《低流速高效液相色谱质谱联用技术用于大鼠脑细胞中核苷酸的分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《低流速高效液相色谱质谱联用技术用于大鼠脑细胞中核苷酸的分析（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第2 4 卷增刊 2 0 0 3 年1 0 月 质谱学报 J o u r n a lo fC h i n e s eM a s sS p e c t r o m e t r yS o c i e t y V 0 1 2 4 S u p p l O c t 2 0 0 3 低流速高效液相色谱一质谱联用技术用于 大鼠脑细胞中核苷酸的分析 蔡宗苇“”，钱天秀1 ，杨思敏2 ( 1 香港漫会大学化学系香港 2 香港浸会大学生物系，香港) 腺苷和其相应的核苷酸，单磷酸腺苷，双磷 酸腺苷和三磷酸腺苷是重要的生物分子，因为在 各种细胞内的生化过程中他们提供能量和反应 底物。检测他们在细胞内的水平对细胞内的能
2、量 代谢可提供有价值的信息，因此建立灵敏和可信 的分析方法来检测细胞中微量的核苷酸显得很 重要。 1 实验部分 1 1 主要仪器及装置 A P IQ S T A RP u l s a ri 型四极杆飞行时间质 谱联用仪：加拿大A p p l i e dB i o s y s t e m 公司产品， 电喷雾离子源；A g i l e n ti i 0 0 毛细管高效液相色 谱：美国A g i l e n t 公司产品。 1 2 实验材料及处理 大鼠C 6g l i o m a 细胞在含不同浓度氯化锌 的媒介中于3 7 分别培养3h ，除去媒介后用 高氯酸裂解细胞以提取核苷酸，再用等当量的氢 氧化
3、钾中和酸性提取液，然后离心，上清液用于 核苷酸检测。- - 6 基己胺离子对试剂和乙腈为流 动相用于核昔酸的分离，以正离子电离方式进行 检测。 2 结果和讨论 2 1 撒径液相柱用于核苷酸的分离 微径液相柱的优点在于能为质谱检测提供 较好的灵敏度以对微量成分达到有效的检测。 2 2 离子对试剂的应用 由于核苷酸的磷酸根上带负电荷，极性很 大，常规色谱条件下在反相柱上不会保留，但带 正电荷的离子对试剂能够和带负电荷的核苷酸 之间形成加合离子，使其能够用反相高效液相色 谱得以分离，并且能够用正离子质谱检测。离子 对和核苷酸之间形成的加合离子被选作定量分 析离子，因为它们比质子化的核苷酸离子灵敏度
4、高出几十倍。图1 为离子对试剂用在流动相中使 核苷酸得以分离的色谱图。 岂2 0 0 皇 鼎 七 1 0 0 0 。2 0 0 量 搽 基1 0 0 岂 皇 籁 0 76 2 A 【A M P + D M H A + H + m z 4 7 7 一 2 0 40 6 0 80l O 0 1 20 1 4 0 1 6 0 t r a i n 8 5 0 B 【A D P + D M H A + m z 5 5 7 L 20 4O60 g01 0 0 1 20 1 40 1 6 0 U m m 囤1离子对试剂和核苷酸加台离子 的液一质色谱豳 F i g 1L C M Ss p e c t r ao
5、 fi o n p a i r i n g a g e n ta n da d d u c ti o n 5o fn u c l e o t i d e 6 8质谱学报第2 4 卷 2 3 液相一质谱联用方法用于生物样品中核苷 酸的检测 建立的该液相一质谱联用方法应用于生物样 品中核苷酸的检测，结果显示，该方法对在极其 复杂成分的生物样品中的核苷酸具有很高的灵 敏性，检测限达到纳克级，所得结果已应用于细 胞能量代谢的研究。 参考文献： 1 C A Iz A n a l y t i c a lS c i e n c e s 2 0 0 1 ，1 7 a ：1 9 9 2 C A Iz S O N
6、 GF ，Y A N GM S JC h r o r n o t o g rA 2 0 0 2 ，9 7 6 ：1 3 5 L o wF l o w r a t eH P L C - M Sf o rN u c l e o t i d eA n a l y s i si nR a tB r a i nC e l l s C A IZ o n g w e i l 一，O l A NT i a n x i u l ，M i l d r e dS M Y A N G 2 ( 1 D e p a r t m e n to fC h e m i s t r y ，H o n g k o n gB a p
7、 t i s tU n i v e r s i t y ，H o n g k o n g ，C h i n a 2 D e p a r t m e n to fB i o l o g y H o n g k o n gB a p t i s tU n i v e r s i t y H o n g k o n g ，C h i n a ) A b s t r a c t ：Am e t h o du s i n gi o n p a i r i n gH P L C M Sw a sd e v e l o p e df o ra n a l y z i n ga d e n o s i n e
8、5 一 m o n o p h o s p h a t e ( A M P ) ，a d e n o s i n e5 一d i p h o s p h a t e ( A D P ) a n da d e n o s i n e5 t r i p h o s p h a t e ( A T P ) D i m e t h y l h e x y l a m i n e ( D M H A ) w a su s e da si o n p a i r i n ga g e n tt or e t a i na n ds e p a r a t et h ea n a l y t e so na
9、 r e v e r s e d p h a s em i e r o b o r ec o l u m nw i t h ag r a d i e n tp r o g r a m P o s i t i v ei o nE S I M Sw a su s e df o rt h e d e t e c t i o n A d d u c ti o n so fD M H Aw i t hA M P ，A D Pa n dA T Pw e r ed e t e c t e da st h em o s ti n t e n s i v e p e a k sa n d t h u ss e
10、l e c t e da sq u a n t i t a t i v ei o n s E x t e r n a lc a l i b r a t i o nm e t h o dw i t hl i n e a rr a n g e sf r o m0 1t O2 0 1 m o l Lf o rA M P ，2t o2 0 l m o l 1 。f o rA D Pa n d2 5t O2 0 z m o l Lf o rA T Pw a su s e df o rt h e q u a n t i f i c a t i o n T h em e t h o dw a sa p p
11、l i e dt Od e t e r m i n el e v e l so fA M P ，A D Pa n dA T P i ne x t r a c t so f C U h u r e dC 6g l i o m ac e l l st h a tw e r ep r e t r e a t e dw i t h v a r i o u sc o n c e n t r a t i o n so fZ n T h er e s u l t si n d i c a r e dt h a tt h ea d d i t i o no fZ ni nar a n g eo f4 0t O
12、1 2 0p g m Ld i dn o ta f f e c tt h ee n e r g ys t a t u so ft h e c e l l s K e yw o r d s ：m a s ss p e c t r o m e t r y ；a n a l y s i so fn u c l e o t i d e ；H P L C M S ( 上接第7 6 页) M a t r i xE f f e c t si nt h eD e t e r m i n a t i o no fB i t e s p i r a m y c i ni n H u m a nP l a s m
13、aa n dU r i n eW i t hL C M S M S T A N GY u n b i a o ，W UY i W A N GY i n g W U ，S H IX i a n g g u o ，H UL i g a n g ，G UJ i n g k a i ( R e s e a r c hC e n t e rf o rD r u gM e t a b o l i s m J i l i nU n i v e r s i t y ，C h a n g c h u n1 3 0 0 2 1 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：T h em a t r
14、i xe f f e c t sw e r es t u d i e di nt h ed e t e r m i n a t i o no fb i t e s p i r a m y c i ni nh u m a np l a s m a a n du r i n ew i t hL C M S M S T h er e s u l t sd e m o n s t r a t e dt h a td i f f e r e n ts a m p l e sp r e p a t i o nm e t h o d s c o u l dg i v ed i s s i m i l a re f f e c t sc a u s e db ym a t r i x K e yw o r d s ：m a s ss p e c t r o m e t r y ；s t u d yo nm a t r i xe f f e c t ；L C M S M S ；d e t e r m i n a t i o no fh i t e s p i r a m y c i n ；h u m a np l a s m aa n du r i n e
