《毕业论文--大血藤叶斑病的病原鉴定及其生物防治》由会员分享，可在线阅读，更多相关《毕业论文--大血藤叶斑病的病原鉴定及其生物防治（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、凯里学院本科毕业论文x 学科代码： 070401学 号： 本科毕业论文（设计）题目：大血藤叶斑病的病原鉴定及其生物防治学 院： 环境与生命科学学院专 业：生物科学班 级：09 生本 学生姓名：指导教师：年 月 日8目录目录I摘要：II关键词：IIIAbstract:IIIKeywords:III0 前言11 材料与方法11.1 实验时间和地点11.2 实验材料11.3 实验方法22 结果与分析22.1 病症的观察与描述32.2 分离培养的结果32.3 镜检及鉴定的结果42.4 生防菌作用结果53 结论与讨论7参考文献8大血藤叶斑病的病原鉴定及其生物防治（凯里学院环境与生命科学学院 贵州凯里 5
2、56011）摘要：本文通过对大血藤（Sargentodoxa cuneata）叶斑病症的观察，采用组织分离法分离病原菌，并对病原菌进行培养。通过对病原菌菌落的形态观察和孢子大小的测定，鉴定引起黔东南州大血藤叶斑病病害的病原微生物为瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）和链格孢霉（Alternaria alternata),经过测微尺测定（50个孢子）所得链格孢霉孢子大小为1029.17m510.87m，瓜果腐霉孢子大小为 13.717.2m12.017.2m。并针对性地选择了三种枯草芽苞杆菌制剂对其进行生物防治实验，结果显示：枯草芽孢杆菌F1制剂对两种病菌的防治效果最好，其次
3、F18相对较好，F2防治效果较低。关键词：大血藤；叶斑病；瓜果腐霉；链格孢霉；生物防治Identification of Pathogen and Biological control of Sargentodoxa cuneataSong Erchun(Environment and life science, Kaili university, Kaili，Guizhou 556011)Abstract: Based on the observation of leaf spot disease of Sargentodoxa cuneata, By means of tissue iso
4、lation of pathogenic bacteria, The pathogens were cultured and. The pathogen morphology observation and spore size determination, Identification of leaf spot disease caused by the Qian dongnan sun pathogenic microorganisms for Pythium aphanidermatum and Alternaria alternata,After micrometer measurem
5、ent (50 spores of Alternaria alternata sporulation) the size of 1029.17 m 510.87 m,Pythium aphanidermatum spore size of 13.717.2 m 12.017.2 m.And to choose three kinds of Bacillus subtilis bud by preparations for biological control experiment, comparing their bacteriostatic effect.The results showed
6、: the Bacillus subtilis F1 preparations on two kinds of pathogens of the best control effect is relatively good, followed by F18, F2 less intibiting effect.Keywords: Sargentodoxa cuneata; leaf spot; Pythium aphanidermatum; Alternaria alternata; biological control0 前言大血藤又名血藤、红皮藤、千年健等，为木通科植物大血藤Sargent
7、odoxa cuneata (Oliv.) Rehd. Et Wils.的茎。落叶木质藤本，长达到10余米。藤径粗达9厘米，全株无毛；当年枝条暗红色，老树皮有时纵裂。其干燥茎呈圆柱形，略弯曲，通常截成长约30厘米的段状，直径13厘米。外表棕色或灰棕色，粗糙，具有浅的纵槽纹及明显的横裂纹，有时可见膨大的节部及略凹陷的枝痕或叶柄痕。大血藤生于山坡疏林、溪边。主产湖北、四川、江西、河南、江苏；安徽、浙江亦产。大血藤性味苦，具有败毒消痈，活血通络，祛风杀虫的作用；治急、慢性阑尾炎，风湿痹痛，赤痢，血淋，月经不调，疳积，虫痛，跌扑损伤；还可作为植物染料使用，有很好的染色效果。 在国内，很多地区进行了大血
8、藤的种植和推广，其生产意义对于人类来说是比较可观的。因此，国内外有很多人对其进行了深入的研究，以便于更好的利用其生理价值。目前，国内外对大 血藤的分类、药用化学成分的类别、结构和药理以及其分子生物学、生态学方面有一定的研究。但是，对大血藤的病害却没有太多的相关研究报告。随着大血藤的大面积种植推广，提出比较科学、有效的病害防治措施是十分必要的。本文立足于贵州黔东南州大血藤的当前病害发生状况，研究病害发病原因和鉴定病原菌种类及其生物防治，希望能为贵州省黔东南州大血藤病害防治有一定的参考价值。1 材料与方法1.1 实验时间和地点室外实验于2011年3月在贵州省黔东南州锦屏县边沙村进行，室内试验在凯里
9、学院环境与生命科学学院分院微生物实验室显微实验室进行。1.2 实验材料1.2.1 标本采集 在贵州省黔东南州锦屏县边沙村采集大血藤病害组织制成标本。1.2.2 仪器设备 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、无菌操作台、显微镜、电磁炉、照相机等。1.2.3 试剂及材料 75%乙醇、0.1%升汞、链霉素、蒸馏水、枯草芽孢杆菌F1、F2、F18制剂；马铃薯蔗糖培养基（PSA）： 马铃薯200g 、蔗糖17 g、琼脂1720g、水1000g、121、高压灭菌锅灭菌30min。1.3 实验方法1.3.1 病症的观察与描述 到贵州省黔东南州锦屏县边沙村对大血藤病害进行了解和观察，从病害组织的表面病斑形态、病部颜色
10、、病斑的大小等方面对其进行观察和描述，并拍照记录。1.3.2 病原菌的培养、分离及纯化 取病健交界处的叶片小块组织2-4mm，先用75%的酒精对大血藤叶片病斑部进行表面消毒处理2-3秒，然后放入0.1%的升汞溶液中进行消毒2分钟，再放进无菌水中漂洗3次，移入PSA平板内培养，在PSA培养基上28培养34天。对病原真菌的分离采用组织分离法，待病菌组织的周围长出不同的菌丝体，挑取外围新长的菌丝，分别移置到新的添加链霉素的PSA培养基上，依次重复多次，直至得到纯的病原菌进行纯培养，然后对纯培养菌落进行拍照。1.3.3 病原菌的鉴定 显微镜检查分为真菌病害标本和培养真菌的显微镜镜检两个方面，主要是观察
11、孢子的形状，颜色，是否有隔及油球的分布；菌丝的形状，颜色，是否有隔，是否有分支并采用测微尺测量孢子的大小等。同时，对病原微生物进行显微照像和描述记录。 1.3.4 生防菌对病原菌的抑制作用 将三种枯草芽苞杆菌接种到分离纯化的病原菌（这时病原菌生长所需的培养基不加入链霉素）周围，放入28恒温箱培养，培养3-4天，观察各种生防菌对病原菌的抑制作用并做记录，同时拍照。2 结果与分析2.1 病症的观察与描述边沙2危害叶片，发病初期叶片上常有绿色小黄点，后扩大成圆形或椭圆形斑点；后期病斑中部呈橙红或红褐色。表面出现稀小黑点，边缘呈深褐色。边沙5叶片上病斑圆形，后扩大呈不规则状大病斑，并产生轮纹，病斑由红
12、褐色变为黑褐色，中央灰褐色。（如图1和图2所示） 图1大血藤叶片 图2大血藤叶片2.2 分离培养的结果经过组织培养、分离、纯化，得到两种菌落。其中边沙2菌落菌丝较粗而短，菌落较大，正面呈灰褐色，菌落质地致密，外观干燥，不透明，呈现绒毛状，菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落边缘锯齿状，菌落反面呈深褐色。边沙5菌落呈黑褐色，中部稍向上凸起，表面疏松具皱纹且有水滴，菌落质地棉絮状，菌落边缘呈全缘状，菌丝较长，培养基背面观，菌落具有同心轮纹，呈放射状生长。（如图3、4、5、6所示）图3边沙2菌落正面 图4边沙2菌落背面 图5 菌落正面 图6 菌落背面2.3 镜检及鉴定的结果大血藤叶斑病的病原菌为链
13、格孢霉，链格孢霉又称黑霉菌，属于半知菌纲链孢霉目黑霉科链格孢属。菌丝淡褐色有隔，分枝。分生孢子梗短，不分枝，顶生分生孢子。分生孢子串生，黑褐色，多细胞，有纵横隔膜，卵圆形，呈砖隔状。通过测微尺测定（50个孢子）所得链格孢霉孢子大小为1029.17m510.87m。（如图7、8所示） 图7链格孢酶菌丝（1040） 图8链格孢霉孢子（1040） 大血藤的病原菌为瓜果腐霉，瓜果腐霉属于假菌界卵菌门腐霉目腐霉科腐霉属。孢子囊为膨大菌丝或瓣状菌丝、不规则菌丝组成，顶生或间生， 出管长短不一；泡囊球形，内含625 个或更多的游动孢子；游动孢子肾形金黄色，经测定瓜果腐霉孢子大小为 13.717.2m12.0
14、17.2m。（如图9、10所示） 图9瓜果腐霉孢子囊 （1040） 图10瓜果腐霉游动孢子（1040）2.4 生防菌作用结果 用三种枯草芽孢杆菌制剂对链格孢霉和瓜果腐霉进行生物防治的结果表明：枯草芽孢杆菌F1制剂对两种病菌的防治效果最好，其次F18相对较好，F2防治效果较低。（如图11、12、13、14、15、16所示）图11生物制剂对链格孢霉的抑制效果 图12生物制剂对链格孢霉的抑制效果 图13生物制剂对瓜果腐霉的抑制效果 图14生物制剂对瓜果腐霉的抑制效果 图15生物制剂对瓜果腐霉的抑制效果 图16生物制剂对瓜果腐霉的抑制效果3 结论与讨论在大血藤的种植过程中，病害的入侵成为影响大血藤生长的一个重要原因，容易造成减产的后果；另外，受病害入侵的大血藤提取物也可能会受到影响。随着大血藤的大面积种植推广，提出比较科学、有效的病害防治措施是十分必要的，本文立足于贵州黔东南州大血藤的当前病害发生状况，研究病害发病原因和鉴定病原菌种类及其生物防治。通过科学的实验方法，得出了引起大血藤正常生长的主要病害为叶斑病，且鉴定出引起病症的病原菌主要为链格孢霉和瓜果腐霉。这对大血藤真菌和霉菌病害的预防和鉴定提供了一些理论依据。 链格孢霉属链格孢属，95%以上的链格孢属种类兼
