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1、第十届全国化学传感器学术会议论文摘要集0 光学式化学传感器及其他传感器 0 2 3 人胸苷激酶荧光免疫分析研究 吴朝阳，申田田 ( 湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室，长沙4 10 0 8 2 ) 人胸苷激酶( h u m a nt h y m i d i n ek i n a s e ，h T K ) 是真核细胞D N A 合成过程中的激酶，其表达 主要在细胞周期的S 期，在G 2 期达高峰。h T K 在生长旺盛的细胞中表达升高，特别是肿瘤细胞， 它是一种较为敏感的新的肝癌标志物，它能可逆性催化胸腺嘧啶脱氧核苷与磷酸脱氧核苷之间的 转化，它与细胞的分裂和增殖有密切关系。因此，人体液
2、中h T K 的水平可以间接地反映体内是 否有增生活跃的细胞，h T K 的水平可以判断肿痛的发生、发展和预后。 尽管国际上已有学者采用放射性免疫法可测定出T K l H p a n k 蛋白的活性和含量，由于有些 T K l H p a n k 测定方法特异性不高，灵敏度、重复性和稳定性均较差，临床用于诊断和鉴别诊断存 在着较大的局限性和误差，且无法进行临床的早期诊断，有时甚至出现假阴性或假阳性的结果， 而且有一定的放射性污染，给临床诊断和鉴别诊断带来了很大困难。目前定量检测体液中的h T K 尚无一个满意的方法，研究新型的传感检测技术对于h T K 的临床检测有重要意义。 我们研究用D N
3、 A 重组技术克隆了h T K 基因，且在大肠杆菌中得到了高效表达，重组表达的 h T K 用于免疫小鼠制备单克隆抗体1 1 - 3 1 ，并研究用磁性纳米颗粒( M N P s ) 为载体，以辣根过氧化 物酶标记抗体( A b H R P ) ，磁性纳米颗粒上固定的h T K ( M N P s h T K ) 与待测h T K 发生竞争性 免疫反应，H R P A b 可以催化无荧光底物对羟基苯丙酸( H P P A ) 转化为有荧光物质，待渊h T K 底浓度可由底物溶液底荧光增强的大小来判断，发展了一种用于h T K 检测的荧光免疫分析方法。 由于磁性纳米颗粒的用量非常少，该方法可以进
4、行快速方便的抗原抗体检测，而且检测限底，可 满足临床分析的要求。 在最优条件下采用竞争法来检测h T K ，当待测的h T K 的浓度增加时，与磁性颗粒上固定的 h T K 反应的A b ，H R P 则减少，荧光响应与待测的h T K 的浓度是成反比，荧光响应与h T K 在 O 0 1n g n l l 到1 0n g m l 之间成线性关系，检测下限为0 0 0 8n g m l 。 对该免疫分析方法用于检测血清中h T K 含量的可行性进行了研究。应用该法测定了4 份 稀释1 0 倍正常的血清样品和4 份肝癌血清样品，分别平行测定4 次。肝癌血清样品经稀释l O 倍后荧光强度是2 7
5、0 ，h T K 的浓度都高于2 0n g m l 。正常的血清样品荧光强度是3 0 0 ，h T K 浓 度约为0 1n g m l 。正常血清样品中的h T K 含量明显高于正常血清样品。结果显示该法可以满 足血清中h T K 浓度的测定。 参考文献： 【1 1 丁克祥，郑永晨，吴朝阳等人胸苷激酶基因c D N A 克隆冲国老年学杂志。2 0 0 4 ，2 4 ( 1 0 ) ：9 3 2 - 9 3 4 【2 】丁克祥，郑永晨，吴朝阳等人胸苷激酶基因在大肠杆菌中的表达中国老年学杂志，2 0 0 4 ，2 4 ( 1 1 ) ：1 0 2 9 - 1 0 3 1 【3 】丁克祥，吴朝阳，郑永晨，等I h T K l 质量放大压电石英晶体免疫传感器研究中国老年学杂志，2 0 0 5 ，2 5 ( 9 ) ： 1 0 6 4 - 1 0 6 7
