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1、 硕士学位论文 冬凌草甲素预处理对离体肝切除自体肝移植 大鼠缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 刘文渊 刘文渊 指导教师 别 平 教授 第三军医大学西南医院肝胆外科研究所,400038 申请学位级别 硕士科学学位 专业名称外科学(普外) 论文提交日期 2011 年 10 月 论文答辩日期2011 年 12 月 学位授予单位和日期 第三军医大学 2011 年 月 答 辩 委 员 会 主 席 评 阅 人 二 一 一 年 十 二 月 分类号分类号 密密 级级 公开公开 学学 号号 2008224 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在 导师
2、指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别 加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究 成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料， 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 日期： 第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有 权保留并
3、向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查 阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外） ，可 以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 目 录 中英文缩略词表 1 英文摘要 2 中文摘要 4 论文正文 冬凌草甲素预处理对离体肝切除自体肝移植大鼠缺血再灌注损伤的保护作 用及机制研究. 6 第一章 前 言 6 第二章 材料和方法. 8 第三章 结 果 .16 第四章 讨 论 .29 第五章 结 论 .32 第六章 参考文献33 致 谢 .37 文献综述 Keapl-Nrf2/ARE 信号通路与肝缺血再灌注损伤38 参考文献 .
4、44 攻读学位期间主要的研究成果及学术论文51 第三军医大学硕士学位论文 1 中英文缩略词表 英语缩写 英语名称 中文名称 OP oridonin pretreatment 冬凌草甲素预处理 SO sham operation 假手术 IRI ischemia reperfusion injury 缺血再灌注损伤 Nrf2 nuclear factor E2p45-related factor2 NF-E2 相关因子 2 SOD Superoxide dismutase 超氧化物歧化酶 Keapl Kelch-like ECH associating protein1 Kelch 样 ECH
5、相关蛋白 1 HO-l heme oxygenase 1 血红素加氧酶 l ARE antioxidant response element 抗氧化反应元件 MPO myeloperoxidase 髓过氧化物酶 GSH-Px glutathione peroxidase 谷胱甘肽过氧化物酶 GSH glutathione 谷胱甘肽 ALT alanine transaminase 丙氨酸转氨酶 AST aspartate transaminase 天冬氨酸转氨酶 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 DAB diaminobenzidine 33二氨基联苯胺
6、 HE hematoxylin and eosin 苏木精和伊红 SVC suprahepatic vena cava 肝上下腔静脉 IVC inferior vena cave 肝下下腔静脉 PV portal vein 门静脉 SDS sodium dodecyl sulfate 十二磺基硫酸钠 PAGE polyacrylamide gel eletrophoresis 聚乙烯酰胺凝胶电泳 第三军医大学硕士学位论文 2 A Study of the Causes and the Protection of Oridonin Preconditioning On Extracorporea
7、l Liver Resection and Partial Liver Autotransplantation Rat With Ischemia Reperfusion Injury ABSTRACT Objective:To discuss the protective effects on hepatic ischemia reperfusion injury (IRI) and the influence on the Nrf2/Keap1-ARE signal pathway by oridonin preconditioning in rats after extracorpore
8、al liver resection and partial liver autotransplantation. Method:Establish extracorporeal liver resection and partial liver autotransplantation model of rats. 54 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups on the basis of the different drugs administrated before liver resection:
9、 18 rats in sham-operated group (SO)，18 rats in control group with saline pretreatment (CT) and 18 rats in oridonin preconditioning group (OP). The animals were killed at 2h ， 6h ， 24h after autotransplantation liver reperfusion or sham operation respectively. Plasma samples were gathered for AST an
10、d ALT test; Part of the liver tissues were made in paraffin-embeded speciments for detecting histological change (HE). Liver tissues MPO，SOD，GSH and GSH-Px activities were determined. The liver Nrf2 and HO-1 expressions were defined by western blot analysis. Results: Firstly，compared with the SO gro
11、up，CT group at 2h，6h，24h after partial liver autotransplantation reperfusion：(1) Liver was obvious edema，hemorrhage，and neutrophil infiltration；(2) Liver MPO activity was increased(P0.01)，SOD activity was decreased(P0.01)，Liver GSH and GSH-Px levels were significantly decreased (P0.01， P0.01)；(3) Se
12、rum AST and ALT were significantly increased (P0.01，P0.01)；(4) Expressions of Nrf2 and HO-1 in the 1iver tissues were enhanced (P0.01，P0.01). Secondly，compared with the CT group，OP group at 2h，6h，24h after partial liver autotransplantation reperfusion：(1) The pathological injuries of liver was impro
13、ved； (2)Liver MPO activity was decreased(P0.01)，SOD activity was significantly enhanced 第三军医大学硕士学位论文 3 (P0.01)， Liver GSH and GSH-Px levels were elevated significantly (P0.01，P0.01)； (3) Serum AST and ALT were significantly decreased(P0.01，P0.01)；(4) Expressions of Nrf2 and HO-1 in the 1iver tissue
14、were increased (P0.05，P0.01). Conclusion: (1) Extracorporeal liver resection and partial liver autotransplantation can lead to severe hepatic ischemia reperfusion injury，the augment of oxyradical is one of the main causes. (2)Oridonin pretreatment has significantly protective effect on hepatic ische
15、mia reperfusion injury induced by extracorporeal liver resection and partial liver autotransplantation ， attributable to the protection through activation of the Nrf2/Keap1-ARE signal pathway. Key Words: Extracorporeal liver resection and partial liver autotransplantation， ischemia reperfusion injur
16、y， oridonin， Nrf2/Keap1-ARE signal pathway 第三军医大学硕士学位论文 4 冬凌草甲素预处理对离体肝切除自体肝移植 大鼠缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 摘 要 目的：目的：探讨冬凌草甲素(oridonin)预处理对大鼠离体肝切除自体肝移植缺血再灌注 损伤的影响及 Nrf2/Keap1-ARE 信号通路的作用。 方法：方法：建立大鼠离体肝切除联合自体肝移植动物模型。雄性 SD 大鼠共 54 只，根 据术前药物预处理的不同，随机分为假手术模型(sham operation group，SO 组)，生理 盐水对照组 (control group，CT 组)和 oridonin 预处理组(oridonin pretreatment group， OP 组)，每组 18 只。分别于大鼠离体肝切除自体肝移植再灌注后或假手术组术后 2h、 6h、24h 各时间点处死各组大鼠，检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)水平、丙氨酸转氨酶 (ALT)；HE 染色肝脏切片做病理组织学检
