出凝血检查_上海交通大学医学院医学检验系

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1、实验 出凝血检查 上海交通大学医学院 余文红 （一）血标本的采取应（一）血标本的采取应 注意的问题注意的问题 1. PT1. PT、APTTAPTT凝血实验检查均使用静脉凝血实验检查均使用静脉 血。采血人员应技术熟练，以防止血。采血人员应技术熟练，以防止 组织损伤，外源性凝血因子进入针组织损伤，外源性凝血因子进入针 管。管。 2 2一般血液采集，进入容器至进行实一般血液采集，进入容器至进行实 验所用的时间越短，所分析的凝血验所用的时间越短，所分析的凝血 因子被保护得越好。从输液三通管因子被保护得越好。从输液三通管 取出血的做法不可取。取出血的做法不可取。 3 3取血时病人应松驰，环境温暖，防取

2、血时病人应松驰，环境温暖，防 止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能止静脉挛缩，止血带的压力要尽可能 小，取血时，拉针栓的速度要慢而均小，取血时，拉针栓的速度要慢而均 匀，使血液平稳地进入注射器，防止匀，使血液平稳地进入注射器，防止 气泡的产生。气泡的产生。 4 4一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分一旦取样完毕，立即与抗凝剂充分 混合，一般提倡使用真空采血管。混合，一般提倡使用真空采血管。 5 5用硅化玻璃或塑料注射器采血。考用硅化玻璃或塑料注射器采血。考 虑结果的精确性，应将试管刻度的虑结果的精确性，应将试管刻度的 可能误差控制在既定体积的可能误差控制在既定体积的10%10%以内以内 。 6.6.采血

3、后标本在低温保存且在一定时间范采血后标本在低温保存且在一定时间范 围内。围内。 7. 7. 国际血液学标准化委员会（国际血液学标准化委员会（ICSHICSH） 、国际血栓与止血委员会（、国际血栓与止血委员会（ICTHICTH） 推荐使用推荐使用3.2g/dl3.2g/dl（含（含2H2O2H2O）或）或 0.109mol/L0.109mol/L的枸橼酸钠作为凝血因的枸橼酸钠作为凝血因 子检查的抗凝剂。子检查的抗凝剂。 8. 8.抗凝剂在血标本的绝对含量可改抗凝剂在血标本的绝对含量可改 变血浆中钙离子浓度，进而影响试变血浆中钙离子浓度，进而影响试 验结果，因此应根据患者红细胞比验结果，因此应根据

4、患者红细胞比 例（例（HctHct）状况随时调整抗凝剂用量）状况随时调整抗凝剂用量 。 （二）应用试剂应注意（二）应用试剂应注意 的问题的问题 1.1.组织凝血活酶工作制剂的国际敏感组织凝血活酶工作制剂的国际敏感 指数（指数（ISIISI），为了使不同敏感性的），为了使不同敏感性的 组织凝血活酶在检测组织凝血活酶在检测PTPT中能得到同中能得到同 样的结果，必须要制定一个共同的样的结果，必须要制定一个共同的 敏感性指标。敏感性指标。 2.2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使凝血活酶和部分活化凝血活酶的使 用步骤必须严格按照说明书进行。用步骤必须严格按照说明书进行。 通常在使用前必须充分混匀试剂，

5、通常在使用前必须充分混匀试剂， 以使微粒重新均匀悬浮于液体中。以使微粒重新均匀悬浮于液体中。 3.3.试剂准备过程中应该使用去离子水试剂准备过程中应该使用去离子水 。 4.4.正常对照血浆通常将多份健康人血正常对照血浆通常将多份健康人血 标本混在一起，以弥补个体误差。标本混在一起，以弥补个体误差。 （三）使用实验器材应注意（三）使用实验器材应注意 的问题的问题 1. 1. 玻璃器皿的要求：贮存和测试时应玻璃器皿的要求：贮存和测试时应 选用干净、没有划痕的试管。选用干净、没有划痕的试管。 2. 2. 温度的要求：人工测定终点法要求温度的要求：人工测定终点法要求 水浴箱的温度必须保持在（水浴箱的温

6、度必须保持在（371371） ，并且周围照明设备要好，便于，并且周围照明设备要好，便于 读取终点。读取终点。 （四）实验操作应注意的问题（四）实验操作应注意的问题 1. 1. 许多试验误差都来源于技术的错误许多试验误差都来源于技术的错误 。在实验技术、试剂、温度及。在实验技术、试剂、温度及pHpH值值 上很微小的变化都会导致试验结果上很微小的变化都会导致试验结果 明显的变化。明显的变化。 2. 2. 手工法手工法PTPT或试管法或试管法CTCT检查时，倾斜检查时，倾斜 试管动作一定要轻，角度要小，以试管动作一定要轻，角度要小，以 减少血液与管壁的接触面积。减少血液与管壁的接触面积。 3. 3.

7、 血液凝固主要是酶催化的反应，所血液凝固主要是酶催化的反应，所 以实验过程中要严格控制理想的以实验过程中要严格控制理想的pHpH 环境和溶液的离子强度。环境和溶液的离子强度。 4. 4. 试验结果准确还取决于所用的反应试验结果准确还取决于所用的反应 物的量、加入顺序和不同反应物的物的量、加入顺序和不同反应物的 孵育时间。孵育时间。 5. APTT5. APTT、PTPT需乏血小板血浆。需乏血小板血浆。 6. 6. 试验前检查血浆是否有溶血、黄疸试验前检查血浆是否有溶血、黄疸 、脂血和出现凝块。、脂血和出现凝块。 7. 7. 报告方式：报告方式： n n 以以PTPT的秒（的秒（s s）数报告。

8、）数报告。 n n 以患者以患者PTPT（s s）/ /正常对照（正常对照（s s）的比）的比 （PTRPTR）报告。）报告。 n n 在口服药物治疗监控时以在口服药物治疗监控时以INRINR报告。报告。 n n ICSHICSH规定，不再用百分比（活动度）规定，不再用百分比（活动度） 报告。报告。 n n APTTAPTT以秒报告。以秒报告。 19871987年年WHOWHO提出提出PTPT值用值用INRINR（ international normalized ratiointernational normalized ratio国际国际 标准化比值）作为标准化比值）作为PTPT结果报告形

9、式，并结果报告形式，并 用以作为抗凝治疗监护的指标。用以作为抗凝治疗监护的指标。 INR=INR=病人病人PTPT（s s）/ /正常人平均正常人平均PTPT （s s）ISI ISI PTR=PTR=受检者受检者PTPT（s s）/ /正常对照正常对照PTPT（s s ） INR=PTRINR=PTRISI ISI ISIISI：国际敏感指数（：国际敏感指数（ international sensitivity international sensitivity indexindex）1 11.91.9 CTCT、PTPT、APTTAPTT、 RTRT、FgFg、TTTT 凝凝 血血 时时

10、间间 测测 定定 C TC T 目的：掌握玻璃试管法凝血时目的：掌握玻璃试管法凝血时 间测定的方法间测定的方法 原理：原理： 离体静脉血与玻璃表面接触后离体静脉血与玻璃表面接触后 ，血中，血中XIIXII因子活化并启动内源性因子活化并启动内源性 凝血途径，最终生成纤维蛋白而使凝血途径，最终生成纤维蛋白而使 血液凝固所需的时间。血液凝固所需的时间。 器材：器材： n n 6mm6mm直径玻璃试管直径玻璃试管3 3支支 n n 静脉采血器材静脉采血器材 n n 3737恒温浴箱恒温浴箱 n n 秒表秒表 步骤：步骤：3 3支试管各支试管各1ml1ml血，每隔血，每隔0.5min0.5min倾倾 斜

11、，第一管计时后，立即观察第二、三斜，第一管计时后，立即观察第二、三 管并计时，直至血液凝固。管并计时，直至血液凝固。 结果判断：从血液刚进入注射器至第结果判断：从血液刚进入注射器至第3 3管管 凝固所需时间即为凝血时间。凝固所需时间即为凝血时间。 n n 正常参考值：正常参考值：4 41212分钟分钟 n n 报告方式：报告方式：CT X.XminCT X.Xmin（玻璃试管法（玻璃试管法 ） 注意事项：注意事项： n n 试管应洁净干燥，抽血应试管应洁净干燥，抽血应“ “一针见血一针见血” ” 且血液中不含泡沫。且血液中不含泡沫。 n n 温度恒定为温度恒定为3737，倾斜试管角度应，倾斜试

12、管角度应 在在3030左右左右。 评价：评价： n n 凝血时间曾用玻片法测定，但由于凝血时间曾用玻片法测定，但由于 毛细血管采血，易混入组织液而使毛细血管采血，易混入组织液而使 凝血时间正常，属于淘汰方法。凝血时间正常，属于淘汰方法。 n n 延长：严重内源性凝血途径凝血因延长：严重内源性凝血途径凝血因 子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝子有缺陷；血中抗凝物质增多；肝 素治疗素治疗 n n 缩短：高凝状态（缩短：高凝状态（DICDIC早期）早期） 凝凝 血血 酶酶 原原 时时 间间 P TP T 原理：原理： 在乏血小板血浆中加入组织因在乏血小板血浆中加入组织因 子和钙离子（钙凝血活酶）后，血子

13、和钙离子（钙凝血活酶）后，血 浆发生凝固的时间即为凝血酶原时浆发生凝固的时间即为凝血酶原时 间（间（PTPT）。）。 步骤：步骤： n n 取空腹静脉血取空腹静脉血1.8ml1.8ml加入含有加入含有 0.2ml109mmol/L0.2ml109mmol/L枸橼酸钠的试管中枸橼酸钠的试管中 混匀备用。混匀备用。 n n 抗凝血以抗凝血以3000r/min3000r/min离心离心10min10min分离分离 血浆血浆 n n 将试剂、正常人混合血浆、待测血将试剂、正常人混合血浆、待测血 浆与浆与3737预热预热5min5min。 n n 血浆血浆0.1ml0.1ml加入混匀的试剂加入混匀的试剂

14、0.2ml0.2ml， 开动秒表计时。开动秒表计时。 正常参考值：正常参考值： n n PTPT：11111313秒秒 n n PTRPTR：10.1510.15 n n INRINR：0.80.81.51.5 报告方式：报告方式： n n PTPT：X.XsX.Xs，正常人血浆，正常人血浆X.XsX.Xs n n PTRPTR：X.XX.X n n INRINR：X.XX.X 注意事项：注意事项： n n 试管应洁净干燥，抽血应试管应洁净干燥，抽血应“ “一针见血一针见血” ” ，抗凝剂与血液比例（，抗凝剂与血液比例（1 1：9 9）应准）应准 确。取血后确。取血后4h4h内完成测定。内完成

15、测定。 n n 钙凝血活酶必须标有国际敏感指数钙凝血活酶必须标有国际敏感指数 （ISIISI），），ISIISI越接近于越接近于1.01.0越敏感。越敏感。 n n 标本测定前应先测定正常人混合血标本测定前应先测定正常人混合血 浆，其浆，其PTPT值在允许范围内才能测定值在允许范围内才能测定 样本。样本。 评价：评价： 血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用血浆凝血酶原是一种筛选试验，是用 来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶 原和凝血因子原和凝血因子V V、VIIVII、X X的缺陷或相应抑制物的缺陷或相应抑制物 的存在，也用于监测口服抗凝治疗时引起的的存在

16、，也用于监测口服抗凝治疗时引起的 凝血酶原和因子凝血酶原和因子VIIVII、X X水平的下降。水平的下降。 实质：实质： 对检测样本（血浆）中存在凝血激对检测样本（血浆）中存在凝血激 酶时的再钙化反应，这种过程包括了因子酶时的再钙化反应，这种过程包括了因子 VIIaVIIa、组织因子、磷脂、钙离子对凝血酶、组织因子、磷脂、钙离子对凝血酶 原的活化，凝血酶裂解纤维蛋白原和纤维原的活化，凝血酶裂解纤维蛋白原和纤维 蛋白单体的聚集交联。蛋白单体的聚集交联。 活化部分凝血活酶时间活化部分凝血活酶时间 测定测定 APTTAPTT 原理：原理： 用白陶土激活用白陶土激活XIIXII因子、脑磷因子、脑磷 脂代替血小板磷脂，测定乏血小脂代替血小板磷脂，测定乏血小 板血浆加入板血浆加入Ca2Ca2+ +后凝固所需时间 后凝固所需时间 。 步骤：步骤： n n 采血采血 空腹静脉血空腹静脉血1.8ml+0.2ml 109mmol/L1.8ml+0