人工感染鸭病毒性肠炎急性病例超微结构变化的研究

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1、中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集( 2 0 0 4 年) o fc i p r o f l o x a c i nl a c t a t em i x e dd i e ti s1 02 5 a n d62 2 r e s p e c t i v e l y T h ed a t aw e r ed e s c r i b e db yt h et h r e e c o m p a r t m e n to p e nm o d e la f t e rI VF o l l o w i n gI Va d m i n i s t r a t i o n ，c i

2、p r o f l o x a c i nl a c t a t eW S Sw e l l d i s t r i b u t e da n d s l o w l ye l i m i n a t e dT h em a i np h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r ea sf o l l o w s ：t l 2 a = 01 6 h ，t l t z * = 08 6 h ，t l r z p 5 1 64 7 h ， v = 01 0Lk g “ ，V b = 3 0 3Lk g “ 1 ，C I 1 2L ( k

3、gh ) - 1T h ed a t aw e r ed e s c r i b e db yt h et W Oc o m p a r t m e n t o p e nm o d e lw i t hal a g t i m ea f t e ro r a l a d m i n i s t r a t i o no fc i p r o f l o x a c i nl a c t a t es o l u t i o na n do r a la d m i n i s t r a t i o no f c i p r n f l o x a c i nl a c t a t em i

4、 x e dd i e t T h ea b s o r b i n gr a t eo fc i p r o f l o x a c i nl a c t a t ei sh i g h e ra f t e ro r a la d m i n i s t r a t i o no f c i p r o f l o x a c i nl a c t a t es o l u t i o nt h a no r a la d m i n i s t r a t i o n o f c i p r o f l o x a c i a l a c t a t em i x e dd i e tT

5、 h em a i n p h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r ea f t e ro r a la d m i n i s t r a t i o no f c i p r o f l o x a e i nl a c t a t es o l u t i o na sf o l l o w s ：t m = 03 1 h ， h n 8 = 64 7 h ，c = 2 1 4 卜gm 一，T 0 f = 04 4 hT h e m a i np h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e

6、t e r s w e r ea f t e ro r a la d m i n i s t r a t i o n o f c i p r o f t o x a c i nl a c t a t em i x e d d i e ta Sf o l l o w s ：tu r z o = 05 3 h ，t l 21 l = 1 44 7 h , c ，。，07 0 斗gm 一，1 k 、2 11 0 hA sr e s u l t o f t h el o wb i o a v a i l a b i l i t y , i ti su n s u i t a b l et ou s e

7、c i p r o f l o x a c i nt oc u r et h eb a c t e r i a l i n f e c t i o nc a r p 2 K e yw o r d sc i p r o f l o x a c i n ；C y p r i n u sc a r p i oL ；b i o a v a i l a b i l i t y ；p h a r m a e o k i n e t i c s 人工感染鸭病毒性肠炎急性病例超微结构变化的研究 袁桂萍程安春+ ，汪铭书，周毅，刘菲，郭字飞韩晓英，廖永洪，徐超，周伟光， 文明，贾仁勇，陈孝跃 ( 动物疫病与人类

8、健康四川省重点实验室，四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中 心，四川，雅安，6 2 5 0 1 4 ) 用鸭病毒性肠炎病毒( D u c kE n t e r i t i sV i r u s ，D E V ) C H 强毒株感染成年鸭复制鸭病毒 性肠炎急性病例分别于接种后不同时间，取心、肝、肾、脾、胸腺、十二指肠、法氏 囊、脑和胰组织，制作超薄切片。电镜观察结果表明：病变最早发生于肝和肾而鸭死 亡后以免疫器官和消化器官损伤最严重。各种细胞的变化主要为肿胀坏死，表现为缅胞 肿胀，染色质或浓缩、碎裂或溶解，线粒体溶解成空泡样结构，其他细胞器破坏；脾、 胸腺、法氏囊以及小肠固有层中的淋巴细胞在感

9、染2 4 h 后在出现细胞坏死的同时还出现 较为明显的细胞凋亡变化；而鸭死亡后淋巴细胞主要表现为黑洞核样变化，整个细胞凝 聚深染，染色质固缩，细胞浆均质深染，细胞膜模糊或不完整。 关键词鸭病毒性肠炎病毒C H 强毒株，人工感染，细胞超微结构变化 鸭病毒性肠炎( D u c kV i r a lE n t e r i t i s ，D V E ) 俗称鸭瘟( D u c kP l a g u e ，D P ) ，是常见于 鸭、鹅、雁及其它雁形目禽类的一种急性败血性疱疹病毒感染，其造成的死亡、淘汰和 基金项目：四川杰出青年学科带头人基金后续资助项目( 编号：0 3 Z Q 0 2 6 0 2 8

10、) 怍者简介：袁桂萍( 1 9 7 7 一) ，女，汉族四川省人，博士研究生从事动物传染病研究工作。 为通讯作者。 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集( 2 0 0 4 年 产蛋下降给养鸭业带来巨大的经济损失f 2 I 。对该病发病机理和诊断防治已经有较多的研 究，但应用电镜技术对D E V 的超微病理学研究1 只有零星报道，多限于对弱毒的细胞培 养和自然发病病例以及其在单个组织器官发病机制的研究。本研究通过人工感染D E V 强 毒复制D V E 急性病例较为系统地研究该病的超微结构变化规律。进一步揭示本病的发 生机理并为诊断防治提供理论依据。 1 材料与方法 1

11、1 材料：健康2 月龄北京鸭5 0 只，未免疫接种，源于雅安无鸭病毒性肠炎感染史地区。 D E VC H 强毒株，对2 3 月龄鸭最小致死量为1 0 一m l ，由四川农业大学禽病研究中心提供。 12 实验方法：皮下接种D E VC H 株强毒，1 0 4 最小致死量，只、接种后2 、4 、6 、1 2 、2 4 h 剖杀取样，以后每隔2 4 h 取样，2 只次，直至有鸭发生死亡时停止剖杀而采集死亡鸭组 织器官，取其典型病变部位，观察记录发病及死亡情况。采取的样品包括：心肌、肝脏、 肾脏、脾脏、胸腺、法氏囊、胰腺、大脑、十二指肠。采取正常鸭组织作对照。参照文 献1 7 】制作超薄切片。将采集的

12、样品切成lxl x2 r a m 大小，用3 戊二醛( P H 7 2 ) 和1 锇酸先后固定、包埋、切片，醋酸铀和柠檬酸铅染色，H 6 0 0 型透射电镜观察并照相。 2 结果 2 1 免疫器官 胸腺、脾脏、法氏囊的变化较一致。接种后1 2 h ，淋巴细胞稍微肿胀变圆，染色质稍 有凝聚；网状内皮细胞核染色质稍边集。2 4 h 少量淋巴细胞出现凋亡变化( 凋亡详见另文) 。 坏死淋巴细胞肿胀，细胞间距增宽，染色质部分溶解或凝聚核膜扩张或部分溶解，线 粒体肿胀( 图1 ) ；网状内皮细胞稍肿胀染色质边集线粒体肿胀，嵴断裂。7 2 h 细胞 凋亡明显，坏死淋巴细胞严重肿胀，细胞膜、核膜溶解或破裂，

13、染色质聚集，线粒体肿 胀空泡化，细胞器严重坏死( 图2 ) 。网状内皮细胞中常见溶酶体增加，胞浆中有残体或 吞噬的凋亡细胞，线粒体空泡化。鸭死亡后淋巴细胞除坏死变化和凋亡变化外，有的细 胞胞核凝聚呈黑洞样结构或核碎裂，胞质浓缩成均质深染结构胞膜完整或缺损( 图3 ) 。 这种黑洞核样变化的细胞胞浆均质结构逐渐溶解，细胞膜消失只剩下凝缩的胞核。这 种变化在法氏囊和胸腺表现尤为明显；网状内皮细胞增生，肿胀，染色质边集，细胞器 全部坏死空泡化，核内见包涵体( 图4 ) 。黑洞核样细胞和凋亡的淋巴细胞未见病毒、核 衣壳或包涵体，坏死的淋巴细胞、网状内皮细胞、成纤维细胞胞浆、胞核中均见包涵体 和核衣壳，

14、胞浆空泡中见大量成熟病毒粒子。脾脏的窦皮细胞肿胀，染色质往往边聚， 细胞浆肿胀，线粒体肿胀嵴断裂，粗面内质网扩张脱颗粒，胞浆和胞核中都可见有包涵 体。死亡鸭脾脏见大量血细胞，血细胞常见变形或有伪足出现，多数细胞核皱缩，使细 胞核外围空晕扩大；有的红细胞细胞核染色质浓缩边集也有的染色质溶解，细胞核呈 空泡状；胞浆线粒体空泡化连同高尔基体扩张使细胞浆出现许多空洞( 图5 ) 。 2 2 其它实质器官 2 2 1 肝脏： 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集( 2 0 0 4 年) 接种后2 h 即见组织有轻微病变，窦皮细胞肿胀，突人管腔胞浆中溶酶体增加。4 h 肝细胞中出现

15、大量小的脂滴，部分肝细胞肿胀，线粒体有部分嵴断裂。6 h 肝细胞脂滴增 大增多，挤压细胞核至变形。2 4 h 糖原消失，肝细胞核染色质凝聚、边集，细胞核变形严 重。死亡鸭网状细胞增生肝细胞糖原消失，充满大的脂滴，细胞核受挤压变形破裂 细胞核染色质凝聚、边集。胞浆肿胀，细胞破裂胞浆和胞核常见病毒包涵体( 图6 ) ，胞 浆空泡中可见成熟的病毒粒子。 2 2 2 十二指肠 接种后6 h 上皮细胞肿胀，微绒毛有少量脱落。1 2 h 上皮细胞中出现较多的溶酶体。2 4 h 上皮细胞微绒毛断裂逐渐严重，变短变少；核变形浓缩，溶解核膜扩张，有少量上 皮细胞破裂；固有层见淋巴细胞浸润。4 8 h 固有层见淋

16、巴细胞浸润明显，固有层细胞有的 细胞核或凝固碎裂，或溶解有的整个细胞溶解消失仅剩下细胞痕迹。死亡鸭上皮细 胞肿胀破裂，微绒毛断裂严重，细胞器、细胞核甚至完整的细胞游离于肠腔( 图7 ) i 肠 腺上皮细胞肿胀，微绒毛水肿断裂；固有层充血出血淋巴细胞凋亡和坏死明显；肌细 胞核膜扩张染色质边集接种后4 h 起，肌细胞的肌原纤维凝聚呈条状带( 图8 ) ；上皮 细胞、肌细胞、纤维细胞中见病毒包涵体。肠上皮细胞、平滑肌细胞、坏死的淋巴细胞、 成纤维细胞等细胞浆空泡中见大量病毒粒子。 2 2 3 胰腺 接种后1 2 h 粗面内质网扩张，排列不规则细胞核染色质逐渐边集，酶原颗粒局部 减少；2 4 h 细胞核近核仁处出现均质团块状物质形状与核仁相似，但电子密度较低，染 色质凝聚，细胞中出现少量的脂滴，酶原颗粒减少；4 8 h 均质团块状物质数量增加，有的 细胞则肿胀，细胞核固缩破裂或肿胀变圆，染色质减少，细胞浆肿胀细胞器减少。少 量细胞坏死至破裂。死亡鸭部分外分泌细胞稍肿胀，粗