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1、<p><p>&lt;p&gt;&amp;lt;p&amp;gt;&amp;amp;lt;p&amp;amp;gt;用荧光分光光度法测定中 药配方颗粒对自由基的清 除作用 答辩人：张承 导师：蔡继文教授 告 僧 哗 聂 垃 梅 穷 引 的 腿 糕 靖 悯 绍 诛 全 盼 剐 沉 贿 缘 雌 酋 睁 倒 畴 凹 萄 灸 逝 硫 兆 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测
2、 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 一选题意 义 1. 自由基是一种外层轨道上含有未配对电 子的原子、原子团或呈特殊状态的分子 。 2. 机体内自由基大量产生或清除过缓,使积 累超过临界水平后, 就会对机体产生损伤 ，各种炎症、癌症、脏器损伤、老化等 都与自由基密切相关 。 (一) 自由基概述及其危害 哪 酞 橇 雨 肠 谩 屈 首 斟 免 惋 撤 襄 典 缩 弗 挥 哟 佛 诫 揪 他 香 掌 台 龄 慷 燕 惶 拣 赴 吵 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定
3、 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 (二) 中药以及中药配方颗粒 中药抗氧化剂具有经济和毒、副作用小 等明显的优点, 在中草药中, 有许多药物都对 自由基有清除作用。 中药配方颗粒品质优良，效果客观，使 用简便快捷，必将成为21世纪中医药配方的 主流。因此研究它的药性有着重要的意义。 卓 冒 噎 智 快 在 蓟 瞧 烙 葱 绵 她 唤 幸 验 匿 心 轿 次 继 栗 拓 伺 切 华 仓 悄 捉 氏 釉 忌 欺 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗
4、粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 (三) 测定自由基清除率的方法 电子自旋共振法、高效液相色谱法、 化学发光法、紫外分光光度法、荧光分 光光度法等。 本实验采用用仪器简单，操作方便的 荧光分光光度法对中药消除自由基的性 能进行研究。 咽 苔 程 开 库 缴 淡 哩 墟 字 滦 师 痰 藻 奈 谴 感 绰 最 脊 肆 坚 云 暖 案 蓖 断 屠 无 今 呸 泅 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 1.实验原理 Fe2+EDTA在
5、弱碱性介质中可还原溶解氧产 生 &amp;amp;amp;#183;OH，其进攻对苯二甲酸产生强荧光羟基化产 物2羟基对苯二甲酸(HOTP) . &amp;amp;amp;#183;OH清除剂加入 后, 导致HOTP 的生成量减少,从而体系荧光强度 明显降低。 实验内容 船 港 癌 厨 梨 袁 俘 毒 髓 毯 联 变 侮 抢 磐 胎 吻 崎 扶 跌 东 采 芹 峨 盲 蛾 战 垄 承 曳 逆 砾 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对
6、自 由 基 的 清 除 作 用 2. 仪器 日本 岛津RF-5301PC荧光分光光度计 ，激发波长316 nm，测定发射光谱 。 3. 试剂及反应体系 对苯二甲酸钠溶液(1. 0 &amp;amp;amp;#215;10- 4 mol/ L); Fe2 + ( 硫 酸亚铁溶液,1. 0 &amp;amp;amp;#215; 10- 3 mol/ L)； EDTA(1. 0 &amp;amp;amp;#215;10- 3 mol/ L)；磷酸钠缓冲溶液(0. 2 mol/ L ;pH =7. 4) , 山茱萸等中药配方颗粒。 依次加入对苯二甲酸溶液
7、0.50 mL, EDTA 溶液0. 3 mL, 中药颗粒溶液0.5mL；Fe2 + 溶液0.30 mL, 缓 冲液2.00 mL ,稀释至10.0 mL ,反应6 min后测定体 系荧光强度。 榜 鹃 琅 甸 申 纯 辟 疮 入 椅 圾 刺 赵 肃 蝉 廊 态 梨 号 惊 云 栋 翻 滋 裤 蠕 喻 嫂 昔 序 趟 体 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 4.实验内容及其结果讨论 (1).不加中药时体系的发射光谱 1 2 3 由此
8、可见,羟基对苯二甲酸是体系的唯一的强荧光物质，自 由基或者是对苯二甲酸本身不产生荧光。峰值位置为426nm 1:对苯二甲酸 +Fe2+EDTA 2:与1相比,无对苯二甲 酸钠 3:与1相比,体系中没有 加入Fe2+ 踞 洒 放 佣 犁 酋 嚣 喉 浅 涣 恒 烹 驴 茁 菩 浪 松 行 摩 箕 信 划 界 柬 取 恍 睹 罗 俄 硫 垦 述 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 (2)测定中药自身的发射光谱，激发波长316nm 为减小
9、误差，选择了在426nm处的 荧光强度值相对较小的中药: 半支莲，山茱萸，茶多酚，黄芩， 红花，桂枝，地龙，柴胡，猪苓 浆 噶 佃 灰 咏 鹏 滥 洛 氨 驼 铬 伎 织 解 壬 墙 团 械 披 黍 涕 瑞 阎 龟 句 业 潍 怂 恤 魁 镭 酝 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 (3)对各种中药进行抑制自由基的测定 无中药 荧光强 度F0 徊 续 蜘 击 篙 匙 诈 剪 探 告 贴 瞪 竣 汹 情 谍 浆 恍 寝 糯 协 靳 磺
10、 孔 贰 癣 割 月 迸 霹 秽 剿 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 中药药名 C= 0.03g/L 中药药自身荧荧 光强度F 加入中药药后 荧荧光强度F 清除率（） F0-(F- F)/F0 黄芩63.803154.98474.1 红红花109.52241.01662.6 桂枝83.272211.28463.6 地龙龙88.537233.33858.8 柴胡87.727231.92359.0 猪苓59.979217.03555
11、.3 各种中药对自由基的清除率 末 红 响 姬 微 宰 谴 迭 榷 镭 宅 闲 给 虏 蹿 债 恤 链 敦 掀 绥 翰 钥 物 褐 讥 烘 哪 肩 球 将 之 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 (4)用不同浓度的半支莲，山茱萸和茶多酚进 行研究 无中 药 半支莲对自由基的抑制作用 潭 盯 欠 伐 聂 阉 凰 闷 灾 紧 泼 炮 寺 哭 轻 连 耶 第 蓝 斧 彭 挑 悍 睹 例 柴 海 粤 擞 蕉 延 马 用 荧 光 分 光 光
12、度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 山茱萸对自由基的抑制作用 无中 药 龄 钱 俭 邹 径 界 兽 剿 罚 冠 荣 翌 闺 泽 狱 骸 觉 琳 散 币 酌 茫 睡 摔 敷 鳖 火 革 验 杂 肢 吓 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 茶多酚对自由基的抑制作用。 无中药 鼻 幌 捻 胯 鬼 括
13、陇 搪 污 谰 化 惹 抓 题 雨 效 腔 坟 苛 冠 类 牙 奄 拾 悄 辑 抠 绑 象 奶 瘁 油 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 （5).山茱萸和半支莲不同比例的混合物对自 由基的 抑制作用 荧光强度值没有明显的提高或降低，没有发 现有明显的协同或负协同效应。 空白 至 胯 鸽 斜 揍 榷 答 胆 丑 刷 账 绦 粟 腆 葱 启 仟 怖 硒 亚 瞅 阎 裹 汀 深 俩 灵 滦 审 藏 厨 餐 用 荧 光 分 光 光 度 法
14、 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 茶多酚 半支莲莲 山茱萸 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 0.10189.573.60.10120.346.70.10200.577.9 0.08175.4 68.10.08131.251.00.06189.973.8 0.06159.1 61.80.06118.946.20.04170.466.2 0.04143.7 55.80.04129.950.
15、50.02141.354.9 0.02126.2 49.00.01103.540.20.0193.3236.2 0.008113.644.10.00886.833.7 0006100.039.00.00685.933.4 0.00497.437.80.00480.431.2 0.00288.434.40.00273.528.5 不同浓度的中药及其清除率 橙 很 晴 扰 筋 郭 粮 锗 钾 烫 胆 转 灵 譬 雪 疏 舆 软 凹 派 怀 跃 骏 课 淘 嫩 谋 取 涟 讽 芬 鸥 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分
16、光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 5. 数据处理 茶多 酚 半支 莲 山茱 萸 斜率 3.07 相关系数 0.999 斜率 15.3 相关系 数 0.974 斜率 8.94 相关系数 0.978 跺 散 戊 及 焙 乍 犬 轰 鱼 辜 餐 骂 烧 挑 曳 蒋 忻 姥 戒 癸 暮 卑 雅 游 攘 堂 碎 酷 喉 敬 橙 检 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 ?用对苯二甲酸羟基化反应体
17、系可以评价中药 清除 &amp;amp;amp;#183;OH 的作用能力。可以粗略的得到一定 浓度下各种中药的清除率。 ?可以看出在一定的浓度范围内，中药颗粒浓 度与其清除率大致成线性比例。 ?在较高浓度范围山茱萸的清除自由基能力好 于半支莲，而在低浓度时相反。 三 实验结论 针 焊 顽 堪 们 响 良 追 实 谎 批 陇 帚 褂 舰 桐 址 弗 缔 婉 衷 踊 渍 糊 鞋 鹏 店 糊 级 唬 酿 烟 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 用 荧 光 分 光 光 度 法 测 定 中 药 配 方 颗 粒 对 自 由 基 的 清 除 作 用 创新点 当前对中药的提取物的清除自由基研究已 经比较多。而对使用的越来越广泛的中药配方 颗粒的清除自由基的研究报道较少。本实验采 用了市售的中药颗粒配方进行研究。 短 遍 僧 盛 奔 儿 多 推 卡 考 匹 哄 必 狂 村 鸿 枢 饿 佰 阎 酉 堑 搬 宴 岭 &amp;amp;lt;/p&amp;amp;gt;&amp;lt;/p&amp;gt;&lt;/p&gt;</p></p>
