《内皮细胞高表达脂多糖相关因子1eola1的亚细胞定位及在肿瘤组织中的表达研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《内皮细胞高表达脂多糖相关因子1eola1的亚细胞定位及在肿瘤组织中的表达研究（57页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 硕士学位论文 内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1（EOLA1）的 亚细胞定位及在肿瘤组织中的表达研究 罗 敏 罗 敏 指导教师 梁自文 副教授 第三军医大学西南医院内分泌与代谢科，400038 申请学位级别 硕士科学学位 专业名称 内分泌与代谢病学 论文提交日期 2011 年 5 月 论文答辩日期2011 年 5 月 学位授予单位和日期 第三军医大学 2011 年 月 答 辩 委 员 会 主 席 评 阅 人 二一一年五月 分类号分类号 密密 级级 公公 开开 学学 号号 2008397 第三军医大学研究生学位论文独创性声明 秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人 在导师指导
2、下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中 特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过 的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用 过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 日期： 第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生 在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕 业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。 学校有权保留并向国
3、家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内 容除外） ，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 目 录 英文缩写索引 1 英文摘要 3 中文摘要 5 论文正文 内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1（EOLA1）蛋白的亚细胞定位及在肿瘤 组织中的表达研究 7 前 言 7 第一部分 EOLA1 蛋白的亚细胞定位 9 材料与方法 9 结 果 .24 讨 论 .28 第二部分 EOLA1 蛋白在肿瘤组织中的表达.30 材料与方法 .30 结 果 .31 讨 论 .33 全文结论 .34 致 谢 .3
4、5 照 片 .36 参考文献 .42 文献综述.45 参考文献 .51 在读期间发表论文 .53 第三军医大学硕士学位论文 1 英文缩写索引 英文缩写 英文全称 中文全称 ASCH Activating signal cointegrator 1 homology 活化信号共激活子 1 类似物 bp base pair 碱基对 cDNA Complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 ddH2O double distillated water 双蒸水 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP deoxybrbonucleside triophospha
5、te 三磷酸脱氧核苷 EC endothelial cells 内皮细胞 EGFP enhanced green fluorescent p rotein 增强型绿色荧光蛋白 EOLA1 endothelial-overexpressed lipopolysaccharide -associated factor 1 内皮高表达脂多糖相关因子 1 基因 EOLA1 endothelial-overexpressed lipopolysa -ccharide -associated factor 1 内皮高表达脂多糖相关因子 1 蛋白 FCS Fetal calf serum 小牛血清 GFP
6、green fluorescent p rotein 绿色荧光蛋白 HGP human genome project 人类基因组计划 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 HTH helix-turn-helix 螺旋-转角-螺旋 HUVEC human umbilical vein endothelial cell 人脐静脉血管内皮细胞 kDa kilo-dalton 千道尔顿 LB luria-bertani (culture medium) LB 培养基 LPS lipopolysaccharide 脂多糖(内毒素) mCD14 membrane CD14
7、 膜 CD14 min minute 分钟 MOD multiple organ dysfunction 多器官功能障碍 OD optical density 光密度 ORF open reading frame 开放阅读框 PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 第三军医大学硕士学位论文 2 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 RACE Rapidly amplification of cDNA ends cDNA 末端扩
8、增技术 RNA Ribonucleic acid 核糖核酸 RNase Ribonuclease 核糖核酸酶 rpm rounds per minute 每分钟转数 RT-PCR Reverse transcription-PCR 逆转录聚合酶链反应 SDS Sodium dodecylsulfate 十二烷基磺酸钠 sec second 秒 SIRS system inflammatory response syndrome 全身性炎症反应综合征 TAE Tris-glacial acetic acid-EDTA buffer Tris 乙酸二乙胺四乙酸缓冲液 TE Tris-HCI and
9、 EDTA buffer Tris 二乙胺四乙酸缓冲液 U unit 单位 第三军医大学硕士学位论文 3 Subcellular localization and tumor tissues expression of endothelial-overexpressed lipopolysaccharide-associated factor 1 (EOLA1) Abstract After the completion of human genome project, identification and characterization of function genes are the
10、most important work in post genome era. In our lab, we cloned a novel human gene EOLA1 from ECV304 cells stimulated by lipopolysaccharide (LPS) (GenBank No. AY074889). EOLA1 gene is located in chromosome Xq28. Its coding protein is composed by 158 amino acid, molecular weight 17.89 kDa, isoelectric
11、6.43, hydrophilic good for soluble protein.In secondary structure, EOLA1 includes the alpha helix, beta slice layer structure and beta corner, and form a spiral - corner - spiral (HTH) base sequence. EOLA1 amino acid sequence contains ASCH domain, N glycosylation sites, protein kinase C phosphorylat
12、ion sites and tyrosine kinase 2 phosphorylation site. EOLA1 has a ASCH domain, which is a small beta-barrel domain found in all three kingdoms of life. The domain has been named after the ASC-1 protein, the activating signal cointegrator 1 or thyroid hormone receptor interactor protein 4. ASC-1 is c
13、onserver in many eukaryotes and has been suggested to participate in a protein complex that interacts with RNA. It has been shown that ASC-1 mediates the interaction between various transception factors and the basal transcriptional machinery. EOLA1 expression is strong in the normal adult tissues w
14、ith plentiful of vasculars by Northern blot. In seven kinds of cancer cells, EOLA1 expresses in leukemia HL - 60, hella cell lines S3, chronic leukaemia K - 562 cell lines, MOLT - 4 and gland cancer cell lines SW480 expression, but not in lung cancer cell lines with melanoma A549 cells G - 361 expre
15、ssion. The function of EOLA1 is not known now, but we have found that EOLA1 can interact with MT2A in ECV304 cells, and high expression of EOLA1 can proliferate the cells.Which means EOLA1 is a novel human function gene and medificates proliferation of cells. Now, anti-EOLA1 polyclonal antibody have
16、 been made, we want to study for 第三军医大学硕士学位论文 4 understanding the subcellular localization and expression of EOLA1 in human cancer tissues. The subcellular localization of EOLA1 in cells was finished by 转染 EOLA1 - EGFP fusion protein expression plasmid into ECV304 cell. After instantaneous expression of EOLA1-EGFP, the cells were observed under the laser confocal microscope and immune electron microscope. For investigating t
