《兔动脉粥样硬化斑块的定量分析及巴曲酶的作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《兔动脉粥样硬化斑块的定量分析及巴曲酶的作用（44页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、四川大学 硕士学位论文 兔动脉粥样硬化斑块的定量分析及巴曲酶的作用 姓名：黄娟 申请学位级别：硕士 专业：神经病学 指导教师：周东 20030415 兔动脉粥样硬化斑块 的定量分析及巴曲酶的作用 研究生： 导师： 摘 黄娟 周东 要 目的 1 探讨动脉粥样硬化斑块的定量分析方法 2 初步探讨巴曲酶对兔动脉粥样硬化斑块的作用 方法 将3 0 只日本大耳白兔分成对照组和高脂组，待高脂组形成动脉粥 样硬化模型后分为两组( 模型组和干预组) 。干预组以I O B U 巴曲酶干预 四周，同时用等量生理盐水注射模型组和对照组。巴曲酶干预四周后取 各组血液标本及血管标本，计算A s 指数和A I 指数；对斑
2、块内脂质、内 皮细胞、平滑肌、胶原纤维、弹力纤维染色，用普通光学显微镜和激光 扫描共聚焦显微镜观察并三维重建摄像。将获得的图像输入计算机，在 A d o b ep h o t o s h o p ( V e r s i o n5 0 ) 的支持下，用U T H S C S A 图像工具软件计 算各成分面积与斑块面积的比值。 结果 1 主动脉进行A S 指数分析，对照组与模型组或干预组比较均有 只O 0 5 ，模型组与干预组比较足0 0 5 。 2 分析比较纤维蛋白原浓度，对照组与模型组比较P ) O 0 5 ，干预 组与模型组比较尺O 0 5 。 3 分析比较血脂变化，模型组或干预组与对照组相
3、比较，甘油三酯、 总胆固醇、低密度脂蛋白水平显著增高，尺O 0 5 ，而模型组和干预组之 问相比较没有明显差别( 乃O 0 5 ) 。高密度脂蛋白水平也相应有所增高， 但乃0 0 5 。 4 分析A I 指数，对照组与干预组或模型组比较只O 0 5 ，干预组与 模型组比较乃0 0 5 。 5 定量分析斑块各成分，干预组比模型组胶原纤维面积百分比增加， 只0 0 5 ；比较脂质面积百分比乃O 0 5 ；比较内皮细胞面积百分比乃O 0 5 、 比较平滑肌面积百分比乃0 0 5 。 结论 l 本实验探讨了对动脉粥样硬化斑块进行定量分析的方法。 2 巴曲酶可能具有稳定动脉粥样硬化斑块的作用，但机理不明
4、。 关键词定量分析动脉粥样硬化斑块 激光扫描共聚焦显微镜巴曲酶 T h e q u a n t i t a t i v ea s s e s s m e n t o fr a b b i ta t h e r o s c l e r o t i c p l a q u e a n dt h ei n f l u e n c eo fB a t r o x o b i no nr a b b i t a t h e r o s c l e r O s i s P o s t g r a d u a t e T u t o r A b s t r a c t H u a n g J u a n Z
5、 h o u d o n g P u r p o s e 1 T oq u a n t i t a t i v e l ya s s e s st h ea t h e r o s c l e r o f i c p l a q u e 2 T os t u d yt h ei n f l u e n c eo f B a t r o x o b i no nr a b i t ta t h e m s c l e r o s i s M e t h o d s 3 0 J a p a n e s eb i g e a rr a b b i t sw e r ed i v i d e di n
6、 t oc o n t r o l g r o u p a n d h i g h - l i p i dg r o u p A f t e r a t h e m s c l e r o s i sm o d e lW a s s u c c e s s f u l l y m a d e , l l i g h - l i p i dg r o u pw a sd i v i d e di n t o 2g r o u p s ( m o d e lg r o u pa n dt r e a t m e n t g r o u p ) 1 0 B UB a t r o x o b i n
7、w a s i n j e c t e di nt h et r e a t m e n tg r o u p ，a n ds a l i n eW a s i n j e c t e di nt h em o d e lg r o u pa n dt h ec o n t r o lg r o u p T h eb l o o da n da r t e r y s a m p l e so fe a c hg r o u pw e r ec o l l e c t e da f t e r4w e e k s 、t r e a t m e n t t h eA Ia n d A Si n
8、d e xw e r em e a s u r e da n dc a l c u l a t e d W i t hd i f f e r e n td y i n g ，t h el i p i d ， e n d o t h e l i u m ，s m o o t hm u s c l e ，c o l l a g e nf i b e ma n de l a s t i cf i b e r so ft h ev a s c u l a r p l a q u ew e r eo b s e r v e du n d e rl i g h tm i c r o s c o p ya
9、n dl a s e rs c a n n i n gc o n f o c a l m i c r o s c o p y ( L S C M ) I n p u t t i n gt h ei m a g e si n t oc o m p u t e r ，w i t ht h eh e l po f A d o b e p h o t o s h o p ( V e r s i o n 5 O ) a n dt h eU T H S C S A i a m g e t o o ls o f t w a r e w e c a l lc a l c u l a t et h er a t
10、 i o so fe a c he l e m e n t 、Sa r e at ot h ea t h e r o s c l e r o t i cp l a q u e 、s a r e a R e S U I t s 1 A n a l y s i so nA S i n d e xo fa o r t as h o w s ：c o m p a r i n gc o n t r o lg r o u pw i t h m o d e lg r o u pa n dt r e a t m e n t g r o u p ，P 0 0 5 4 A n a l y s i so nA Is
11、 h o w s ：c o m p a r i n gc o n t r o lg r o u pw i t hm o d e lg r o u p a n dt r e a t m e n tg r o u p ，P 0 0 5 ；n os i g n i f i c a n tc h a n g eo n s m o o t hm u s c l ea r e a ，P 0 0 5 C o n c l u s i o n 1 T h et r i a l e x p l o r e an e wm e t h o do f q u a n t i t a t i v e a s s e s
12、 s m e n t o f a t h e r o s c l e r o t i cp l a q u e 3 B a t r o x o b i nm a ym a k et h ea t h e r o s c l e r o t i cp l a q u em o r es t a b l e ，b u t 4 n e e dm o r er e s e a r c h K e yW o r d s ：Q u a n t i t a t i v ea s s e s s m e n t A t h e r o s c l e r o t i cp l a q u e L a s e
13、r S c a n n i n gC o n f o c a lM i c r o s c o p y B a t r o x o b i n 5 兔动脉粥样硬化斑块的定量分析及巴曲酶的作用 研究生：黄娟 导师：周东 前言 动脉粥样硬化( A t h e r o s c l e r o s i S ，A S ) 是严重危害人类健康的常见 病之一。近年来，本病的发病率在我国有明显增加的趋势。重要器官的 动脉粥样硬化病变会对人体造成一系列损害，因此对A S 的预防和治疗是 人们关注的焦点。近期研究表明动脉粥样硬化斑块的性质对于一系列临 床表现极为重要。斑块的脆弱性( 即斑块的不稳定性) 与斑块内高
14、脂质 含量密切相关。稳定性斑块与不稳定斑块的形态结构和脂质含量都有 明显的区别。定性分析动脉粥样硬化斑块具有多种局限性“1 ，更为精确 的研究方法应是定量分析。通过对斑块大小的定量分析，研究者可以更 明确的了解斑块的形成过程：通过对斑块成分的定量分析，可以更清楚 地评价各种干预措施对阻止粥样硬化斑块形成和破裂的疗效，最终指导 临床治疗冠状动脉性心脏病、脑梗死等疾病。 早期研究者尝试许多方法定量评估动脉粥样硬化斑块。包括在显微 镜目镜上安装网格装置，目测斑块大小、“点计数法”、伴或不伴计算机 辅助的“测面积法”、“。1 9 8 7 年P a i g e n 0 1 等人创造了一种斑块定量 测定方
15、法，这种方法在以后很长时间内被作为标准的定量方法。他们选 取C 5 7 B L 6 大鼠，经高脂饮食造模成功后，行1 0 I - J m 厚度的主动脉横行 切片共3 0 张，每隔一张予油红O 染色。选取第3 、7 、l l 、1 5 、和1 9 号 切片作评估，这样，两张切片之问的距离就是8 0 um ，在显微镜的目镜 上置以计数的网格装置，沿血管周长测量斑块的长度，并测量斑块的平 均厚度，其长度厚度= 斑块面积( ui 3 32 ) 。这样不需要观察所有切片后 再选择染色面积最大者作评估，因而更快，而且可以测量到斑块在血管 内壁的长度，从而计算斑块的体积大小。 1 9 9 8 年D o u
16、g l a s 。1 等人使用免疫组织化学、共聚焦荧光显微镜和 计算机图像分析技术对动脉粥样硬化斑块进行定量分析的技术，选用 A p o E 缺陷大鼠和C 5 7 B L 6 大鼠建立动脉粥样硬化模型；选取含动脉粥样 硬化斑块的主动脉弓处组织，并制成3 0um 厚的冷冻切片。使用共聚焦 显微镜扫描复合染色后的厚切片。并将数码相机拍摄的图像导入计算机 中。根据像素值定量计算斑块各成分的面积及其百分比。M a r i l y n “3 等人 对上述定量分析方法进行改良，并用于动脉粥样硬化斑块成分变化与年 龄、性别关系的对照分析。 巴曲酶是一种降纤酶，是由巴西蝮蛇B o t h r o p sm o o j e n i 中提取的蛇 毒素，药理研究表明它能系统调整凝血一纤溶两大系统的失衡，显著改 善血液流变学诸指标。纤溶系统活性及血粘滞度的改变，将影响A S 的发 展“1 。本实验在现有研究的基础上结合实际条件，探讨定量分析兔动 脉粥样硬化斑块的方法及巴曲酶对动脉粥样硬化斑块
