙对口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究 口蹄疫( F o o t a n d m o u t hd i s e a s e ，F M D ) 是一种偶蹄动物的烈性接触性传染 病，主要危害牛、羊、猪等家畜。使用F M D 疫苗是许多国家预防与控制F M D 暴发的主要手段。然而
2、有报道认为，F M D 疫苗的免疫效果并不十分理想。前期 的研究表明，将中药木鳖子中提取的皂甙( E x t r a c t i o no fC o c h i n c h i n am o m o r d i c a s e e d ，E C M S ) 和疫苗混合经注射途径免疫动物可以提高疫苗的免疫效果。木鳖子 是一个传统中药，在中国已经使用了1 0 0 0 多年。口服给药是中药的传统给药方 法。本论文的研究口服E C M S 对疫苗免疫接种的免疫调节作用，为进一步研究 开发中药木鳖子提供参考。 实验一 目的为研究口服E C M S 和南美的皂树皂甙Q u i lA ( 一种公认的) 以及
3、皮 下注射F M D V 亚洲I 型抗原对小鼠体重增重的影响。方法4 0 只小鼠随机分成4 组，每组1 0 只。E C M S 口服组小鼠在免疫前一天灌胃2 5 0r a L 含2 0 0p gE C M S 的溶液，Q u i lA 组小鼠灌服2 5 0p L 含2 0 0J a gQ u i lA 的溶液，阴性对照组小鼠同 时1 5 1 服2 5 0 L 生理盐水，空白组不作处理。小鼠采用相同方式免疫2 次，间隔 3 周。小鼠可自由采食和饮水，在实验第O 、7 、1 4 、2 8 和4 2 天分别称体重。结 果相同日龄各组间小鼠体重无显著差异。初步结论口服E C M S 、Q u i lA
4、 以及 F M D V 抗原免疫注射对小鼠体重增重没有影响。 实验二 目的观察口服不同天数E C M S 和Q u i lA 对皮下注射O 型口蹄疫抗原的体 液免疫水平的增强作用。方法将4 2 只I C R 小鼠随机分成7 组，每组6 只。组 二、三、四小鼠分别在免疫前口服1 、2 、3 次2 5 0p - L 含2 0 0 ”gE C M S 的溶液， 每天1 次，组五、六、七小鼠分别口服1 、2 、3 次Q u i lA 溶液，每次灌胃2 0 0 gQ u i lA ，每天1 次，组一在免疫前口服一次2 5 0p L 生理盐水为对照。最后1 次口服后4 8 小时，小鼠皮下注射2 0 0 “
5、L0 型口蹄疫抗原。3 周后，用同样方式 口服和免疫1 次，组一小鼠皮下注射2 0 0 l 生理盐水。二免后2 周，采血检测血 清抗F M D V 特异性I g O 水平，以及抗体亚类I g G l 、I g G 2 a 、I g G 2 b 和I g G 3 水 平。结果和初步结论免疫前1 次口服E C M S ( 2 0 0p - g ) 和Q A ( 2 0 0 “g ) 可提高 7 皮下注射F M D V 抗原诱导的血清特异性I g G 和多数I g G 亚类的抗体水平，统计 学比较差异不显著( 胗O 0 5 ) 。 实验三 目的观察口服1 次( 1 天) E C M S 和Q u i
6、 lA 对皮下注射亚洲1 型口蹄疫 抗原的免疫增强作用。方法E C M S 口服组小鼠在免疫前口服1 次2 5 0g l 含2 0 0 g gE C M S 的溶液，Q u i lA 组小鼠口服1 次含2 0 0g gQ u i l A 的溶液，对照组小鼠 在免疫前口服一次2 5 0p l 生理盐水。口服后4 8 小时，小鼠皮下注射2 0 0g lO 型 口蹄疫抗原。采用同样方式口服和免疫次，间隔3 周。二免后2 周，采血检测 血清抗F M D V 特异性I g G 水平，以及抗体亚类I g G l 、I g G 2 a 、I g G 2 b 和I g G 3 水 平，并分离脾淋巴细胞检测淋巴
7、细胞增殖指数和细胞培养上清中细胞因子的分 泌。结果Q u i lA 口服组小鼠l g G 水平显著高于对照组I g G ( P O 0 5 ) C o n s i d e r i n g t h es a f e t y ，i m m u n o m u d u l a t o r ye f f e c t ，a n dt h ef r e q u e n ta l s od o e sn o tr e q u i r e do f E C M Sa n dQ u i lAi nm i c ed e m o n s t r a t e di np r e s e n ts t u d y ，t
8、 h i se x t r a c td e s e r v e sf u r t h e r i n v e s t i g a t i o nt oe v a l u a t ei t sp o t e n t i a li m p r o v e m e n to fF M D v a c c i n a t i o nf o ro n ed a y o r a la d m i n i s t a r t i o n L a t e rE x p e r i m e n t st os t u d yt h ee f f e c t so fo r a la d m i n i s t
9、 r a t i o no fs a p o n i n s e x t r a c t e df r o mt h eb a r ko fQ u i l a j as a p o n a r i aM o l i n a ( Q u i lA 1a n dM o m o r d i c a c o c h i n c h i n e n s i s ( L o u r ) S p r e n g e rs e e d s ( E C M S ) o nt h ei m m u n er e s p o n s e so f m i c et O v a c c i n a t i o na
10、g a i n s tf o o t a n d m o u t hd i s e a s e ( F M D ) w a si n v e s t i g a t e d I C Rm i c ew e r e i m m u n i z e dt w i c ew i t hi n a c t i v a t e dF M D Va n t i g e na tt w o w e e ki n t e r v a l s T w e n t yf o u r h o u r sb e f o r ei m m u n i z a t i o n ，t h em i c eh a da l
11、r e a d yb e e no r a l l ya d m i n i s t e r e dQ u i lA 2 A b s t r a c t ( 2 0 0P gi n2 5 0r t Ls a l i n e ) o rE C M S ( 2 0 0 “gi n2 5 0 止s a l i n e ) B l o o ds a m p l e sw e r e c o l l e c t e d2w e e k sa f t e rb o o s t i n gi n j e c t i o n R e s u l t si n d i c a t e dt h a ts e r
12、 u mI g Gl e v e li n m i c ei m m u n i z e dw i t hF M D Va n t i g e na f t e ro r a la d m i n i s t r a t i o no fQ u i lA ，a n d p a r t i c u l a r l ys e r u mI g Ga n dt h es u b c l a s s e sI g G1 ，I g G 2 a ，I g G 2 ba n dI g G 3l e v e l s ，a s w e l la sp r o d u c t i o no fI F N - 丫a
13、 n dI L 一5b ys p l e n o c y t e si nm i c ei m m u n i z e dw i t hF M D V a n t i g e na f t e ro r a la d m i n i s t r a t i o no fE C M S w e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h o s ei nt h e c o n t r o lm i c eo r a l l ya d m i n i s t e r e dp h y s i o l o g i c a ls a l i n
14、es o l u t i o n T h i ss u g g e s t e dt h a to n e d a yo r a la d m i n i s t r a t i o no fE C M Sa n dQ u i lAs i g n i f i c a n t l y ( 氏O 0 5 ) p r e c o n d i t i o n e d m i c e a n di n c r e a s e db o t hT hla n dT h 2i m m u n er e s p o n s e st ov a c c i n a t i o na g a i n s tF M
15、 D T h eo r a la d ju v a n te f f e c to fE C M So nv a c c i n a t i o no fb i v a l e n tc o m m e r c i a l v a c c i n ea g a i n s tF M D V ( s e r o t y p e sOa n dA s i a1 ) W a ss t u d i e di nm i c e T h i r t y - t w oI C R m i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o4g r o u p sw i
16、 t he a c hc o n s i s t i n go f8a n i m a l s T h e a n i m a l sw e r et h e no r a l l ya d m i n i s t e r e dE C M S ( 2 0 0 r t gi n2 5 0r t Ls a l i n e ) i ng r o u p s3o r 2 5 0 Ls a l i n ei ng r o u p2 ，o rS Ci n j e c t e dw i t hE C M S ( 5 0l x gi n10 0p Ls a l i n e ) i n g r o u p s4 A f t e rt h a t ，t h ea n i m a l si ng r o u p s2 t o4 ) w e r eS Ci m m u n i z e dw i t h10 0l a Lo f o i l a d j u v a n t e db i v a l e n tF M D Vv a c c i n
