《人胃癌细胞trail的表达及其与细胞凋亡的相关性研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人胃癌细胞trail的表达及其与细胞凋亡的相关性研究（45页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山东大学 硕士学位论文 人胃癌细胞TRAIL的表达及其与细胞凋亡的相关性研究 姓名：张淑红 申请学位级别：硕士 专业：消化内科 指导教师：袁孟彪 20030416 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：越丝日期：兰翌! ：尘! j 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国
2、家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者警塑师繇哆越 期：主! 里主：垒! 占 山东大学硕士学位论文 人胃癌细胞T R A I L 的表达及其与细胞凋亡的相关性研究 专业 研究生 消化内科 张淑红 指导教师袁孟彪 摘要 目的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体T R A I L 具有选择性诱导肿瘤细胞 的特性，有望成为理想的抗肿瘤药物。目前T R A I L 诱导肿瘤细胞凋亡的具体途径 尚未明确，
3、抑癌基因p 5 3 和凋亡抑制基因b c l 一2 在这一途径中的作用尚存异议。 而有关人胃癌细胞的T R A I L 的研究很少，并且多数局限于体外和动物实验。本研 究旨在研究人体内胃癌细胞的T R A I L 表达及其与细胞凋亡的相关性，探讨p 5 3 和 b c l 一2 在T R A I L 的凋亡途径中的作用。方法：全部标本6 0 个，分为三组，胃癌 组与癌旁组各2 4 个，配对取自新鲜的外科手术标本，其中癌旁组织为距离肿瘤 组织3 厘米出的组织；正常组1 2 个，为相对正常胃黏膜组织，取自胃炎病人的 胃镜活检标本。用流式细胞术分别检测胃癌组、癌旁组和正常组的T R A I L 表达
4、以 及细胞凋亡，应用免疫组织化学染色方法检测胃癌组和癌旁组的p 5 3 和b c l 一2 表达。结果( 1 ) T R A I L 的表达：胃癌组为3 9 9 9 7 3 2 8 2 9 ，癌旁组为1 1 8 7 5 6 9 4 3 ，正常胃组织组为6 3 7 5 2 9 9 3 。三者之间有显著性差异，P 值均小于 0 O l 。不同胃癌组织T R A I L 的表达：低分化组为4 6 4 5 8 - 4 - 3 8 9 7 6 ，高、中分化 组为3 0 9 5 1 2 0 1 0 ：淋巴结转移组为4 1 0 0 4 3 6 0 8 4 ，无淋巴结转移组为 3 7 9 3 6 2 5 5
5、4 6 ；管状型胃癌组为3 0 5 6 1 9 0 3 ，乳头状胃癌组为4 1 4 l 2 5 2 6 ，粘液型胃癌组为2 4 1 l 1 4 8 6 ，印戒细胞组为6 7 8 9 5 3 7 6 ，未分化组 为3 4 3 5 3 3 2 4 8 。上述不同分化程度，不同病理分型及有无淋巴结转移组之间 P 值均 0 ，0 5 ，无显著性差异。( 2 ) 细胞凋( ) ：胃癌组为1 5 8 6 6 9 2 ，癌旁 山东大学硕士学位论文 组为7 7 2 5 0 2 ，两者对比P O 0 5 ，无显著性差异，与胃癌组比较P O 0 5 ，无暇萋差异。 2 、细胞捅亡率( ) ：胃潮组为1 5 8 6
6、 6 9 2 ，癞旁组为7 7 2 5 0 2 ， 两者辩毙差黪显著，P O 0 5 ，无驻著性差鼯，与胃癌组比较P O 0 5 ，差异显著。 3 、p 5 3 的表达：臀癌组阳性率6 5 2 2 ，癌旁鳃阳率为2 1 7 4 。两者对 比P O 。0 5 ，麓异显蓑。p 5 3 农黏液型褥癌中袋达率甄，仅为2 0 。嚣癯高分 化组p 5 3 阳性率为6 0 ，中分化组为8 7 5 ，低分化组( 除外黏液型) 为1 0 0 ， 4 、b c l - 2 豹表达：霉臻缝阳毪搴辐。4 5 ，癌旁缝秀1 3 6 4 ，二者差异 显著。 5 、各种液达之间相关性比较：T R A I L 表达与细胞凋亡
7、及p 5 3 表达与b c l 一2 表达之阉均戈妻线靼美美系，瞧是，随T R A I L 表达豹增热，缨戆烫亡及p 5 3 表达率和b c l - 2 表选率呈上升趋势。 6 、统诗学整理：采用S P S S 统诗分析较佟进行t 捡验、A N O V A 方筹分板、 P e a r s o n 相关分析。对非参数资料如p 5 3 和b c l 一2 的表达先分别进行量化： 表达( 一) 1 为0 ，( + ) 为1 ，( + + ) 为2 ，( + + + ) 为3 ，然后进行统计学分析。 山东大学删十学位论文 讨论 嚣癌是我鬻最零怒豹消能系糖瘰，男、女发痍率分剽受3 1 。4 1 0 万
8、1 2 0 5 1 0 万及1 5 9 1 0 万5 1 I 1 0 万，目前尚无明显下降趋势。以往认为 胃癌瓣形成怒细胞无限增生所致的缩脆集聚，匿前发璇，胃瘸细施不仅有增 生，掰且也存在凋亡。正常霹牯膜凋亡率很低，主要位于男糙膜颈郝，在胃 癌组织中，细胞凋亡率明显低于肠化生及胃粘膜上皮异型增嫩，而增生指数 帮鞠驻增寒，表明扶癌蔻痍交戮霉癌豹发釜中存在强亡与壤继豹异豢。霉燕 细胞凋亡与多种因素有关。 细脆漏亡是指细脆遵循熬自身的程序，瞻基因调控的主渤死亡过程，是 细骢巍然衰老死亡的一耪形式。细胞凋亡与穗序姓缨胞死亡烧疆个蠢送别的 概念。程序性细胞死亡是一个功能术语：而细胞凋亡则是一个形态术语。
9、尽 警诲多缀蕤磷亡我表? 奏歪瓣程彦毪耋萋憨死亡，蓬势不能说掰寿夔稳痔蛙纲 胞死亡都是细胞凋亡。细胞凋亡对多细胞有机体的发宵及内坏境的稳定的维 持至关重要。在肿瘤的发生发展中，不仅有细胞的增殖，同时也存在细胞凋 亡，瓣癯熬发生是缨腿捐亡与增生毙铡失调鹃结果。缨腿撰亡艴主要形态特 征是发生在细胞核内。核内染色质发生凝聚并呈新周样分布于核内周边，胞 棱阖缩，胞浆蒙缝，细蕤表鬻皱缭，微绒毛消失，与稳邻缨藏瓣离。缨耱袋 卷曲陷入核内，最厝裂解成多个由膜包裹的凋亡小体( A p o p t o t i cb o d y ) 。 凋亡小体很快被巨噬细胞或桐邻细臌吞噬。此全过稔没有将溶酶体等脆内容 物乡 滋
10、，没蠢姆胞爱成分爨放入照羚阉震中，数避免了炎症反应和嶷动免疫 反应的发生，与细胞坏死有稽本质的区别。 凋亡缩藏装旱豹生物纯学改变怒稳走e a ”浓度豹辩高，隧嚣鑫激活的内 源性核酸内切酶将D N A 链在核小体间切断，馒其断离成寡聚核小体长度的D N A 片断( 1 8 0 一2 0 0 b p ) 。在哺乳类动物细胞中醴经认识到了一魉基因及其产物 参与了缀魔塌亡熬调警，担楚今渴寒找到实鼯土控制垂掌缨腿或恶燃纲照凋 2 1 山东大学硕士学位论文 亡的基因，启动人类细胞凋亡通路的”开关”基因或称”杀手”基因仍未完全明 了。 T R A I L 是近年发现的肿瘤坏死因子超家族成员，多数研究表明，它
11、具有 不同于其它T N F 家族成员的独特生物学特性，即仅诱导肿瘤细胞及异常分化 细胞的凋亡而对正常细胞无毒性作用。T R A I L 受体分为两种，一种是死亡受 体，一种是诱捕受体。死亡受体可以表达于正常细胞及肿瘤细胞，且含有能 够传递凋亡信号的死亡结构域，与T R A I L 结合后在体外可迅速诱导各种细胞 株的调亡。诱捕受体主要表达于正常组织，而在肿瘤组织中表达很少，其分 子结构中不含有死亡结构域，与T R A I L 结合后不会诱导凋亡，而且因竞争性 地抑制死亡受体与T R A I L 的结合而对正常细胞起保护作用。 T R A I L 通过与其受体结合而诱导细胞凋亡。T R A I
12、L 诱导凋亡的信号传导 主要通过F A D D 途径，并且凋亡过程也是通过活化半胱一天冬氨酸蛋白酶 c a s p a s e s 系列分子而启动。处于非活化的酶原状态的C a s p a s e s 被活化后发 生凋亡蛋白酶的层叠级联反应，发生不可逆的凋亡。含有死亡结构域的胞浆 蛋白F A D D 通过死亡结构域与T R A I L 的死亡受体的胞浆区相作用，并传递死 亡受体活化后引起的各种信号。F A D D 的过量表达可以引起细胞凋亡，其死亡 结构域的某些点突变可以使它失去这种能力并阻断细胞凋亡。F A D D 的氨基端 具有致凋亡能力，单独表达F A D D 氨基端就足以引起凋亡，所以
13、F A D D 的氨基 端的序列被称为死亡效应结构域( d e a t he f f e c t o rd o m a i n ，D E D ) 。D E D 象死 亡结构域一样也是一种介导蛋白之间相互作用的接头结构域，具有D E D 结构 的蛋白之间可以互相结合起来。 T R A I L 的另一凋亡诱导途径是线粒体途径。线粒体是细胞生命活动控制 中心，它不仅是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心，而且是细胞凋亡调控中心。 细胞色素c 从线粒体释放是细胞凋亡的关键步骤。释放到细胞浆的细胞色素 C 在d A T P 存在的条件下能与凋亡相关因子1 ( a p o p t o s i s a s s o
14、c i a t e d f a c t o r 一1 ：A p a f - i ) 结合，使其形成多聚体，并促使c a s p a s e 一9 与其结合形 成凋亡小体，c a s p a s e - 9 被激活，被激活的c a s p a s e 一9 能激活其它的c a s p a s e 山东大学碰十学位论文 如c a s p a s e 一3 等，从丽诱导细胞凋亡。此外，线粒体还释放掏亡诱导因子 ( a p o p t o s i si n d u c i n gf a c t o r ，A I F ) ，参与激活c a s p a s e s 激滔后兹C a s p a s e s
15、以一种有条不紊的方式切断细胞与周圈的联系，拆散细胞骨架，阻断绷腿D N A 复涮鞍修复，干撬m R N A 蒡韬，损费D N A 与核结构，诱导缨缒表达可被其毽 的细胞吞噬的信号，并进一步使之降解为凋亡小体。 p 5 3 基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的撺癌基困，是一个已经瞬 确的在正豢缨胞分化靼缨胞致癯牲转化中起关键作用的基因。p 5 3 基因定位 于1 7 号染色体上，藏常的p 5 3 蛋白( 野生型) 存在于核内，在脱磷酸化时 活毽，育隧碍缨臆送入细藏周期静终用。在部分结肠癌、薅癌、莪骧癌和获 腺癌等均发现有p 5 3 糕因的点突变或蘧失，从而引起拜常的p S 3 蛋白表达， 而丧失
16、其生长抑制功能。从而导致细胞增生和恶交。野生整p 5 3 基因很容易 发生突变，转变成突燮型p 5 3 基因，突变型p 5 3 基因不但丧失了抑铡肿瘤生 长作用，反而具有致癌作用，成为癌基因。野生型p 5 3 基因与细胞周期生长 调节。细蘸转化的调节，D N A 复翩及诱导缨魏程序缝死亡毒密切关系。野生 型p 5 3 ( W t P 5 3 ) 的表达几乎见予各种有核细胞，但处于较低水平。W t p 5 3 的 抗肿瘤作用主要是阻滞G 1 G o 期，使细胞不熊进入S 期，从而抑镥细胞的增 蘧，p 5 3 基因在D N A 遭至g 破螺时，W t p 5 3 可与细胞棱内特异静D N A 部垃结合， 通过氯基酸的酸性激活邻近部位基因的启动予而促进基因的嵌达对抑制细 胞培殖的基因起蓟转录激活因子懿嚣用。另步 ，W t p 5 3 基因通过来调控一些 与细胞增殖有关的基因而起到肿瘤抑制作用。此外，p 5 3 基因还参与对细
