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1、低功率激光照射促进急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞增殖 罗丽张球 苏州大攀体育学院，江苏省苏州2 1 5 0 2 1 美键调； 蕊功率激光；肌激盟细胞；增殖 骨髂肌攒伤的防治怒避动医掌研究领域的热点稠难点问题，尽管近零对骨髂腻褥生奄修复的分子和细 胞擎调节机制已墩褥一定进展，题目麓在临床上尚来找到预防和治疗静骼嚣琏缀伤的特效方法，悸骼胍授伤 的防浓仍给逛动爨和教练嫩带来攥大圈扰。 低驹帮激光慰指不弓l 起组织细胞损伤，能对局部和全身起到刺激、调节和潺化作用的，l 、荆鬟激光。低 劝举激光疗法具商爨垒、方便、便霞、作闵广等优点，因前已褒仝避界缎多网家如加拿大、夔网、避班身： 等图家麻用r 临寐m
2、。在露I 肉损伤的廉篾方面，骶强度激光疗法的疗效亦褥别肯定，假箕作用机制仍不十 分清楚。奉研究采用美国透过F D A 谈W 的r c h i aE 虬( 匠卫) 型G 矗A 1 A s 低功攀激光器，对急性骨骼j l f 顿挫 伤模型大鼠进括治疗，观察低功鬻激光照射对肌卫星细胞增菠活性相攒伤骨骼肌辩生与修笈过程的影响， 探讨低功察激光对骨髂肌攒伤的防淤作磁。 低功帛激光照射促进急性骨骼肌顿挫伤大鼠肌卫星细胞增娥 l 材料和方法 1 1 材料 ( 1 ) 蜜骏动物；雄性S D 大鼠( 1 8 0 一2 2 0 9 ) 6 0 烈，嘲中国辩学靛。I 二海变骏动携帆0 提供。 ( 2 ) 主螫试剂：
3、小鼠抗大鼠增髓细腿核抵鼹( P c 姒) 单宠隆抗体、鼠两步法检测试剡盘( 包括内源性 过飘化物貉隧断测、辣梭魏标记苇抗小鼠多聚体) D A B 繇色斌削墩均购翻北瘵中杉盒桥篷物技术帮限公司。 ( 3 ) 主婺仪器设备：獒围E r c h o n i 矗E 跹( 地2 ) 型低功率激光器，O L 珈狰U S 光学显撇镜、| l I 张阻IH _ 6 0 0 透射电镜 1 2 实验方法 ( 1 ) 建悫动物糗塑：大鼠分笼饲养2 哭后，参照K 柚i 等捧1 的方法建囊夫鼠骨骼肌钝矬伤模型，即2 5 蹴憋比婆钠( o 。2 m L 1 0 0 9 ) 腹腔注射觫龄聪，将犬鼠聪肢擞诈艨、躁背脯9 0
4、。链篾，厢自制打击装鬟从 8 l c m 赢处翻l j _ ；i 疆鼹落下打击动物左小腿内测颟躐躐骨1 5 c m 处，燕力为3 。2 3 4 N ，幼能为2 。6 2J ，打谗 嘲积约o 7 8 5c m 。解剖证实舷下肢肌瓣钝挫伤戚功率达l O O 。 ( 2 ) 蜜骏分组艇治疗方案：将6 0 只大鼠随机分为激光治疗维( 3 0 必) 和囱然愈合蛆( 3 0 只) 。器组叉 进一步梭墩材时间分为攒伤聪翦1 2 。3 ，7 ，1 4 天缀。激光治疗组程掇伤髑部进行激光照射，袋用茨国 艮c h o n i 鑫E 跹( 跹2 ) 型低功率激光器，波长6 3 5 尬，功攀7 棚，照射面积0 4 c
5、 f ，功举镪縻1 7 。5 m W 锄。， 照射时闻2 陋i n ，每f ；：；I1 次，疗穰为1 0 必。妇然愈含编不进行滋疗。 ( 3 ) 标本墩材殿处理：兜称取动物棒燕，用2 5 戊巴比鼹钠( o 2 m L l g ) 羧腔注射麻醉动物菇， 速取损伤隧域腓肠肌，棚冰生瑷盐水洗去贱掰嫩渡，爵从每块组缳中切取l o X l x l 删f 组织，羽2 。5 戊三醛 嘲定，用F 电镜观察( 仅桶伤后旃3 ，7 ，1 4 炙缀进行此颂寓验，每组从6 _ 致动物中髓机取3 只动物) ：剿 氽郯分肌肉用l o 疆尔玛林围迩，用疆絷色兜镜观黎鞠免蔽组织化学变骏( 仪搅伤聪第1 ，2 ，3 。7 晨缀
6、 进搿鲍旋组化实黢) 。 凄) P c 滤躁位检测：采用常规2 步免痰维化法，按试剂盘说明粥搽作。以髓s 代替一抗作为阴性对 照，细胞核内禽有棕黄照胶粒者为阳性；饿棱形绺( 肌卫星细胞核为圆形或椭圆形) ，辩参照网一平谣骶 繁色切片，确认肌卫摄细胞P c N 矗阳性核。谯o o 倍光辘下观察缡聚，每张切片控蹴5 个服卫星细胞嗣性 核最多的视野进行计数，弗求出均数。 ( 5 ) 统计学分析：每维样奉数嘏闱均教士标准惹即( J 士s ) 表示，袋用s P s s l 2 。o 软传进行统计譬 处理，统计方法为方麓分折以P O 0 5 为肖照箸锻茇辫。 2 结果 2 1 髓染色光镜观察结巢 桶伤厝第
7、l 必：损伤硒部的悸髂肌纤娥崩解、碎裂炎性细胞浸润，疑巾激光治疗缀的大鼠掀伤硒龋 巍癌细胞比较浆中。授伤后第2 哭：T 毙链细胞数爨进步增加，以中性靛细胞荨l ：l 臣虢细胞为主。搬伤聪繁 3 天：隧缀均刚见犬激细胞梭，激光治疗缀授伤扁部可见大量细胞核撵列成躜珠样静服管彤成。损伤质 第7 天：随蛆均弼见丈燕新生的肌请鞠肌纤维。搦伤聪第1 4 无：激光滔疗缀醴熬奉禽会，翻然愈会缀尚 未愈，W 见淋巴细胞浸润。 2 2 电镜观察结粜 损伤蹈第3 灭；黼缀都蚵见活他的肌卫星细胞，细胞表现出胂胀，绷胞质一极蠛蘸椴形成细胞质突起 和疆伸，细胞梭周阴有许多肌毽形成；激光治疗组能观察副较多的滔化肌卫鼹细胞，
8、并可见融合缆裂，髋 熊形成亦更为率富。搅伤腐第7 炎：翻然_ ) 敷合缀可撼胍浆网扩张，线粒体肿胀，空腚化：激光治疗缀线辍 体教鬣多，空腔化少，肌浆网扩张少，糖藤数最较多。攒傍藤H 天：激光潞疗组蹬熬攀愈静，脱熬撵列 黢齐，z 线略深移；囱然愈合缀撼伤处仍来愈合。 2 3p Q 妊原位梭测 本实验结果发现，与自然愈会组捆比，激光治疗缀太鼠掇伤部位的骨黼觚中存在较澎的肌卫塑细胞 P c m 嗣性核，犬郝分阳性细胞核能乎肌膜鞠纂底膜之1 1 j i 】，谯肌纤维中也存巍蠛P c 塾淑阳性饺( 圈1 、潮2 ) 。 谯撇伤腐第1 ，2 ，3 ，7 天激光治疗组肌型嫩纲胞P c N A 阳性核数戮均高
9、于翻然您翕组，掰缎篾辩嶷霄龇蓍 性( P O 。0 5 ) 。 衰1低功率激光对急性骨骼胍顿挫伤丈斌胍卫羞纲胞增殖潘牲豹影晌表 P c K A 嗣性；i f L m 怒! E l l | 臌嫒簸精 分缀 攒伤盾爨l 天撷掰扁第2 必捅伤豁第3 天损伤黯第7 最 I _ ；| 然愈食缀4 1 7 士1 7 23 7 9 1 71 】9 5 0 】3 5 8舵盎8 鲫 激光淞疗组1 6 6 7 七4 9 7 +1 1 6 6 7 士1 4 5 4 审1 9 8 5 0 纛1 2 O O 幸5 7 3 3 悫i 莲2 4 尊 淀t 与自然愈禽缀闭取材l I 寸删点撩比P 、胍 球蛋囱( m y o
10、s i n ) 等，最终这贱细胞间原蠢的骨骼肌细胞栩艇融合，喊是彼此融合，形戒新的肌纤维细胞。 太麓的研究已经证实肌卫璺细胞程僭骼肌群生过程中所起的豢鬻髂嬲。一般情况下，只有猩电镜下才 瞧滴楚地游识肌卫星细胞，往黪通光镜下礁以谖别：此外，电予显馓镜虽然舷巍观地鼹察胍卫麓细胞的功 能活动变化识蚁能进杼定性观察，敞电镶在滋蛩研究飘卫攫细胞增蕺灞性的动态变化规律方瓤仍然撵猩 嬲限性。增磺纲胞镞抗缀P c 渔邈种檄肉辫白磺，是龄予擞为3 6 0 0 0 的高壤保守的分子，系D K A 聚合酶的 3 辅助蛋囱，其鬣的变化患D N A 台成一致。P c 枞的表达已被_ i | 正裳与细胞的增戆状态密切栩薨
11、。P 僦的合成宵 严格的细胞状态限制健，议 鹣现在增殖暖盛的细胞和肿癌细胞，处“擎静。如期的细胞沌乎没肖P 僦的台溅恒1 。 敝本研究用P c 撇矗勺表达裳代表肌卫望细魏的增髓活镶。 程骨髓肌搦伤的褥生壕修整过程中，最煎鞭的细胞活动之一麟怒。在繁长因子的作用下卫壤细臌被 激活，增生，提供肌肉稀生过程巾瓣终的D K A 。T i 等醋究发现，卫星细胞在肌肉掇伤晒l 天日p 开始墁l 髓墟1 。 B i s c h o f f 的卫凝纲胞增髓时间在攒伤聪I 黥出瑰n 】。H 衄e 游J i j5 一溪脱辍朦檄苻标记s 嬲细胞，黢脱伤盾麓l 灭，备噬作用翦没翁出现栋记的卫星细貔，籀4 灭樽生隧卫星细
12、胞增饿缎活跃：繁7 天激鼹细胞数下释”。 本文与前人的研究结聚纂本一簸，即在脱肉发生攥伤的2 4 h 内，卫星纲胞已被激活。往媳伤鼯旃l ，2 ，3 - 7 犬，激光治疗组嗍辩性的腿卫缀细胞核数朗均比自然愈合缀多，说明激汽治疗纽腓肠肌卫星继胞的灞 化、增难驻为活蹶。 近年来，临床医鬻工作者已将低功攀激光疗法艨用警飘纤蛾织炎、腱止点和腱周围羧伤等悸髂腻痰缡 的治疗。尽管鲤此，低功率激毙治疗作用的枫潮仍举十分添跫，这也在蘩鞭稷陂上制约r 糕劝黪激光疗滋 程临徕瞩攀中的进一掺擞麓。一嬷动物安骏研窥发现低功寒激光娩促进羧伤悸瓣肌的绺嫩与络艇。 B i b i k o v a 蒋用6 耐，3 1 2 J
13、 c f 的H e 激兜对蠊蜍的冻伤横型滕肠肌进行治疗。发现与j 仁治疗缀栩比。低劝 帑激光能促进肌纤维的再嫩，樽生速度提高达8 侬。熏e i s s 等磷究了6 蛹，s 1 2 c 0 的H e 谍e 激光对事术 部分切割伤模璎的大鼠腓肠肌的作用，结聚发现，照射缎的胍纤维樽生速度提黼了2 倍m 3 。也宥磷究没宵 发现低功率激光具有键翳髂肌撵生作用。o l i v e i r a 等研究了3 ，1 0 J c 皿? 两种剩摄的的强一A s 激光对内撩豢 攒伤的小鼠脱骨前肌的作用，结聚发现，这姆种剂最昀G _ a A 3 激光均没育促进落骼肌鞭嶷的作剐u 副。翳矫， A 啦r a l 磐研究y
14、2 。6 ，8 。4 ，2 5 c m j 三种誉间剂摄的H e - N e 激光对蛇毒缀伤攘型小鼠胫骨翦肌的治疗作用， 发现只有2 。6 J c m 2 的H e 嘣e 激光能够程进骨髂胍的湃生u 副。 还宵擎者研究了低功举激光对掰体培养骨潞肌细艟和j l f I 卫星蛔胞的镥用艇疑对细胞调带和分子斓节 功能的影响。s h e f e r 镩硐4 5 幽瀚的H e - N e 激光照射光血清培葬的幢熬肌细胞翱肌翌鹾细胞，发现谶剂壤的激 光照射具有显著的抗细胞凋”囊作用秘羽。程s h e f e r 撼的弱一壤研究中，发现低强度激光能激活细胞膜黼辍酸 激酶受体，崩动细胞外储号调节激酶和磷精酰肌
15、黪3 激酶嵇母转譬途径。使蛋臼翻译起贻麟予殿其抑制毂 结合鬣臼发生磷酸化，进而促进与细胞增骏相关的瀑囱质的翻译合成，胍卫星缎胞桴以融静患状态进入增 簸周期辨较长时间维持在增礅周期u 引。s c h 臀跹t z 等用H e 喇e 激光照瓣离体培养骨髂胍细胞，对脱细臌内钙 离子浓度、 葭零( 神经生长因子) 碰b 淑浓度变化进好了观察，他们认为低功率激光照射j | j ；f 越肌细胞内钙离 予浓度升礴，进j i | i 促进绷胞释放瀚F ，从藤对支配肌肉的神经产生影响m 1 。 研究煞聚的麓异可能岛激光的类型、波长，剂璺参数( 治疗方案) 第的幂间柯燕。研究表明，习i 同豢 型的低趣率激光穿透深度
16、蔷不栩网。烈肖达到一定的穿透深度，低功率激光的治疗作阁才研能得捌充分菠 擢。翁荚低功率激光穿透深艘的报邋整别缀太，与不涮激光的波长、强度、个体皮黻殷蔽下组织不同矬质 婷嘲豢肖关。一般认为波长在塞I ：外光谬诞域的激光穿透鬻深黪。A 1 呻a t b 曲磐删试F 举网类型激光包撼 H e N e ，H e e mG a A l A s ，a r g 能对犬躐戍胶的教威。结果鼹承所商类型的激光都能斑遴掰刚愈念，蕻中G a A l A s 激光对党攫皮肤的穿透力最好弘。 不间的荆麓的激巍照射弓I 起的生物学效殿和作用特点荫l 能宙所不栩网。本研究在预窦骏豹糕础上，添 用的剂最为1 7 5 殂滓c 0 ，照射时间为2 0 皿i n ，熬商比较明照的促进肌闲掰擞澉裂。攘于最佳剂懿与疗程仍 霄褥子今后进一_ 步研究。 4 小结 ( 1 ) 疆繁色光镜溉察结聚鼹承。激光治疗缀颧饿黼管蝴现较荤、数擞较多；糕撼伤鼯第
