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1、不同激素配比对番红花侧芽诱导愈伤组织的影响南 阳 理 工 学 院 本科生毕业设计（论文） 学院（系）： 张仲景国医国药学院 专 业： 中药学 学 生： 指导教师： 完成日期 2017 年 5 月 南阳理工学院本科生毕业设计（论文）不同激素配比对番红花侧芽诱导愈伤组织的影响Effect of Hormoms on Callus of Saffron Lateral Bud 总 计： 13 页表 格： 7 个南 阳 理 工 学 院 本 科 毕 业 设 计（论文）不同激素配比对番红花侧芽诱导 愈伤组织的影响Effect of Hormoms on Callus of Saffron Lateral
2、Bud 学 院（系）： 张仲景国医国药学院 专 业： 中药学 学 生 姓 名： 学 号： 指 导 教 师（职称）： （讲师） 评 阅 教 师： 完 成 日 期： 南阳理工学院 Nanyang Institute of Technology不同激素配比对番红花侧芽诱导愈伤组织的影响中药学专业摘要目的：研究不同激素配比对番红花侧芽诱导愈伤组织的影响，为番红花组织培养提供基础资料。方法：该试验通过以添加不同激素配比的MS培养基，培养番红花侧芽，通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织生长状况，筛选出最优激素浓度配比。结果：不同激素配比对番红花侧芽愈伤组织的诱导有显著的差异，在相同条件下MS+NAA 5mg/
3、L+6-BA 5mg/L组合的萌动率、诱导率最高。结论：该方法通过设定不同激素浓度组合，得出组织培养番红花侧芽的较优激素配比为MS+NAA 5mg/L+6-BA 5mg/L。关键词组织培养；愈伤组织；番红花；侧芽Effect of Hormoms on Callus of Saffron Lateral Bud Science of Chinese Materia Medica Major Guo-chao Lin Abstract: Objective:Study the effect of hormoms on callus of saffron lateral bud ,to provi
4、de basic data for saffron tissue culture.Methods:The experiment by adding different ratio of hormone of MS culture medium, culture saffron corms, through statistical callus induction rate and the callus growth to screen the optimal ratio of hormone concentration.Result:There are significant differen
5、ces on the effect of hormoms on callus of saffron lateral bud, at the same time under the condition, the combination of MS + 5 mg/L NAA + 6 - BA 5 mg/L have a highes stirring rate,and induction rate.Conclusion:The method by setting different hormone combination on tissue culture of saffron corms obt
6、ain better hormone ratio.Key words: tissue culture；Callus；saffron crocus；lateral budV目录1 引言11.1番红花性状特征11.2番红花化学成分11.3番红花药理作用研究11.4 番红花栽培技术21.5 组培技术概述31.6 研究目的与意义32 实验材料及方法32.1实验材料32.1.1实验用具32.1.2实验药剂32.1.3实验材料42.1.4实验仪器42.1.5植物激素42.2 实验方法52.2.1 MS培养基配方52.2.2激素浓度配比62.2.3培养基的配制62.2.4培养基灭菌62.2.5外植体表面灭菌
7、方法72.2.6接种72.3 数据统计与分析73 结果与分析83.1不同激素配比条件下番红花侧芽的萌动率83.2 不同激素配比条件下番红花侧芽愈伤组织的诱导率83.3 不同激素配比条件下番红花侧芽愈伤组织的质地94结论与分析10参考文献11附表12致谢131 引言番红花Crocus sativus L.是鸢尾科番红花属球根类多年生草本植物1 ，入药部位为番红花的柱头，药物名称为西红花，原产自地中海、欧洲南部地区，后经过西藏传进我国，故称藏红花。番红花应用广泛，不仅可以作为药用植物，还能作为染料和香料使用，历史悠久。但是由于番红花资源有限，仅有花柱能作为药用，而柱头产量低，致使其产量稀少，价格昂
8、贵。我国对番红花的使用，历史悠久，早在明代，李时珍就在其著作本草纲目中就番红花归入了第十五草部鸢草类，在中医的传统理论中，认为番红花性味甘平，能活血化瘀，散郁开结，止痛2。随着对番红花研究的不断深入，发现番红花的某些有效化学成分如番红花素（crocin）、番红花苦素（picrocrocin）、番红花酸（crocetin）等在抗肿瘤、治疗心脑血管疾病、免疫调节等方面有很好的疗效。1.1番红花性状特征番红花是多年生草本植物。植株高15-40cm，根20-40条。球茎呈圆球状，稍扁，直径约在3cm，表面覆盖有黄褐色的鳞片。叶基生，深绿色，长呈条状，长度约为20 cm，宽度约为2mm；叶丛基部包有膜质
9、鳞片。花茎比较短，不伸出地面；每株番红花会开1-2朵花，呈淡蓝色，有特殊香气；雄蕊呈淡黄色，直立，顶端较尖，略弯曲；花柱为红色，长度约为4cm，上部一般有3个分枝，柱头略扁，相较雄蕊于长3。1.2番红花化学成分董玉睿的研究表明番红花柱头含有的主要化学成分有番红花素、番红花苦素、番红花酸、番红花醛和挥发油等。番红花酸含量约为2%，是番红花酸与二分子龙胆二糖结合而成的酯。挥发油主要化学成分为番红花醛，含量在0.41.3%之间，是番红花产生特殊香气的主要化学成分，番红花醛是番红花在干燥储存过程，番红花苦素氧化降解产生的，所以新鲜的番红花的气味较淡4 。何美莲，陈家宽等人指出现今发现在番红花的花被中存
10、在山奈素、紫云英苷等成分。番红花球茎含有葡萄糖苷，天冬氨酸，谷氨酸等多种氨基酸。以及在番红花侧芽中发现大黄素2-烃基大黄素等5。1.3番红花药理作用研究因为番红花仅有柱头做为药用，所以番红花的药理研究也以柱头为多，在中医的传统理论中，认为西红花性味甘平，能活血化瘀，散郁开结，止痛2。随着对西红花的不断研究，发现了番红花的某些提取成分如番红花素、番红花酸、番红花苦素、番红花醛等在预防心脑血管疾病、抗肿瘤、抗氧化、抗氧镇痛、预防肝损伤等方面具有明显的药理作用。1.3.1对心脑血管的作用周新春等研究以西红花代茶泡水频服，结果表明，西红花能缓解血瘀型冠心病心绞痛患者的症状，治疗后全血粘度显著降低，能缩
11、小心肌梗死概率，改善心肌缺血，全血粘度降低表明该药的疗效与血液流动性改善相关6。陈琼等通过研究发现，番红花素类物质，在常压缺氧条件下，可以提高心脏的耐缺氧能力，大道预防剧烈运动对心肌细胞造成的损伤的作用，所以对心脏具有一定的保护作用7。1.3.2对肿瘤的抑制作用冀慧宝，吴绮思等人通过研究发现西红花能明显抑制人膀胱肿瘤细胞的生长。其机理可能是其成分能破坏肿瘤细胞的DNA、RNA有关8。临床药理表明西红花苷对多种肿瘤细胞有治疗效果其有效成分对肿瘤细胞具有选择性，而且番红花苷类能减少肿瘤数和抑制肿瘤初阶段，增加正常细胞的生长，影响细胞酶的分裂所以番红花对肝癌、子宫癌等癌症具有一定的治疗效果4。1.3
12、.3 对炎症和镇痛的作用番红花总苷在小鼠试验中能明显抑制二甲苯引起的小鼠急性耳廓肿胀、减轻致炎物质醋酸诱发的疼痛反应，醋酸导致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高及蛋清，这表明番红花苷对炎症早期的毛细血管通透性增高和水肿及炎症引起的疼痛有抑制作用，具有一定的镇痛效果11。1.4 番红花栽培技术目前，就世界范围上来说，番红花产量最大的当属伊朗，而质量最好的则是产自西班牙的番红花。在亚洲印度、日本等国也有栽培。目前，国内也有不少地方引进栽培，比如西藏、新疆、上海、山东、河南、安微、江苏等地。我国藏红花产量只能满足国内需求的20%，仍需要大量进口。目前国内藏红花的人工栽培主要采用大田繁殖种球、室内采花的方法
13、，大田种植：番红花的球茎上有较多的侧芽,在大田种植前应除先摘去侧芽,只保留1-2个顶芽栽种。11月中旬，将在室内采完花后的番红花转移到大田种植。在栽种过程中，注意需要将主芽向上,轻压入土,并覆盖上少量土壤。丁向东的研究发现在10月底到11月中旬适合番红花球茎栽种13。经研究番红花的留芽数与番红花的球茎产量及单球重有关14。 室内采花：在五月份西红花叶片枯萎时，将番红花球茎挖出，芽尖向上整齐地排列好置于室内，于阴凉干燥室内过夏。番红花球茎,靠自身贮藏的养分，不需要额外的供水供肥,就能正常开花。番红花一般在10月中旬左右就会开花,盛花期较短,历时1-2小时就会完全开放。所以应该在每天早上9-11时
14、采收，并需要及时烘干，才能获得优质的花丝。1.5 组培技术概述基于“细胞全能性”理论建立的植物组织和细胞培养技术由于其生产方式独特，且是在人工无菌操作和控温的环境条件下进行大规模的人工培养和工业化生产，对保质、保纯，节约耕地和反季节生产有重要作用，因而已成为保护药用植物资源满足人们对植物药需求的有效途径，目前已实现工业化植物有人参、地黄、石斛等。该技术如果能应用到番红花生产中，将成为解决番红花资源短缺的重要途径。张洁15等以球茎为外植体，在MS培养基中添加2mg/L2,4-D和0.5mg/L6-BA,在黑暗条件下培养，愈伤组织诱导率达98%，将愈伤组织转入MS+5mg/LNAA+5mg/L6-BA培养基中，可诱导丛芽产生，将丛芽切成单个不定芽，转移到MS+0.5mg/LNAA+4m
