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1、 毕业论文毕业论文 题题 目：目： 低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖、丙二醛、脯低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖、丙二醛、脯 氨酸含量的影响氨酸含量的影响 姓姓 名名： 熊熊鹏鹏 学学 号号： 0 07 71 15 52 20 05 50 00 02 2 指指 导导 教教 师：师： 李小安李小安 专专 业业 年年 级：级： 环境科学环境科学 20072007 级级 所在学院和系：所在学院和系： 生物科学系生物科学系 完完 成成 日日 期：期： 20112011 年年 5 5 月月 3131 日日 答答 辩辩 日日 期：期： 20112011 年年 6 6 月月 1313 日日 低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖、
2、丙二醛、脯氨酸含量的影响 熊鹏 （青海大学生物科学系,青海西宁,810016） 摘要摘要 试验以大叶秦艽为研究对象，将大叶秦艽植株置于 4条件下生长，培养时间分别为 24、48、72 小时。研究低温胁迫下大叶秦艽可溶性糖、脯氨酸、丙二醛含量的变化。结果表明： 大叶秦艽的可溶性糖含量随着低温胁迫时间的增加而逐渐增加；丙二醛和脯氨酸的含量随着低温胁 迫时间的增加而出现升降升的变化规律。 关键词：关键词：大叶秦艽，脯氨酸，丙二醛，可溶性糖，低温胁迫 Low Temperature Stress on Proline Gentiana macrophylla, MDA and Soluble Suga
3、r Content Xiong Peng (Department of biology Science, Qinghai university, Xining, 810016) Abstract Gentiana macrophylla experiment, as the research object, the plants of Gentiana macrophylla growing at 4 conditions, training time was 24,48,72 hours. Study under low temperature stress of Gentiana macr
4、ophylla soluble sugar, proline, MDA changes. Gentiana macrophylla results showed that the soluble sugar content increased with the increase of low temperature stress of time and gradually increase; MDA and proline content increased with time of cold stress appears up - down - up were studied. Keywor
5、d: Gentiana macrophylla Proline，MDA ，Soluble sugar，Low Temperature Stress 目录 1 绪论 .1 2 材料与方法 .2 2.1 试验材料 .2 2.2 材料处理 .2 2.3.1 测定项目.2 2.3.2 测定方法.2 2.3.3 数据处理.3 3 结果与分析 .3 3.1 可溶性糖含量在低温胁迫下的变化 .3 3.2 丙二醛含量在低温胁迫下的变化.4 3.3 脯氨酸含量在低温胁迫下的变化.5 4 讨论 .6 4.1 低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖含量的影响 .6 4.2 低温胁迫对大叶秦艽丙二醛含量的影响 .6 4.3 低温
6、胁迫对大叶秦艽脯氨酸含量的影响.6 5 结论 .7 参考文献.9 致谢11 1 绪论 青海大学生物科学系 1 1 绪论 温度是影响植被分布的主要生态因子之一，区域植被类型分布格局是长期对温度和热量环境适 应的结果。大叶秦艽若要大面积种植，需要考虑对引进地温度和热量因子的适应。我国青藏高原地 势高,气候严寒,自然条件十分严酷,寒冷的气候条件使各种草本植物均受到不同程度寒害的影响,对 大叶秦艽等具有经济价值的植物生存以及潜在产量和品质特性的发挥都有很大威胁。通过研究筛选 抗寒性较强，适宜该地区种植的大叶秦艽种质资源，对该区域农村经济、产业结构调整和生态环境 保护具有重要意义。 大量研究表明，低温胁
7、迫可使像大叶秦艽(Gentiana macrophylla Pall)这类龙胆科(Gen- tianaceae)植物积累更多的脯氨酸、丙二醛、可溶性糖1等。这些物质的大量积累可降低组织和细 胞的冰点温度，使细胞的水合度增大，保水能力增强，避免原生质在低温下的脱水伤害；也是越冬 植物的重要能量和更新芽的萌动力，与大叶秦艽的抗寒性密切相关1-2。植物的抗寒性还与植物体 内保护酶系统的活性和膜脂过氧化程度密切相关，保护酶活性高的植物品种对环境反应快，抗氧化 能力强，抗寒性也强。 秦艽又称大叶秦艽(Gentiana macrophylla Pall),为龙胆科(Gen-tianaceae)多年生草本植
8、物,是我 国传统常用中药材,也是国家重点保护的野生药材之一,主要分布在陕西西部和甘肃东部地区3. 其 以根入药,有祛风湿,清湿热,止痹痛之功效4 。化学成分为环烯醚萜甙类,主要是龙胆苦甙、秦艽 甙等生物碱4,5,对风湿性关节炎有显著的作用,对真菌也有明显的抗性6. 2000 年版 中规定,我国现在使用的中药秦艽的4 种原植物分别是大叶秦艽(Gentiana macrophylla Pall)、粗茎秦艽(Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.)、麻花秦艽(Gentiana macrophylla Pall)和小 秦艽(Gentiana dahurica Fis
9、ch)4.传统认为这4 种秦艽中,大叶秦艽的药用品质最佳7 而且历代 草本记载的中药秦艽只有大叶秦艽这一种3.由于秦艽是中药材商品生产的优势资源之一,国内外市 场需求逐年增加,加之乱采乱挖,使其野生资源日益枯竭,应用组织培养方法繁殖和保护野生的药用 植物秦艽种质已成为当务之急. 目前,在对大叶秦艽的研究中只对其化学成份，药用有效成分研究较多较完善系统，而对大叶 秦艽在低温环境下生长其生理特性变化研究几乎是空白。大叶秦艽作为一种中国传统中药材，近年 来受到越来越多的关注。由于近年来临床用药量的增加与多年的过度采挖,造成了目前大叶秦艽资 源匮乏的现状，研究植物在不良环境下生命活动的规律，不仅有利于
10、全面和彻底地了解植物的正常 生理活动，而且对提高植物生产力、保护环境也具有重要的指导作用。因此，通过对大叶秦艽在低 温胁迫下与室温下的可溶性糖、丙二醛、脯氨酸含量的对比研究，可以在低温条件下根据不同品种 的大叶秦艽体内的可溶性糖、丙二醛、脯氨酸等含量的变化规律判别不同品种大叶秦艽的抗寒性强 弱，筛选出抗寒性较强的品种在青藏高原上种植。还可以根据大叶秦艽体内的可溶性糖、丙二醛、 脯氨酸等这些物质的含量受低温影响的变化规律，在低温来临前通过人为增施一些物质提高细胞 内此类物质的含量以增加大叶秦艽的抗寒性，降低因低温带来的冻害或冷害损失。 青海大学本科毕业论文：低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖、丙二醛、脯
11、氨酸含量的影响 2 青海大学生物科学系 2 材料与方法 2.1 试验材料 大叶秦艽（无菌培养）由何涛老师提供。 2.2 材料处理 将上述培养好的大叶秦艽植株置于 4低温下光照培养，培养时间分别为 24、48、72 小时。 处理后的材料分别进行可溶性糖、丙二醛、脯氨酸含量测定，每个实验重复 3 次。 2.3 测定项目与方法 2.3.1 测定项目 测定项目包括：可溶性糖、丙二醛（MDA） 、脯氨酸的含量。 2.3.2 测定方法 （1）可溶性糖含量 采用苯酚法测定8 ，取 4、25下处理过的大叶秦艽新鲜叶片，擦净 表面污物，剪碎混匀，在研钵中进行研磨，研磨成匀浆。称取 0.100.30g，共 3 份
12、，或干材料。 分别放入 3 支刻度试管中，加入 510mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30min（提取 2 次） ，提取液过滤入 25mL 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。吸取 0.5mL 样品液于试管 中（重复 2 次），加蒸馏水 1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚，浓硫酸溶液， 显色并在 485nm 波长下测定吸光度，求出大叶秦艽可溶性糖的含量。 图1为可溶性糖含量的标准曲线,该曲线的相关系数为0.954，说明本次的测定方法准确可行， 可以作为后面实验的标准曲线。 可溶性糖标准曲线 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 10
13、204060 浓度（mg/g） 吸 光 值 80 图1 可溶性糖含量的标准曲线 Fig.1 standard curve of Soluble sugar Y=0.018X+0.007 R2=0.954 3 结果与分析 青海大学生物科学系 3 (2)丙二醛的含量 取4、25下处理的大叶秦艽不同部位的叶片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，称2g叶片，加入5mL 磷酸缓冲液（50mmoL，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中 研磨提取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4）离心10min，其上清液即为MDA提取液，取1mL MDA提取液，加3mL 27三氯乙酸和 1mL 2%TBA。混和液
14、在95度水浴中保温30min后，立即置于 冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定其吸光值，求出大叶秦艽丙二醛的含量。 （3）脯氨酸的含量 采用茚三酮显色法测定8-9 ，称取0.20 g鲜叶，剪碎置于具塞试管中， 加3的磺基水杨酸溶液5 mL，沸水浴中浸提10 min，冷却至室温，取上清液2 mL，加2 mL冰乙酸 和2.5酸性茚三酮显色液3 mL，沸水浴中显色40 min，冷却，用5 mL甲苯萃取，测定520 nm波长 下的吸光度。先建立脯氨酸含量的标准曲线，再测定低温胁迫下大叶秦艽植株的脯氨酸含量。 图2为脯氨酸的标准曲线： 脯氨酸含量的标准曲线 Y=0.0182
15、X+0.0065 R2=0.9924 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 123456 含量（g） 图2 脯氨酸含量的标准曲线 Fig.2 standard curve of proline content 2.3.3 数据处理 所得试验数据用 Excel 数据处理软件进行处理。 3 结果与分析 3.1可溶性糖含量在低温胁迫下的变化 大叶秦艽植株在4下胁迫24、48、72h，植株叶片中可溶性糖含量变化如图3所示： 青海大学本科毕业论文：低温胁迫对大叶秦艽可溶性糖、丙二醛、脯氨酸含量的影响 4 青海大学生物科学系 不同时间梯度低温处理对大叶秦艽可溶性糖含量的影响 0 2 4 6 8 10 12
