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1、南京晓庄学院2015届毕业论文分类号： 学校代码： 学 号： 南京晓庄学院本科生毕业论文市售鲜奶的黄曲霉毒素M1残留调查Aspergillus flavus M1 residual milk to the city of investigation所属院(部)：食品科学学院学生姓名：指导教师：研究起止日期：二一四年十一月至二一五年五月二一五年五月 南京晓庄学院2015届毕业论文毕业论文诚信说明本人郑重声明：本人所提交的毕业论文永丰县恩江镇附近居民乙肝情况调查是本人在指导教师辅导下独立研究、写作的成果，论文中所引用他人的文献、数据、图件、资料均已明确标注；对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均
2、已在文中以明确方式注明并表示感谢。本人完全清楚本声明的法律后果，申请学位论文和资料若有不实之处，本人愿承担相应的法律责任。论文作者签名： 时间： 年 月 日指导教师签名： 时间： 年 月 日【摘要】：最近几年，国内和国外一直引发着食品安全问题，特别受人们关注的是由生物毒素污染引发的食品安全事件。比如生牛乳中黄曲霉毒素M1残留超标问题。黄曲霉毒素M1是一种强致癌性化合物，主要存在于牛奶和奶粉等乳制品中，严重威胁到消费者的身体健康。为了确保食用安全，本论文对市面上出售的不同品牌不同种类的市售鲜奶中黄曲霉素残留进行调查，对保障农产品质量安全，促进相关学科发展具有重要意义。本研究采用酶联免疫吸附法(E
3、LISA)，对含脂牛奶进行离心处理，弃去脂肪层，取下层牛奶进行检测。结果表明：受检的20多种牛奶样本的黄曲霉毒素含量介于标准范围之间，均低于GB2761-2011规定的不超过0.5gKg,说明我国市售鲜奶黄曲霉毒素含量安全。【关键词】: 生牛乳；黄曲霉素M1；ELISA【Abstract】: In recent years, the frequent occurrence of food safety at home and abroad, Special concern of food safety incidents problems result from biotoxins conta
4、mination. For example, the levels of aflatoxin M1(AFM1) in milk are over the maximum limit.AFM1,a kind of carcinogenic compound found in dairy products,such as milk and powdered milk can threat peoples health. In order to ensure food safety, its important to investigate various brands and kinds milk
5、 on the market Whether or not contained residual aflatoxin in the milk , which play a key role in protection safe consumption of agricultural product quality and in promoting the development of relative science. This study adopts the method of ELISA,processing the fat milk by centrifugation, discard
6、ing the fat layer, taking detection to the lower milk. The results shows that the 20 kinds of milk samples content of aflatoxin M1 in standard range ,which were lower than GB2761-2-11, indicating the safety of milk content of aflatoxin M1 in the China market .【Key words】: aflatoxin; milk; ELISA；目 录1
7、. 前言12. 材料与方法22.1器材与试剂22.2材料32.3试剂配制32.4样品处理.32.5操作步骤.33.结果：44.讨论5 参考文献7 致谢8 1 前言黄曲霉素是由黄曲霉或其它寄生性曲霉菌的代谢所产生的物质。黄曲霉主要存在于土壤中或动植物中，黄曲霉素主要存在于被黄曲霉等菌物所污染物质中。黄曲霉素常污染含油量较高的谷物中、禽蛋、玉米、肉、奶制品，其次是含淀粉量较高的果实中，但污染大豆等作物的程度比较少。黄曲霉素是所有霉菌毒素中毒性最大、这一类毒素对人类健康造成极大的危害。粮食和饲料被黄曲毒素污染的可能性很高，给饲料企业和养殖户造成大量经济损失，被黄曲霉素污染的食物误食后，会严重影响到人
8、体的健康。该论文主要是介绍有关市售生牛乳的黄曲霉残留调查。1.1 研究背景20世纪60年代，在英国一养殖场发生十万只火鸡突发性死亡，调查最终结果显示，巴西进口的花生粕被由于饲料在生产运输过程中被黄曲霉素污染所引起的。经研究发现，黄曲霉毒素是由特曲霉产生，但是量相对较少。产生的黄曲霉素的类型主要有B1,B2,G1,G2 和另外两种主要存在于牛奶中，代谢产物M1,M2等。经牛奶中分离出来的M1 和M2，在分子结构上与B1,B2,G1,G2非常接近。黄曲霉毒素B1 自从这件事后，研究人员对黄曲霉素对食品安全特别关注，在对所有毒素的研究中，黄曲霉是研究最透彻的品种之一。已经被发现的黄曲素已有十几种之多
9、。黄曲霉素M1主要出现在各种奶制品中，黄曲霉素M1和黄曲霉素M2并不是有黄曲霉菌分泌的，毒性也相对较弱。在黄曲霉素中毒性最强的应该是黄曲霉素B1，B在颜色中表示蓝色，因为黄曲霉素B1在紫外光下会呈现出蓝色荧光。除B2以外，还含有G1和G2两个类型，因为在紫外光的照射下会呈现出黄绿色荧光。农产品中出现的黄曲霉素通常用B1 、B2和G1、G2代表。奶牛食用含有B1和B2的饲料后，其中有一小部分会分解为M1和M2进入牛奶中，这事牛奶中黄曲霉素的来源之一。国际上，只设定相应的限量标准，如果超过这个标准，人食用含有黄曲霉素的食物后会对身体造成极大的危害。在英国十万只火鸡死亡的死亡，就是由于火鸡饲料被黄曲
10、霉污染。研究人员发现一些霉变的花生，花生中所含有的黄曲霉素B1严重超标。食品中，黄曲霉素的单位用ppb表示，1ppb表示1吨粮食或饲料中约有1mg的黄曲霉素。我国现在制定的指标中花生中黄曲霉毒素B1必须少于20ppb。研究人员采用有机溶剂萃取溶液的得手段到含有黄曲霉素的油，在油中检测出B1含量为120ppb。霉变的花生饼中的含量则高达11000ppb，如将霉变花生饼喂食动物，动物会出现中毒情况。工业化生产加工的流程，提取出来的粗油必须要精炼。精练采取分级的方法，第一次提取，黄曲霉素B1的含量能降到了10ppb，已经到达食用标准。第二提取，含量就低于1ppb。在粮食发生霉变之前，黄曲霉毒素的含量
11、也达不到这样的标准。经过精炼的食用油食用更加安全。多数人都知道粮食受潮会发生霉变，会产生大量黄曲霉素。其实，在农作物生长期中黄曲霉素就可以形成。例如玉米，土壤中的黄曲霉菌会在玉米棒采收前就已经受到侵染。在适宜的条件下，作物采收前黄曲霉素的含量就已经超标了。另外，种植密度太大、杂草丛生的环境或是氮肥施加不够、病虫害的侵染等因素，都会引起黄曲霉素的超标。1.2基本了解黄曲霉毒素是一种剧毒物质，甚至在93年被世界卫生组织划为1类致癌物质。它的主要作用是可以破坏生物的肝脏功能，甚至可以致癌致死。在天然污染的食品中，黄曲霉毒素B1毒性和致癌性也是非常强的。1.3化学结构黄曲霉毒素M1黄曲霉毒素是化学结构
12、相似的一类化合物，M1是黄曲霉毒素B1在生物体内代谢产物衍生物。它的主要有B1,B2,G1,G2,M1,M2等分子型式。通常在牛奶中的主要是M1和M2。毒性并且致癌性最强的物质是B1。1.4物质特点 黄曲霉毒素B1,B2在紫外灯光照射下发出蓝色荧光，黄曲霉毒素G1,G2会显现出绿色荧光。相对分子量为312-346之间。黄曲霉素难溶于水，易溶于多数有机溶剂，但不能溶于石油醚和乙醚中。在中性溶液中一般比较稳定，在强酸溶液中有部分分解，纯黄曲霉毒素为无色结晶，268以上黄曲霉毒素B1会分解。紫外线对对其结构有一定破坏性。1.5临床特征黄曲霉毒素B1是食品安全中毒性最强，一般有表现这为三种临床特征；急
13、性中毒、慢性中毒和致癌性2、材料与方法：2.1 器材与试剂 烧杯，100L移液枪，培养箱，酶标仪，量筒，1000L移液枪，检测采用黄曲霉毒素M1快速检测试剂盒2.2材料市售含有生牛乳产品。2.3 试剂的配置 2.4.1 酶标抗原工作液：1瓶酶标抗原，加入1.5ml酶标抗原稀释液，溶解，用酶标抗原工作液，每瓶酶标抗原够24孔反应板，28。 2.4.2 洗涤液：取浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍。2.4 样品处理 生牛乳，牛奶冰箱冷藏10以下，离心机3500转/min 10分钟，弃上清，取下层牛奶，脱脂奶直接测定。样品进行ELISA测定。2.5 操作步骤：2.5.1 平衡试剂：从试剂盒里取出试剂，把试剂放常温下15-20分钟，与室温平衡。2.5.2 配制酶标抗原：向酶标抗原里加入1.5mL酶标抗原稀释缓冲液，放振荡器上震荡1分钟左右，让其充分混匀，这就是所得的酶标抗原工作液。2.5.3 洗涤液配制：向烧杯中吸取5mL浓缩洗涤液，然后倒入95mL蒸馏水，摇匀。2.5.4 编号酶标孔：取反应条。标记16号孔作为标准对照孔，剩余孔当作样品孔。2.5.5 洗涤操作：向每孔内加入250L洗涤液，静置1分钟。甩干，并在吸水纸拍干。2.5.6 加样品：分别向1-6号孔内加入50L标准溶液，剩余孔加入需要测样液。2.5.7 加酶标抗原：向每孔内滴入50L酶标抗原工作液。2.5
