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1、促黄体生成素检测试剂(胶体金免疫层析法)注册技术审查指导原则(年第号) 作者： 日期：2 附件1促黄体生成素检测试剂（胶体金免疫层析法）注册技术审查指导原则本指导原则的编写目的是指导和规范促黄体生成素检测试剂（胶体金免疫层析法）产品注册申报过程中审查人员对注册资料的技术审评，同时也可指导申请人的产品注册申报。本指导原则是对促黄体生成素检测试剂（胶体金免疫层析法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作
2、为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围本指导原则适用于采用双抗体夹心胶体金免疫层析技术原理对人体尿液中促黄体生成素进行定性或半定量体外检测的产品。根据体外诊断试剂注册管理办法（国家食品药品监督管理总局令第5号）、食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知（食药监械管2013242号），促黄体生成素检测试剂（胶体金免疫层析法）属于二类医疗器
3、械，分类代码为6840。二、注册申报资料要求（一）综述资料促黄体生成素（Luteinizing Hormone）是促性腺激素的一种糖蛋白激素，简称促黄体生成素，亦称促间质细胞激素（ICSH）。是由脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种大分子糖蛋白，由和两个亚基非共轭结合形成，其中亚基具有决定其分子特异性的构型特征，可以识别适当的靶组织，并与特定的受体结合，进而发挥其生理功能，主要作用是刺激卵巢内成熟卵子的释放。正常女性体内保持有微量的促黄体生成素，在月经中期促黄体生成素激素的分泌量快速增加，形成一个“促黄体生成素峰”，并在此后2460小时内刺激卵巢内成熟卵的释放。因此，“促黄体生成素峰”前后13天内妇
4、女最易受孕。1.预期用途：通过定性或半定量检测女性尿液中促黄体生成素的水平，以预测排卵时间，用于指导育龄女性选择最佳受孕时机或指导安全期避孕。2.产品描述2.1产品原理：本试剂运用双抗体夹心胶体金免疫层析技术定性或半定量检测人体尿液中的促黄体生成素。检测时，当待测样本中的促黄体生成素浓度等于或高于临界值时，将与胶体金标记的抗-促黄体生成素单克隆抗体反应形成复合物，在层析作用下反应复合物沿着硝酸纤维素膜向前移动，被硝酸纤维素膜上检测区（T）预先包被的抗-促黄体生成素单克隆抗体捕获，最终在检测区（T）有红色条带出现即为阳性，提示“促黄体生成素峰”出现。当待测样本中促黄体生成素浓度低于临界值时，在检
5、测区（T）形成一条颜色浅于质控区（C）的红色反应线或无红色反应线出现，此时检测结果为阴性，表示非“促黄体生成素峰”。无论待测样本中是否含有促黄体生成素，质控区（C）都会形成一条肉眼可见的红色反应线，这是判断样本量是否足够、层析过程是否正常的标准，同时也作为本试剂的内控。胶体金法半定量试剂的显示指示系统则是在此基础上，对结果判断的方法有所不同。半定量试剂主要是通过样本检测线的实际色度与试剂盒配套的标准检测线色度卡进行色度对比，记录相应的色度数值，绘制促黄体生成素曲线，从而得到使用者自己的“促黄体生成素峰”值。2.2主要原材料及来源：应明确产品主要原材料（如所用抗体，硝酸纤维素膜）的生产厂家和纯度
6、级别。2.3工艺流程：生产企业应详细明确产品的生产工艺流程，明确工艺流程中的关键工艺、特殊过程，明确需在洁净环境中生产的工艺以及对应的环境级别。3.有关生物安全性的说明：人源性材料须对有关传染病（HIV、HBV、HCV、TP等）病原体检测予以说明，并提供相关的证明文件。其他动物源及微生物来源的材料，应当提供相应的说明文件，证明其在产品运输、使用过程中对使用者和环境是安全的，并对上述原材料所采用的灭活等试验方法予以说明。4.有关产品主要研究结果的总结和评价：总结主要原材料研究、主要生产工艺及反应体系的研究、分析性能的评估及产品稳定性研究等验证的情况。5.同类产品上市情况介绍。包括同类产品在国内外
7、批准上市的情况。相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。对于新研制的体外诊断试剂产品，需要提供被测物与预期适用的临床适应证之间关系的文献资料。（二）主要原材料的研究资料（如需提供）1.试剂所用抗体的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料。如抗体为申请人自制，其工艺必须相对稳定，应详述抗体的名称及生物学来源，申请人对该抗体技术指标的要求（如外观、纯度、蛋白浓度、效价等），确定该抗体作为主要原材料的依据；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请；应详述抗体的名称及生物学来源，外购方名称，提交外购方
8、出具的抗体性能指标及检验证书，详述申请人对该抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据。2.其他主要原辅料的选择及验证资料，如硝酸纤维素膜/醋酸纤维膜、胶体金、反应缓冲液、在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料（如：牛血清白蛋白等），申请人应详述每一原辅料技术指标的要求以及确定该原辅料作为主要原辅料的依据。若为外购，应详述每一原辅料的外购方名称并提交外购方出具的每一原辅料性能指标及检验证书。应参照金标类检测试剂注册技术审查指导原则（食药监办械函20133号）原材料质量控制的内容进行相关研究。3.企业内部参考品的原料选择、制备、定值过程及试验资料。（三）主要生产工艺及反应体
9、系的研究资料（如需提供）1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。企业应采用经过验证，能够保证产品质量的生产工艺。2.产品基本反应原理介绍。3.抗体包被工艺研究，申请人应考虑如包被液量、浓度、时间等指标对产品性能的影响，通过试验确定上述指标的最佳组合。4.实验体系反应条件确定：申请人应考虑反应时间、反应温度、膜孔径大小（或移行速度）等条件对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。5.体系中反应时间的确定：申请人应考虑产品加样端浸入样本液时间、样本加样后观察时间对产品检测结果的影响，通过实验确定最佳的加样时间、观察时间。6.半定量产品可包括比色卡的相关生
10、产内容。（四）分析性能评估资料企业应提交在产品研制阶段对试剂进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、内控标准、试验数据、统计分析等详细资料。对于促黄体生成素检测试剂，建议着重对以下性能进行分析研究。1.定性产品1.1临界值的确定用空白对照液和含有10mIU/mL、25mIU/mL、50mIU/mL促黄体生成素标准品的样品液分别测定同批号试纸，每个浓度测定3条，结果显示临界值应为25mIU/mL。1.2分析特异性1.2.1交叉反应用于促黄体生成素定性检测试剂交叉反应验证的激素种类及浓度主要考虑为：200mIU/mL的促卵泡激素（FSH）标准品样品液和250IU/mL的促甲状腺素（TSH）
11、标准品样品液。1.2.2干扰物质潜在的干扰物质主要包括：乳糜尿、血尿、胆红素阳性、浑浊的尿液以及相关药物。1.3阳性/阴性参考品企业内部阳性/阴性参考品应可溯源到国家标准品。1.4.钩状（HOOK）效应目前，促黄体生成素检测试剂大多采用夹心法的原理检测样本，考虑到方法学的缺陷，有必要对钩状（HOOK）效应进行考虑，如图1所示。图1 免疫复合物（IC）沉淀量与抗原抗体量的关系建议采用高浓度的促黄体生成素抗原参考品进行梯度稀释后由低浓度至高浓度开始检测，每个梯度的抗原稀释液重复35份，将显色深度随浓度升高反而变浅时的浓度作为出现钩状效应时促黄体生成素抗原的最低浓度，建议产品说明书上明示出现钩状效应
12、时促黄体生成素抗原的最低浓度。1.5重复性建议选取包括临界值在内的多个浓度样品进行多次检测，不同浓度样本的检测结果应一致，显色度应均一。在分析试剂重复性时，不应使用强阳性样品或明显阴性的样品，否则无法客观地评价其检测效果。1.6批间差建议选取临界值附近的样品，用三个批号的促黄体生成素检测试剂，每个批号抽取相同数量，按照说明书步骤操作，对重复性进行检测，三个批号的检测结果应一致，显色度均一。1.7人抗鼠抗体（HAMA）效应如果用到的抗体来源为鼠抗，则应考虑人抗鼠抗体（HAMA）效应。鼠源性单抗对人体具有异种蛋白的免疫原性，在人体内半衰期较短，多次使用可引起人抗鼠抗体（HAMA）的产生，从而使其应
13、用受到限制。注：可参考文件EP7-A2临床生化干扰测试。1.8校准品溯源及质控品赋值（如涉及）校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等。应参照GB/T 214152008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性的要求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度计算记录，提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。1.9其他需要注意的问题如注册申请中包括不同适用机型，需要提交在不同机型上进行上述项目评估的试验资料及总结。如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异
14、，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。2.半定量产品建议申报产品至少具备以下性能指标，具体指标要求及实验方法则由申报单位根据自己产品的特性制定及验证。2.1准确度。2.2最低检出量。2.3重复性。2.4批间差。2.5特异性（应包括尿液的本底影响）。2.6校准品溯源及质控品赋值（如涉及）。校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等。半定量产品所用到的标准比色卡，应提供相应的溯源性资料。2.7其他需要注意的问题（五）
15、阳性判断值或参考区间确定资料应当详细说明阳性判断值确定的方法或依据，说明确定阳性判断值所采用的样本来源，并提供阳性判断值确定的详细试验资料及总结。半定量产品则应根据医学上促黄体生成素的不同分泌期分别进行参考区间的研究。应明确研究采用的样本来源、详细的试验资料、统计方法等。参考值范围可参考公认的权威资料/临床比对试剂，但应当进行验证。验证样本数量应不低于120例。不同样本类型（随机尿、晨尿等）应分别进行研究。研究结论应与产品说明书【参考区间】的相应描述保持一致。（六）稳定性研究资料稳定性研究资料主要涉及两部分内容：考核试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者主要包括实时稳定性、高温加速破坏稳定性、运输稳定性及开封稳定性（如涉及）等研究，样本稳定性则应考虑尿液标本的受影响因素，如收集尿液的时间、
