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1、血站开展核酸检测血站开展核酸检测 介绍介绍 辽宁省血液中心辽宁省血液中心 王芳王芳 主要内容主要内容 一一 核酸检测概况核酸检测概况 二二 开展核酸检测的几方面工作开展核酸检测的几方面工作 ( (一一) )检测系统的选择检测系统的选择 ( (二二) )实验室新建实验室新建 ( (三三) )人员的选择与培训人员的选择与培训 ( (四四) )工作流程的调整及检测策略的制定工作流程的调整及检测策略的制定 ( (五五) )质量管理体系文件的编写质量管理体系文件的编写 三三 检测过程关键点的控制检测过程关键点的控制 四四 H HIVIV阳性献血者追踪检测结果阳性献血者追踪检测结果 第一阶段：科研第一阶段
2、：科研,2003,2003年年 项目项目:HCV:HCV 形式形式: :科研科研 数量数量:8:8万份万份 第二阶段：常规检测第二阶段：常规检测,2008.8,2008.8- - 2010.52010.5 项目项目:HBV:HBV、HCVHCV、HIVHIV 09.709.7月前月前-检测全血检测全血 09.709.7月后月后-增加血小板检测增加血小板检测 数量数量: :约约153686153686万份万份 结果：结果：HBVHBV- -DNADNA阳性阳性2222例（例（1/69871/6987） 一一 核酸检测概况核酸检测概况 第三阶段第三阶段: :试点、常规检测试点、常规检测:2010.
3、6:2010.6现在现在 项目项目:HBV:HBV、HCVHCV、HIVHIV 数量数量: :约约8474284742份份(2010.6(2010.6- -2011.4.21)2011.4.21) 结果：结果：HBVHBV- -DNADNA阳性阳性1313例（例（1/65171/6517） HIVHIV- -RNARNA阳性阳性1 1例例 总结总结:2008.8:2008.8- -2011.4.212011.4.21检测数据检测数据 总共检测约总共检测约238428238428万份标本万份标本 2008.82011.4.21检测数据检测数据 EIA全部合格的全血及未全部合格的全血及未经过经过E
4、IA检测检测的血小板的血小板 检测数量：检测数量：238428 HIV RNA“窗口期”窗口期” 1例例 (1: 238428 0) HCV RNA 0例例 HBV DNA 35例例 (1:6812) 检测系统的选择检测系统的选择 实验室新建实验室新建 人员的选择与培训人员的选择与培训 工作流程的调整及检测策略的制定工作流程的调整及检测策略的制定 质量管理体系文件编写质量管理体系文件编写 二二 开展核酸检测的几方面工作开展核酸检测的几方面工作 TaqMan PCR 实时荧光PCR (具有检测DNA模板优势) TMA 转录介导的扩增 (具有检测RNA模板优势) 罗氏 国内国内外外 血液核酸血液核
5、酸 筛查产品筛查产品 浩源 科华 达安 TaqMan PCR 实时荧光PCR (具有检测DNA模板优势) TaqMan PCR 实时荧光PCR (具有检测DNA模板优势) 诺华 （一）（一）检测系统的选择检测系统的选择 单管复合单管复合PCR PCR 同时鉴别三种病原体同时鉴别三种病原体 （二）实验室新建（二）实验室新建 实 验 室 平 面 图 实 验 室 平 面 图 试剂准备区试剂准备区 标本制备区标本制备区 扩增分析区扩增分析区 核酸实验室（核酸实验室（ 备用备用 进口试剂）进口试剂） 试剂准备区试剂准备区 提取扩增分析区提取扩增分析区 ? 走廊走廊 人员选择人员选择 工作作风严谨、认真工
6、作作风严谨、认真 较强的与人合作能力较强的与人合作能力 独立完成工作独立完成工作 善于思考的人善于思考的人 （三）人员的选择与培训（三）人员的选择与培训 （四）工作流程调整及检测策略的制定（四）工作流程调整及检测策略的制定 顺利开展血小板核酸检测顺利开展血小板核酸检测 核酸检测流程及策略核酸检测流程及策略 “窗口期”风险“窗口期”风险 大于全血大于全血 MSMMSM占占HIVHIV感染者的比例感染者的比例 12.50% 32.50% 51.16% 07年全国09年全国06-09年沈阳献血者 百分比 HIV感染者中感染者中MSM的比的比 例例 20062006- -20092009年沈阳市感染年
7、沈阳市感染HIVHIV的献血者的献血者 首次献血、有献血史者的比例首次献血、有献血史者的比例 沈阳市沈阳市2006-2009年年HIV感染者中感染者中 首次献血与有献血史者的比例首次献血与有献血史者的比例 顺利开展血小板核酸检测顺利开展血小板核酸检测 困难困难 有效期短有效期短 机采最长机采最长5 5天天. . 手工制备血小板（手工制备血小板（2424小时）小时）. . 采集、检测方式受临床制约采集、检测方式受临床制约 随要随采、随采随检随要随采、随采随检, ,非集中时间检测非集中时间检测. . NATNAT检测周期相对较长检测周期相对较长 带来的问题带来的问题 血小板过期报废血小板过期报废
8、影响临床用血及时性影响临床用血及时性 招募招募 保证充足的血小板献血员队伍保证充足的血小板献血员队伍 计划招募（计划招募（根据临床提前根据临床提前3 3天预约量天预约量+ +库存量库存量） 固定献血者占采集量固定献血者占采集量85%85%（20092009年）年） 采集及制备采集及制备 血小板全部为机采血小板全部为机采. .没有手工制备血小板没有手工制备血小板. . 采用密闭采血袋采用密闭采血袋, ,保存期保存期5 5天天. . 各部门的配合与协调各部门的配合与协调 血液发放血液发放 建立预约制度建立预约制度. . 建立合适的血小板库存建立合适的血小板库存 先进先出先进先出, ,与临床保持良好
9、的关系与临床保持良好的关系. . 过期报废情况：过期报废情况： 实验室工作调整实验室工作调整 工作模式工作模式: :早早8 8晚晚4(4(人员精力充沛、状态良好人员精力充沛、状态良好) ) 原则：解压、保护检验人员原则：解压、保护检验人员. . 标本接收标本接收-采血当天采血当天 EIAEIA检测检测-采集后第采集后第2 2天天, ,当天出最终结论报告当天出最终结论报告. . 核酸检测核酸检测: : 全血全血 EIA(EIA(合格合格) )NAT(NAT(第第3 3天天) ) 血小板血小板 :EIA:EIA与与NATNAT平行检测平行检测( (第第2 2天天) ) 采用采用依据依据: :快筛、
10、阳性率低快筛、阳性率低 确保报告时限确保报告时限 血小板血小板3030小时小时 全血全血5454小时小时 7+1检测模式检测模式 “(+)”代表反应性 “()”代表非反应性 检测同批血液中检测同批血液中 同型血血辩同型血血辩 所有血辩所有血辩 核酸核酸 （） 混合样本检测混合样本检测 核酸核酸（） 批放行批放行 核酸核酸（+ +）拆分样本检测拆分样本检测 采血管（采血管（） 血辫（血辫（） 批放行批放行 批放行批放行 采血管采血管 （+ +） 血辫血辫（+ +） 采血管（采血管（+ +） 血辫血辫 （） 采血管（采血管（） 血辫血辫 （+ +） 留串样留串样 血液报废血液报废 献血者随访献血者
11、随访 批放行批放行血液报废血液报废 献血者随访献血者随访 批放行批放行 分析原因 批放行批放行 再检血辩再检血辩 核酸（核酸（+ +） 血液报废血液报废 献血者随访献血者随访 另一血辩另一血辩 核酸核酸 （+ +） 分析原因 采血管、血辫采血管、血辫 核酸检测流程及策略核酸检测流程及策略 三检三检 依据相关标准及规范等依据相关标准及规范等 “医疗机构临床基因扩增管理办法”“医疗机构临床基因扩增管理办法” “医疗机构临床基因扩增检验“医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则实验室工作导则” “血站核酸检测试点实验室技术指导意见”“血站核酸检测试点实验室技术指导意见”等等 由实验操作人员编写由实验操
12、作人员编写. . 通过试运行，确认文件通过试运行，确认文件. . 先编写关键环节，逐渐完善先编写关键环节，逐渐完善. . （五）质量体系文件的编写（五）质量体系文件的编写 序号序号文件名称文件名称文件编号文件编号版本号版本号 1 1核酸实验室岗位描述核酸实验室岗位描述LNBC/CLNBC/C- -519519- -JYJY0/A0/A 2 2核酸实验室流程图核酸实验室流程图LNBC/CLNBC/C- -520520- -JYJY0/A0/A 3 3核酸实验室关键控制点的识别和监控规程核酸实验室关键控制点的识别和监控规程LNBC/CLNBC/C- -521521- -JYJY0/A0/A 4 4
13、核酸实验室关键设备故障应急预案核酸实验室关键设备故障应急预案LNBC/CLNBC/C- -522522- -JYJY0/A0/A 5 5核酸实验室试剂、质控品、标准品管理制度核酸实验室试剂、质控品、标准品管理制度LNBC/CLNBC/C- -523523- -JYJY0/A0/A 6 6核酸实验室血液检测标识的管理规程核酸实验室血液检测标识的管理规程LNBC/CLNBC/C- -524524- -JYJY0/A0/A 7 7 人类免疫缺陷病毒（人类免疫缺陷病毒（HIVHIV- -1 1）、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸检测）、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸检测 试剂盒（浩源机器）操作规程试剂盒
14、（浩源机器）操作规程 LNBC/CLNBC/C- -525525- -JYJY0/A0/A 8 8 人类免疫缺陷病毒（人类免疫缺陷病毒（HIVHIV- -1 1）、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸检测）、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸检测 试剂盒（浩源手工）操作规程试剂盒（浩源手工）操作规程 LNBC/CLNBC/C- -526526- -JYJY0/A0/A 9 9检验科检验科STARSTAR全自动样品处理系统操作规程全自动样品处理系统操作规程LNBC/CLNBC/C- -527527- -JYJY0/A0/A 1010EZbead systemEZbead system- -3232核酸提取
15、仪操作规程核酸提取仪操作规程LNBC/CLNBC/C- -529529- -JYJY0/A0/A 1111荧光定量荧光定量PCRPCR仪（仪（ABI7500ABI7500）操作规程）操作规程LNBC/CLNBC/C- -530530- -JYJY0/A0/A 1212紫外线灯标准操作规程紫外线灯标准操作规程LNBC/CLNBC/C- -531531- -JYJY0/A0/A 1313检验科核酸实验室标本管理操作规程检验科核酸实验室标本管理操作规程LNBC/CLNBC/C- -532532- -JYJY0/A0/A 1414BIOBASEBIOBASE生物安全柜操作规程生物安全柜操作规程LNBC
16、/CLNBC/C- -534534- -JYJY0/A0/A 1515检验科核酸实验室结果发布操作规程检验科核酸实验室结果发布操作规程LNBC/CLNBC/C- -535535- -JYJY0/A0/A 1616检验科核酸实验室试验结果判定准则检验科核酸实验室试验结果判定准则LNBC/CLNBC/C- -536536- -JYJY0/A0/A 1717检验科核酸再检操作规程检验科核酸再检操作规程LNBC/CLNBC/C- -537537- -JYJY0/A0/A 1818核酸实验室清洁消毒与温、湿度控制规程核酸实验室清洁消毒与温、湿度控制规程LNBC/CLNBC/C- -538538- -JYJY0/A0/A 1919 检验科核酸实验室记录管理规程检验科核酸实验室记录管理规程 LNBC/CLNBC/C- -539539- -JYJY0/A0/A 202
