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1、<p><p>&lt;p&gt;&amp;lt;p&amp;gt;&amp;amp;lt;p&amp;amp;gt; Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 中药药保肝作用及机理研究 的思路与方法 南通市第三人民医院 窦窦志华华 2011-11-19 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s H
2、ospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 药药效物质质基础础及作用机理是中药药及中药药复方研究 的核心，也是中药现药现 代化的关键键。但由于中药药化学成 分的复杂杂性，以及有效成分对对机体作用的协协同性，研 究十分困难难，目前还还没有一种理想的研究方法，已成 为为制约约中医药现药现 代化发发展公认认的瓶颈问题颈问题 。寻寻找适于 中药药复杂杂体系的研究方法，阐阐明中药药药药 效物质质基础础及 作用机理，一直是中药药研究的关键键科学问题问题 ，已列入 国家中长长期科学和技术发术发 展规规划纲纲要、“重大新药创药创 制 ”科技重大专项专项 和中医药创药创 新发发展规规划纲纲要相
3、关领领域 和主题题的重要内容。 中药药药药 效物质质基础础及作用机理研究的意义义 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 对于中药药效物质基础 有多种提法，如： n有效部位群 n活性物质群 n功能组分集 n有效成分组 n有效组合成分（部位） n有效部分 n有效系统 对对中药药药药 效物质质基础础的认识认识 实质都是有效成分的组合，即 中药发挥疗效的不是单个或几 个有效成分，而是多种成分， 这些成分可能属于不同的化学 类型，也可以是不同的作用机 制物质，通过不同途径实现协 同作用
4、，达到治疗疾病的目的 。有效成分组更能反映中药有 效成分存在的状况。 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 所谓有效成分组，是指中药所含有的所有与临 床应用目的密切相关的药理活性成分。有效成分组 不是中药的有效部位，也不是有效组分，更不是独 立的有效成分。有效部位、有效组分或有效成分， 通常是指独立的一部分，这些成分并不能代表中药 的全部药理作用，中药发挥作用的成分往往存在于 多个部位或多个组分中，而且同一个部位或组分中 可能也含有非有效成分，因此，有效成分组是指复 方中含有
5、的全部有效成分，而不考虑所分布的部位 。 对对中药药药药 效物质质基础础的认识认识 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 中药药效物质基础的研究，应涉及制剂制备过程、消化 道运行过程、菌丛对化学物质的影响、体内转运代谢， 从而阐明有效成分的生成、吸收、分布、代谢的全过程 。 对对中药药药药 效物质质基础础的认识认识 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 简
6、化 处 理 相关性分析 三个化学层次 成分分析 药理试验 四个药理水平 一个 结合 研 究 结 果 两 个 基 本 说 清 中药及复方 还原性验证 讲讲清复方中有效的化学 成分；讲讲清复方中有效 化学成分所起的治疗疗作 用 药药物 有效部分 化学成分 整体动动物实实 验验 组织组织 器官 细细胞亚细亚细 胞 分子生物学 中药药药药 效物质质基础础及作用机理研究思路与方法 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 中药药药药 效物质质基础础及作用机理研究思路与方法 Nantong
7、Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 生物色谱是将活性生物大分子（酶、受体、传输蛋白等 ）、活性细胞膜、甚至活细胞等固着于色谱担体上作为 固定相的一种新兴色谱技术。这种色谱系统能够模仿药 物与生物大分子、靶体或细胞之间的特异性、立体选择 性相互作用，可以排除大量非作用杂质成分的干扰，为 中药有效成分的筛选及作用机制的阐明提供了全新的思 路和方法。根据作为固定相的生物活性物质的不同，生 物色谱法又分为分子生物色谱法、生物膜色谱法（或仿 生物膜色谱法）、细胞生物色谱法等。另外还建立了细 胞膜特异
8、性结合中药提取液中成分并加以分析的细胞膜 固相色谱。 中药药药药 效物质质基础础及作用机理研究思路与方法 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 中药药保肝作用及机理研究的思路与方法 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 中药药保肝作用及机理研究的思路与方法 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hosp
9、ital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 单味中药的药效物质基础研究较中药复方要相 对容易，可以按照前面讲到从三个化学层次，四个 药里水平，采用化学分离和药效跟踪相结合的方法 对中药药效物质基础进行研究。下面以“赤芍保肝 退黄药效物质基础研究”为例对这一方法进行探讨 。 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 赤芍中的化学成分以单萜单萜 及其苷类类为为主，总总称赤芍 总总苷，其中芍药药苷、芍药药内酯酯苷含量较较高。此外，还还
10、 含有丹皮酚、三萜类萜类 、酚及其苷类类、甾醇及其苷类类、 鞣质质、黄酮类酮类 、挥发挥发 油等。 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 总体方案设计图 活性组组分筛选筛选 3个组组分药药效试验试验 比较较 HPLC法同 时测时测 定芍 药药苷、芍 药药内酯酯苷 含量方法 建立及应
11、应 用 活性部位成分分析和组组分分离 n醇提部位与水提部位的含量测测定 n大孔树树脂从醇提部位分离赤芍总总苷 n醇提部位3个组组分分离 活性组组分及其主要成分作用机理研究及药药效验验 证证 n赤芍总总苷对对小鼠胆汁分泌、戊巴比妥钠钠睡眠时时 间间及UDPG-T活性的影响； n芍药药苷的保肝退黄作用评评价 小鼠肝 内胆汁 淤积积黄 疸模型 复制 活性部位初筛选筛选 醇提部位与水提部位药药效试验试验 比较较 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 u试验用药制备 赤芍饮片 70乙醇
12、回流提取 回流液 水提部位 回收乙醇并浓缩干燥后加水煎煮并浓缩 药渣 醇提部位 uHPLC测定两部位中芍药苷、芍药内酯苷含量 一、赤芍保肝退黄活性部位初步筛选筛选 醇提部位与水提部位药药效试验试验 比 较较 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 生理盐水灌胃 CCL4造模 CCL4
13、造模，药物干预 u观察指标 血清学指标：总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、丙 氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP) 。 肝组织病理变化半定量分析 u统计学处理 数据以? x&amp;amp;amp;#177;s表示，使用wstata7.0统计软件包进行单因素方差分析，组 间比较采用Scheffe法检验，以P0.05为显著性判断界值。 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third
14、 People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 c c b a a a c aP0.01 vs normal group；bP0.01，cP0.05 vs model group（以下所有柱形图均同） 小鼠血清TBIL、DBIL及TBA测定结果（ ? x&amp;amp;amp;#177;s，n=10） u结果 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third
15、People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 c b b a a a b c b c b 小鼠血清ALT、AST及ALP测定结果（ ? x&amp;amp;amp;#177;s，n=10） Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三
16、医院 AB CD 醇提部位和水提部位对胆汁淤积肝损伤小鼠肝组织的影响 （HE&amp;amp;amp;#215;300倍） A-正常对照组 B-模型对照组 C-醇提部位中剂量组 D-水提部位中剂量组 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 a c bb 以上研究结结果提示：赤芍提取物具有一定的保肝退 黄作用
17、，其主要药药效物质质主要存在于醇提部位。 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 本部分首先建立了HPLC法同时测定赤芍中芍药苷、芍 药内酯苷的方法，并对赤芍饮片及醇提部位和水提部位进行 了相关成分的含量测定，结果表明，芍药苷、芍药内酯苷等 单萜苷类化合物基本转移至醇提部位，与药效试验结果有一 定相关性，提示该类成分有可能为赤芍保肝退黄的活性成分 。为进一步跟踪研究活性成分，本章随后采用D101型大孔树 脂考察了从醇提浸膏中纯化赤芍总苷的技术参数，并将醇提 部位进一步分离为加水
18、溶解后的沉淀部分、赤芍总苷及其余 部分，为下一步继续跟踪有效组分提供了实验材料。 二、赤芍活性部位成分分析及组组分分离 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 1、含量测测定方法的建立及赤芍饮饮片、醇提部位和 水提部位的含量测测定 a-albiflorin；b-paeoniflori
19、n 对照品（A）、赤芍饮片（B）、醇提部位（C）和水提部位（D）HPLC色谱图 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 部位饮片 用量 (g) 饮片中含量(g)提取量(g)转移率(%) 内酯苷芍药苷内酯苷芍药苷内酯苷芍药苷 醇提部位 3000.4210.5 0.419.4297.6289.71 水提部位 0.0150.0783.570.74 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Ho
20、spital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 赤芍醇提浸膏30g 加蒸馏水1000mL超声溶解，离心 上清液 含芍药内酯苷0.118mg&amp;amp;amp;#183;mL-1 芍药苷2.572mg&amp;amp;amp;#183;mL-1 沉淀 上柱样样品液的制备备 2、大孔树树脂从醇提部位赤芍总总苷分离 基于成分分离的中药药保肝作用及机理研究 Nantong Third People&amp;amp;amp;#39;s Hospital 南通市第三人民医院 南通大学附属南通第三医院 芍药内酯苷、芍药苷吸附曲线 动态动态 吸附曲线线考察 基于成分&amp;amp;lt;/p&amp;amp;gt;&amp;lt;/p&amp;gt;&lt;/p&gt;</p></p>
