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1、药物眼刺激性指导原则及试验设计考虑要点 眼的结构 眼的结构 眼球的组成. 包括眼球壁、眼内腔和内容物、神经、血管等组织 1.眼球壁主要分为外、中、内三层 内层为视网膜，是一层透明的膜，也是视觉形成的神经信息传递的第 一站。具有很精细的网络结构及丰富的代谢和生理功能。视网膜的视轴 正对终点为黄斑中心凹。黄斑区是视网膜上视觉最敏锐的特殊区域，直 径约1-3mm，其中央为一小凹，即中心凹。黄斑鼻侧约3mm处有一直径 为1.5mm的淡红色区，为视盘，亦称视乳头，是视网膜上视觉纤维汇集 向视觉中枢传递的出眼球部位，无感光细胞，故视野上呈现为固有的暗 区，称生理盲点。 中层又称葡萄膜，色素膜，具有丰富的色
2、素和血管，包括虹膜、睫状 体和脉络膜三部分。 虹膜：呈环圆形，在葡萄膜的最前部分，位于晶体前，有辐射状皱褶称 纹理，表面含不平的隐窝。不同种族人的虹膜颜色不同。中央有一2.5- 4mm的圆孔，称瞳孔。 睫状体前接虹膜根部，后接脉络膜，外侧为巩膜 ，内侧则通过悬韧带与晶体赤道部相连。 脉络膜位于巩膜和视网膜之间。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其 含有的丰富色素起遮光暗房作用。 外层由角膜、巩膜组成。 前1/6为透明的角膜，其余5/6为白 色的巩膜，俗称“眼白”。眼球外层起维持眼球形状和保护眼内组 织的作用。角膜是接受信息的最前哨入口。角膜是眼球前部的透 明部分，光线经此射入眼球。角膜稍呈椭圆形，
3、略向前突。横径 为11.5-12mm，垂直径约10.5-11mm。周边厚约1mm，中央为 0.6mm。角膜前的一层泪液膜有防止角膜干燥、保持角膜平滑和 光学特性的作用。 角膜含丰富的神经，感觉敏锐。因此角膜除 了是光线进入眼内和折射成像的主要结构外，也起保护作用，并 是测定人体知觉的重要部位。 2. 眼内腔和内容物 眼内腔包括前房、后房和玻璃体腔。三者均透 明，与角膜一起共称为屈光介质。 房水由睫状突产生，有营养角膜、晶 体及玻璃体，维持眼压的作用。 晶体为富有弹性的透明体，形如双凸透 镜，位于虹膜、瞳孔之后、玻璃体之前。 玻璃体为透明的胶质体，充满 眼球后4/5的空腔内。主要成分为水。玻璃体
4、有屈光作用，也起支撑视网 膜的作用。 3.视神经、视路 视神经是中枢神经系统的一部分 视网膜所得到的视觉信息，经视神经传送到大脑。 视路是指从 视网膜接受视信息到大脑视皮层形成视觉的整个神经冲动传递的径路 。 4. 眼附属器 眼附属器包括眼睑、结膜、泪器、眼外肌和眼眶 刺激性试验 定义 刺激性是指非口服给药制剂给药后对给药部位产生的可逆性 炎症反应，若给药部位产生了不可逆性的组织损伤则称为腐 蚀性。刺激性试验是观察动物的血管、肌肉、皮肤、粘膜等 部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变性或坏死 等局部反应。 刺激性试验设计中应考虑的问题 1 实验动物的选择 依据拟采用的试验模型和观察指标选
5、择试验动物，一般每个试验选择 一种动物进行评价。 2 给药的频率与期限 给药频率和期限应依据拟定临床应用的情况来决定。重复给药的制剂， 一般每天给药一次，给药期限最长不超过4周。单次给药的制剂可用单次 给药的方法进行试验。 3 可逆性观察 为明确毒性反应的性质，建议进行停药后恢复期的观察。局部毒性反 应的可逆性评价应包括局部及相关部位的反应。 4 受试物 受试物应与临床应用制剂一致。 刺激性试验设计中应考虑的问题 5 对照组 以溶媒和/或赋形剂作为阴性对照。必要时采用已上市制剂作对照 。 6 剂量 剂量设计主要应该考虑受试物浓度和总剂量。一般采用与临床制 剂相同浓度，设一个剂量组，可以通过改变
6、给药频率进行剂量的 调整，必要时应该进行不同浓度的刺激性试验。对于皮肤刺激性 试验，在给药面积不变的情况下，不应通过增加厚度来满足增加 给药量的目的。 7 给药方案 给药方案原则上应与临床用药方案一致，但设计给药容积、速率 和频率时，应考虑所选用动物模型给药部位的解剖和生理特点。 8 统计处理 根据实验模型和试验方法选择合适的统计方法。 眼刺激性试验 眼用药物及可能接触眼睛的受试物均应考虑进行眼刺激性试验。 在急性毒性试验、长期毒性试验中已经评价过眼刺激性，其受试物与拟 进行临床研究的制剂相同或具有可比性，可不必进行单独的眼刺激性试 验。 眼刺激性试验方法 实验动物 首选家兔，每组动物数不少于
7、3只。应设置生理盐水对照组，可采用同 体左右侧自身对比法。试验前24小时内对每只动物的双眼进行检查（ 包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的 动物不能用于试验。 给药方法 每只眼睛滴入0.05-0.1ml或涂敷0.1g受试物，然后轻合眼睑约10秒。一 般不需冲洗眼睛。给药期限应根据受试物拟用于临床的情况来决定， 多次给药时每天给受试物的次数应与临床用药频率相同，连续给受试 物2-4周，一般不超过4周。 结果观察 应根据受试物的特点和刺激性反应情况来选择适当的观察时间。通常单次给 药眼刺激试验，在给药后1、2、4、24、48和72小时对眼部进行检查，也可根 据受试物的特点适
8、当调整观察时间；多次给药眼刺激试验，每天给药前以及 最后一次给药后1、2、4、24、48和72小时对眼部进行检查，也可根据受试物 的特点适当调整观察时间。如果在72小时未见任何刺激症状，试验则可结束 。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限，但一般不超过21天。 仪器 一般采用裂隙灯（或手持裂隙灯）进行眼刺激反应检查，也可根据刺激性反 应情况采用其他的合适器械（如放大镜、生物显微镜等）。在整个观察过程 中应进行荧光素染色检查。每次检查，都应记录眼部反应的分值（见表3）。 除了观察所列出的结膜、角膜和虹膜损伤外，其他所观察到的损伤也应记录 和报告。 结果统计与分析 按表要求，将每只动物的眼角膜、虹
9、膜和结膜的刺激反应的分值相 加，即是一只受试动物眼刺激反应的总积分。把每只动物的刺激反应 积分总和除以动物数，就是药物对眼刺激性的最后分值。按表2标准 ，判定药物对眼的刺激程度。 眼附属器检查 （一） 眼睑 观察有无红、肿、瘀血、气肿、疤痕或肿物；有无内翻或外翻 ；两侧睑裂是否对称，上睑提起及眼睑闭合功能是否正常。睫毛是否整齐、方向 是否正常、有无变色、脱落，根部有无充血、鳞屑、脓痂或溃疡。 （二） 泪器 注意泪点有无外翻或闭塞。泪囊区有无红肿压痛或瘘管，在无红 肿时压挤泪囊看有无分泌物自泪点溢出。 （三） 结膜 将眼睑向上下翻转检查结膜及穹隆部结膜，注意其颜色，以及是 否透明光滑，有无充血、
10、水肿、乳头肥大、滤泡增生、疤痕、溃疡、睑球粘连， 有无异物或分泌物堵集。 （四） 眼眶 观察两侧眼眶是否对称，眼缘触诊有无缺损、压痛或肿物。 眼球前段检查 （一） 角膜 注意角膜的大小、弯曲度、透明度及表面是否光滑。有无 异物、新生血管及混浊（瘢痕或炎症）。感觉如何。角膜后有无沉着物。 （二） 巩膜 注意巩膜有无黄染、充血、结节及压痛。 （三） 前房 将手电灯光在外眦处照向内眦，如鼻侧虹膜全被照亮，为 深前房；如鼻部虹膜仅被照亮1mm或更少，则为浅前方，有潜在的发生闭角 性青光眼的危险。注意房水有无混浊、积血、积脓。 （四） 虹膜 两侧瞳孔是否等大，形圆，位置是否居中，边缘是否整齐 。 （五）
11、 晶状体 观察晶状体有无混浊，有无脱位。 瞳孔检查 在动物房正常光照下用肉眼观察其自然状态。 观察两眼瞳孔大小，正常情况下应为圆形、等大。 检查瞳孔对光反应：将动物移至在光线较暗的地方，另一人用电筒照射眼睛， 观察动物的瞳孔反应及灵敏度（参照SOPT226）。 按照角膜给药的SOP给予散瞳剂，使瞳孔散大。5-15分钟后用直接或间接检眼镜 检查。 晶体检查：是否透明，有无混蚀物。 玻璃体检查：将检眼镜转盘调为+8-+10屈光度，将光线射入瞳孔区，可见眼底 淡绿色或褐色反光，观察此背景下有无混浊物。 眼底检查，观察视网膜颜色，视神经乳头形态、色泽是否正常、边界是否清晰 ，血管走向和动静脉管径的比例
12、是否正常，观察有无水肿、渗出、出血、脱离 、色素沉着等。 检眼镜检查 （一）正常视乳头略呈圆形，淡红色，边界清楚。中央有凹陷，色泽稍淡， 。若视乳头边界模糊、隆起，应考虑为颅内压增高所致视乳头水肿或视神经 炎，如色泽苍白为视神经萎缩。 （二）视网膜中央动脉色鲜红，静脉色暗红，动静脉管径之比2：3，如动脉 变细、或动脉交叉处静脉中断或尖削，则表明有小动脉痉挛或硬化。 （三）视网膜正常时透明，可透见下方之色素上皮及脉络膜，故呈均匀深橘 红色或豹纹状，许多眼病或全身疾病都可使视网膜出现水肿、出血、渗出、 坏死或色素异常。 （四）黄斑部位于视乳头颞侧距2PD（视乳头直径）稍偏下处，呈暗红色、 无血管、
13、其中心有一针尖样反光点，称为中心凹光反射 裂隙灯显微镜检查 眼各部检查法： 结膜：将光线直接聚在结膜上，即可反映各种病变现象，如结膜上皮改变，新生物， 色素沉着，异物，结膜血管形态，并可通过透明眼球结膜观察巩膜组织的某些改变。 角膜：可用直接焦点法和间接照射法，直接法更常用。裂隙光通过角膜形成一半透明 灰白色光带，前表面呈凸弧形，后表面凹弧形，弧度均匀一致。显出角膜上皮，基质 及内皮。角膜病变时，病区厚度有改变，如溃疡则表层缺损。角膜后沉淀物（K，P ），可在角膜内皮层看到。间接照射法是利用虹膜，晶状体反光看清角膜新生血管异 物等。 前房：对准角膜光带与虹膜，晶状体光带中间的透明空间。如有混浊
14、可出现了道氏现 象，即出现灰白色半透明反光带和飘浮游动的细小颗粒。 虹膜：常用宽光带，直接焦点法，观察虹膜色泽，纹理及对光反射。病变时出现的新 生血管，粘连，充血水肿等可看清。 晶状体：在裂隙光束下形成一光学切面，可分出囊膜，皮质和核。准确地确定混浊部 位与范围。 玻璃体：焦点移到后囊的后方，可见青灰色膜样或纤维样结构，形如下垂窗帘，随眼 球转动而移动。如葡萄膜炎症可见灰白色渗出，出血时可见棕红色漂浮状血细胞，变 性时可见不同形状的混浊物。 眼用制剂 系指直接用于眼部发挥治疗作用的制剂 眼部制剂可分为眼用液体制剂（滴眼剂、洗眼剂、眼内注射溶剂）、眼 用半固体制剂（眼膏剂、眼用乳膏剂、眼用凝胶剂
15、）、眼用固体制剂（ 眼膜剂、眼丸剂、眼内插入剂）等。也可以固态形式包装，另备溶剂， 在临用前配成溶液或混悬剂。 在2005年版药典中明确指出各类眼用制剂均应为无菌制剂。无疑这一规 定明确了眼用制剂是按照无菌工艺生产的，且终产品应为无菌产品，因 此加强眼用制剂的无菌要求是合理、必要的，同时也是可行的。 眼用制剂必须考虑无菌性 眼用制剂的稳定性研究资料中，大多说申报单位未将无菌或微生物限度检查 作为考察指标。无菌是眼用制剂重要的质量要求，尽管眼用制剂在使用时， 特别是多次使用时，由于使用不当会造成污染，但这不能成为对终产品使用 前降低检验标准的原因。 因此申报单位在进行稳定性研究时，应在长期留样考
16、察中增加无菌指标，最 低限度应提供长期留样实验末期的无菌检查结果；以确定眼用制剂合理的有 效期。 另外对于处方中不含有抑菌剂且为多包装的眼用制剂，为保证临床用药安全 性和保证产品质量，申报单位应对产品在临床使用条件下是否保证无菌进行 研究，通过考察多次使用后的无菌检查结果，并结合产品的适应症，对产品 不使用抑菌剂的可行进行评价。 研究方案设计的一般考虑 与一般药物的临床前评价安全性评价原则相同，眼用药物临床前评价的 重点也在于安全性。只是这种安全性的考虑即要体现在系统性上，又要结 合眼科用药的特点和化合 物本身情况进行综合分析。改剂型的眼用药物临 床前安全性评价的一般考虑为： （一）全身毒性： 眼部用药的给药剂量甚微，据测定人结膜囊内的最大液体容量为20 30ul，除去10ul的正常泪液，最多只能容纳20ul药液。眼部给药后药物进入 体循环的量非常 少，一般不产生具有临床意义的全身药理作用。通常下列 情况下无需进行进一步的全身毒性研究： 1已证明药物眼部吸收缓慢，可明确排除该药物眼部给药的全身作 用。 2药物可被吸收，但以前已进行了充分的全身毒性研究（
