《罗氏电化学发光讲解》由会员分享，可在线阅读，更多相关《罗氏电化学发光讲解（75页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、罗氏电发光罗氏电发光 ECL1010/2010/E170 罗氏(Roche)Elecsys系列 lElecsys有三种系列产品,1010/2010和E170 l前身为德国宝灵曼产品 l与日本日立公司联合开发其Elecsys系列 lElecsys1010为Roche自己设计生产 lElecsys2010和E170为日本日立公司OEM产品 l配套试剂使用ECL技术,为另一家美国IGEN公司 的专利技术 ECL检测技术原理 l二价的三联吡啶钌在电场的作用下,失去一个电子氧 化成三价的三联吡啶钌 l同时,在电场作用下,三丙胺也失去一个电子被氧化, 然后脱氢成三丙胺自由基 l三丙胺自由基传递一个电子给三
2、价的三联吡啶钌使 之进入激发态 l激发态的三联吡啶钌不稳定,以发射一个波长为 620nm的光子的形式释放能量而回到基态三联吡啶 钌不被消耗,即发光标记物可循环发光 ECL 原理图 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-CH2CH2CH3 + e-CH2CH2CH3 CH3CH2CH2-N-C-CH2CH3 CH2CH2CH3 + H + CH3CH2CH2-N-H CH2CH2CH3+ CH3CH2CHO 氧化 电极 . + . . H 氧化 Ru(bpy)33+ Ru(bpy)32+ +Ru(bpy)32+ 还原 三丙胺(tripropyla
3、mine,TPA) ECL的测定模式 ECL其它技术特点 l标记物三联吡啶钌分子量小,可标记任何 抗原,抗体及核酸,水溶性,高稳定,确保反 应的高效和稳定,无噪音干扰 l链霉亲和素-生物素包被技术 l聚苯乙烯直径2.8微米的磁性微球 电化学发光标记物- 三联吡啶钌 N羟基琥珀酰胺(NHS)酯 直径2.8微米 磁性微粒子固相 亲和素- 生物素 亲和素- 生物素 ECL的优势 注:试剂表现不仅仅表现在灵敏度和宽线性,还有特异性, 重现性,线性回归,携带率,准确性和临床符合性等多种表现 l灵敏度高(10-1210-18) l检测线性宽(7个数量级) Elecsys 2010系统浏览 系统控 制中心
4、样品转盘 样品和试剂探针 试剂搅拌棒 蒸溜水 液体废物 固体废物 反应管和 Tip头 TPA和洗液 检测系统 机械抓手 探针 试剂转盘 Elecsys 2010系统浏览 内置样品盘 外置样品盘 Elecsys 2010系统浏览 样品转盘:30个位置 试剂转盘:18个位置, 15个试剂 位置(另外3个放预稀释液和预 处理液),运行时不能随意添加, 非冷藏温度 Elecsys 2010系统浏览 试剂样品探针,使用一次性 Tip头,一个测试23只,仍 需蒸溜水请洗 混匀搅拌棒,蒸溜水清洗 Elecsys 2010系统浏览 反应杯架:60X3(最多5架) Tip头架:120X3(最多5架) 孵育架:3
5、2个位置(有限) 机械抓手,容易机械故障 Elecsys 2010系统浏览 固体废物:800个(反应杯和Tip 头),不能运行时更换 蒸溜水:2个探针,1个搅般棒 液体废物:不能运行时更换 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 1010系统浏览 系统控 制键盘 样品和试剂转盘 样品和试剂探针 试剂搅拌棒 蒸溜水 TPA和洗液 探针 废液桶 Elecsys 1010系统浏览 6个试剂位置,手工开盖,不能 放同种试剂 66个样品位置,2个急诊位置 不能随时加样和试剂 反应杯位置128个 不能随时添加 手工加入和清除 Elecsys 1010系统浏览 样
6、品探针与搅拌棒在同一臂上, 影响检测速度 反应液探针,蒸溜水清洗 污染 Elecsys 1010系统浏览 特设急诊位 标准品和质控 试剂和条码 二点定标 二点定标 二点标准品 ECL流动比色池 光电倍增管 测量池 磁颗粒结合的 标记物 液流 激发区 磁铁 工作 电极 未结合 标记物 计数电极 ECL 应用技术 测量池 电极电极 工作电极 磁铁 光电倍增管 ECL 应用技术 测量池 电极电极 工作电极 磁铁 光电倍增管 TPA TPA TPA TPA ECL 应用技术 测量池 电极电极 工作电极 磁铁 光电倍增管 TPA TPA TPA TPA ECL 应用技术 测量池 电极电极 工作电极 磁铁
7、 光电倍增管 TPA TPA TPA TPA ECL 应用技术 测量池 电极电极 工作电极 磁铁 光电倍增管 Elecsys的弱点 l流动读数池高携带率 lPMT和电极寿命短(10万次),费用高 l磁性颗粒比重比水重,试剂不均匀 l冲洗方式表面被动冲洗,如酶标板,有残留 l蒸溜水探针清洗高携带率 l试剂混匀搅拌棒,有携带 l一次清洗Hook效应 l质控只控制低值或中值区域 l链霉亲和素-生物素包被技术增加对样品的要求 Elecsys的干扰 生物素 链霉亲和素 HAMA效应 Hook效应 流动池 AxSYM与Elecsys主要性能比较 AxSYMElecsys优势 仪器类型立式台式符合现代实验室
8、自动化需要 方法学三种技术单一技术具有多种技术，可针对待测物质的理化性质的不 同选择采用不同的方法,获得最优化结果 运行方式随机,任意,持续,急诊批式,随机,急诊真正第三代全自动仪器,符合实验室自然工作流程, 可任意增加样品,试剂和消耗品 测试方式一步法,二步法,三步法 ,夹心法和竞争法 一步法,夹心法(大多为一 步法) 根据待检物理化性质的不同灵活选择不同的检测 原理和测试方式加以组合以取得最佳实验结果 包被载体高分子材料,0.5磁颗粒.2.8悬浮性好,试剂更均匀 信号检出方式 速率法和终点法终点法速率法快且准确 冲洗方式灵活,立体主动冲洗固定,表面被动冲洗根据不同被检物的特点设计不同冲洗次
9、数,冲洗量, 全面彻底的清洗,避免非特异性反应和前带效应 反应时间灵活固定(9,9,9分钟)根据待检物理化性质的不同灵活选择不同的反应 时间以取得最佳实验结果 检测速度80120T/h6090T/h提高工作效率 样本位一次6090个,随时添加 30,66,75个不等大量样品位,各种样品管类型,并可随时添加 试剂位20个,随时添加6,15个,不可添加大量试剂位,并可随时添加,适合大批量,多项目连续 运行 消耗品可随时添加有条件限制可连续进行大批量运行 AxSYM与Elecsys主要性能比较 AxSYMElecsys优势 反应区每个测试独立反应区流动池结构AxSYM每个测试均在独立的反应空间内进行
10、 ，互相之间没有干扰且利于同时使用不同的 检测方法。ECL采用流动池，测试之间存在 干扰，影响结果 试剂混匀方式仪器自动震荡混匀搅拌棒混匀避免污染 试剂稳定性28尽效期,室温连续 112336小时,开瓶效期与 标贴效期一致 28尽效期,室温累积20 小时,开瓶效期12周(28 ) 雅培试剂不受试剂开瓶影响,并可长期上机,无 须冷藏,试剂更稳定 定标周期稳定一个批号试剂730天,Elecsys1010 37天, 每个试剂盒 试剂稳定性的表现 标准品1,2和6点定标,可使用无限 不同批号试剂 2点,只能使用5个批号试剂, 开瓶12周,上机5小时 提供用户多种选择,节省标准品的费用和试剂 费用,并保
11、证结果高质量 质控高,中,低三种,配L-J图低,中二种,都在低,中范围配合L-J图全面控制分析的整个线性范围 灵敏度(TSH)0.01uIU/ml(第三代)0.014uIU/ml(第三代)极好的功能灵敏度 精密度批内2.001.001.00 Roche模块式仪器-免疫E170 l生化和免疫组合式仪器 l模块包含 控制单元控制整个系统 D2400生化,2400T/h,16assays,3500T/瓶 核心单元放置样品,300支样品/2个架 P800生化,800T/h,44assays,1200T/瓶 核心单元回收样品, 300支样品/2个架 E170免疫,170T/h,25assays,100/
12、200T/盒 ISE900/1800电解质,钾,钠,氯,900/1800T/h E170的模式图 D2400 Module 至2400 test/hr 生化 16 光通道用 BM/Hitachi 试剂分配 技术 P800 Module 至 800 test/hr 生化 至 44 通道用 BM/Hitachi试剂分配 技术 ISE 900 / 1800 Module 900 or 1800 test Na+, Cl+, K+ 缓冲液进入: 2 trays 300样本 持续进入架子 做 STAT 端 自动重测和反 射重测. 缓冲液进入 下载 300 样 本用2 trays. 持续样本架 下载 自动
13、重测和 反射重测. 控制中心: Windows NT 触摸/鼠标操 控 远程诊断 E170 Module E170的模式图(轨道) 1.急诊样品插入点 2.样品输入 3.主轨道 4.每个模块的运行轨道 5.分样位置 6.样品重运行 7.样品输出 8.重运行轨道 n异相免疫测定, 电化学发光技术 n两个测量池，工作量最大达170 个测试/小时 n25 个试剂通道 , 温度控制在20 n液面、凝块和泡沫探测 n一次性吸样头避免交叉污染 n一次性反应杯避免交叉污染 n吸样头和孵育杯的一次最大上载量均为1000个 ，仪器运行过程中可补充吸样头、孵育杯和 蒸馏水 n54个孵育位置（37 oC） n试剂与
14、Elecsys1010/2010通用(大部分) 44Ext_3.ppt /3/Dec 12, 1998/AR E170模块: 基本特征 竞争模式和夹心模式的测定 最大170 测试/小时 常规160 测试/小时 最小150 测试/小时 需要预处理和预稀释的测定 (如 B12,Folate, a-HBcIgM) 典型85 测试/小时 E170模块: 工作量 E170 分析检测模块 E170系统浏览 吸头加样区 微粒混匀棒 漩涡混匀器 25个试剂通道 ，试剂冷藏(常 温) 吸样针 清洗前处理 E170系统浏览 试剂加样针 E170系统浏览 流动池,TPA探针 E170系统浏览 试剂探针 E170系统
15、浏览 磁珠搅拌棒 E170系统浏览 样品探针 E170系统浏览 样品预处理区 E170系统浏览 加样区,丢弃固体废物区 E170系统浏览 反应杯和Tip头供应区 E170系统浏览 孵育转盘 E170系统浏览 试剂转盘 E170系统浏览 供应中心 E170系统浏览 公共试剂区 E170系统浏览 固体废物箱 E170系统浏览 进样和出样轨道 E170 ECL技术存在问题 l电解产生的光子,通电时结合物仍在电极引发光发射, 以及流动比色池的设计引起高背景 l这些都会降低检测敏感度(TSH的敏感度比i2000差一 个数量级),降低检测速度(2个流动比色池速度只有 170测试/小时),对结果产生干扰(F
16、DA官方网站有关 E170的甲状腺产生错误结果,肝炎试剂有严重携带率, 降低的灵敏度和特异性,HIV试剂无法检测O亚型而被 PEI拒绝在欧洲市场使用,肿瘤指标结果不准确, AFP, CEA有严重的Hook效应) E170 免疫模块 25 个试剂位,100 / 200 测试包装 ECL技术,IGEN International, Inc.专利, 通用试剂 ,E170, 2010 & 1010 300 样本上 2 trays,30 架/ 150 管每个 tray, Roche/Hitachi 917 rack, 5 位 速度:170 680 test/hr (1 4 modules),所有分析 18 min , 除了 B12 和 Folate 27 min. 消耗品:1000 pipette tips ,1000 反应管,至 12 magazines 含 84 assay cups &
