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1、制备猪血小肽发酵条件优化的研究 方俊1 ，卢向阳墉，邱业先2 ，蒋红梅1 ，莫瑾1 1 湖南农业大学生化与发酵工程实验室，湖南长沙4 1 0 1 2 8 ： 2 仲凯农学院，广州 5 1 0 0 0 0 ；T e l ：0 7 3 l 一4 6 3 5 2 9 2 ，E - m a i l ：f a n g j u n l 9 7 3 y a h o o c o m a n 本研究在探讨了发酵时间、温度、接种量、起始p H 值，装料量等单因素对猪 血发酵法制备小肽影响的基础上，通过二次回归旋转组合设计，利用S A SR S R E G 程序进行响应面分析，探讨影响猪血小肽生成的各种因素及其相互
2、作用，以期优 化猪血发酵制备功能性小肽的作用条件。 材料与方法 主要材料：、A 3 2 菌株本实验室筛选保存；新鲜猪血( 屠宰后3 0 m i n 以内) 。 彳D 主要实验方法：水解度D H = 半1 0 0 o A 为猪血发酵后三氯乙酸( T C A ) 可溶氮：B 为猪血发酵前三氯乙酸( T C A ) 可溶氮； C 为猪血发酵前总氮含量 实验设计 T a b l e1F a c t o r sa n dl e v e r s o fe x p e r i m e n t 2 结果与讨论 2 1 回归方程的建立与显著性分析 根据二次回归旋转组合试验设计，利用D P SV 3 0 1 版统
3、计软件对实验结果 进行统计分析，以O 5 为显著水平，可以得到相关回归系数，其回归方程为： Y = 3 7 9 7 4 2 0 0 5 0 0 5 8 X 1 0 4 8 3 2 8 X 2 + 0 2 6 4 6 0 X 3 1 2 5 9 7 7 X 1 z 一1 7 1 9 3 9 X 2 z 0 7 1 1 7 7 X 3 2 + 0 4 1 2 5 0 X 1 X 2 0 1 3 7 5 0 X 1 X 3 + O 5 8 7 5 0 X 2 X 3 并进一步对回归方程进行分析，其系数显著性结果： x l2 、x 2 2 对水解度的影响极为显著( p O 。0 1 ) ；x l 、x
4、 2 、x 3 、x 3 2 、x l * x 2 、 x 2 * x 3 对水解度的影响为显著( p O 5 ) 。以下是Q = 0 5 0 显著水平剔除不显著项后， 简化后的回归方程： Y = 3 7 9 7 4 2 0 0 5 0 0 5 8 X 1 0 4 8 3 2 8 X 2 + 0 2 6 4 6 0 X 3 。1 2 5 9 7 7 X 1 2 1 7 1 9 3 9 X 2 2 - 0 7 1 1 7 7 X 3 2 + 0 4 1 2 5 0 X 1 X 2 + O 5 8 7 5 0 X 2 X 3 2 2 显著交互作用对发酵猪血蛋白水解度的影响 从图1 中可以看出，当接
5、种量在2 4 9 一4 6 6 ，发酵温度2 8 1 9 3 3 5 5 时 1 2 9 对猪血蛋白降解为小肽最为有利，其理论预测值) 7 为3 7 5 。 从图2 中可以看出，当接种量在2 8 2 一4 4 8 ，发酵时间为5 4 o o 一 6 7 1 7 h 时对猪血蛋白降解为小肽最为有利，其理论预测9 - 为3 7 6 9 。 “ T - - I N H I = 2 ：2 ：# 譬一“。 从图3 中可以看出，当培养温度在2 8 0 5 3 3 0 3 “ C ，时间5 3 1 6 6 9 6 6 h 时对猪血蛋白降解为小肽最为有利，其理论预测值1 9 1 - I 为3 7 5 3 。
6、2 3 利用回归方程对发酵条件的优化 T a b l e2 r e q u e n c yl i s to f1 2p r o j e c t sw h o s eP Ha b o v e 兰鱼二_ 塑 P l u se q u a l 0 3 3 3 0 3 3 3 S t a n d a r de r r o r 0 1 8 0 0 1 3 6 9 5 的d i s t r i b u t ei n t e r v a l 0 6 8 6 0 。0 2 0 0 6 0 0 O 0 6 7 x l x 2 分析结果表明，最高值的各个因素组合为接种量4 ，培养温度3 1 ，发 酵时间6 0 h
7、 ，理论预测删为3 7 9 7 ，由表2 可知该组合实验值为3 7 9 5 6 ， 说明通过响应面分析建立的模型能够较精确对本实验中A 3 2 发酵猪血进行预报， 通过响应面分析来优化发酵条件是可信的。 3 结论 环境因子对A 3 2 发酵猪血有着显著影响，通过响应曲面法进行试验设计， 1 3 0 可以充分观察不同因子间相互作用对发酵过程的影响并优化发酵工艺，这有利 于提高猪血小肽的产量，缩短生产周期，实现发酵过程的数字化控制，同时响 应面分析也为微生物预报预测提供了一条有效的途径H 3 。 国家自然科学基金资助项目( 3 0 2 7 0 9 7 6 ) ；湖南农业大学创新团队基金资助项目( 0 4 T D 0 1 ) 1 3l
