人参皂苷rg3吸收机制及药动学研究

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1、中 国 万 右利气 卜节 阵创 卜今 仑另 七 中文摘要 1分析方法的建立与验证 高灵敏度和高选择性的分析方法是体内 微量药物测定的技术保障。 建立灵 敏、 可靠、 稳 定的同时 检测 人参皂昔R g 3 ， 次皂 昔R h 2及昔元p p d 的 分 析方 法 是 本论文研究的 基础。选用了电喷雾离子源、液质联用检测方法 ( E S I - L C - M S ) , 优化并确定了液相色谱条件、 质谱检测方式及参数。 生物样品的预处理采用固相 萃取法。 流动相为: 流动相由乙 睛- 5 0 0 N M氯化钱水溶液( v / v ) ，采用梯度洗脱方 式， I S , R g 3 , R h

2、2及p p d 的荷质比m / z 分别是7 9 9 .5 5 , 8 1 9 . 5 0 , 6 5 7 .3 5 及 4 9 5 .4 0 , 均为 加氯峰【 M 十 C 1 I 。 通过方法学的 考证， 其线性、 回收率、日 间 及日 内 变异 均 符合生物样品的分析要求。 2整体动物的 药代动力学研究 B e a g l e 犬分别经静脉 注射及灌胃 给 予R g 3 及其主要活性代谢 物之一R h 2 , L C / MS方法检测血浆中药物浓度， R g 3在犬体内的药代动力学行为可以 有开 放 性二 室 模 型来 描 述， T I /2 a 及T ,rz g 分 别为0 .9 0

3、1 0 . 1 9 h 及6 .4 7 1 1 .7 6 h 。 表 观 分 布 容 积V 为0 .3 5 士 1 .7 6 L .k g i ， 中 央 室 分 布 容 积V 1 为0 .0 7 L .k g I ， 血 浆 清 除 率C L 为0 .0 4 ( L .h - .k g ) , R g 3 犬 灌胃 后 有 一 部 分 脱 去 葡 萄 糖 基 转 换 成 代 谢 物R h 2 和 p p d ， 经计算R g 3原药 在犬体内 的 绝 对生 物利 用度为1 .6 9 % ; 人参皂昔R h 2的 吸收 程 度和 消除 速率均快于原 药R g 3 ， 计 算得出 犬灌 服R g

4、 3 后原药 转化成R h 2 的 程度小于1 0 % , i g R g 3 时 血中R h 2 的A U C 只占 直接i g R h 2 的6 .3 5 % ( 1 2 3 .6 7 / 1 9 4 6 .5 2 ) ，但是R h 2是一个中间 代谢物， 它边吸收边转变成昔元， 是一个动态 的 变化 过程。 犬静脉注射R g 3 后， 于 给药1 5 分 钟后即 可在血浆中 检测出R h 2 , 但 各 时 间 点 测 得 浓 度 均 较 低 ( 小 于l O n g .m L “i ) 且 不 规则。 因 而R g 3的 首 过 效 应 主要是发生在肠道的。 R h 2在犬体内的绝对生

5、物利用度为2 1 . 9 8 %e 3在体小 肠吸收模型研究R g 3 的 吸收 及影响因 素 运用在体小肠回流实验来研究人参皂昔 R g 3的吸收情况和胆管引流对其吸 收的影响， 通过小肠回流中药物减少量来计算吸收动力学参数， E S I - H P L C - M S方 中 . 茜 科 大 * p 挤 d - i P A 法用于样品分析研究大鼠小肠对人参皂普R g 3 的在体吸收及其动力学过程， 考察 胆汁排泄对其吸收的影响 。 大鼠 在体小肠吸收实验明 胆汁引流对R g 3的吸收速 率无明显影响。 4 C a c 。 一细胞对人参皂昔R g 3摄取、 转运及 代谢研究 研究C a c o

6、 - 2细胞对人参皂昔R g 3的摄取、 代谢及其动力学变化。 采用液相 色谱质谱联用 ( H P L C - M S ) 检测方 法测定细胞中R g 3 及其代谢产物R h 2 药物浓 度， 考察时间、 p H值、 温度、 药物浓度及抑制剂对R g 3 摄取 速率 及代谢物产量的 影响。 R g 3在C a c o - 2细胞上的摄取是时间 及浓度依赖性的。 加入代谢抑制剂叠 氮化钠及2 , 4 一 二硝基酚时 摄取速率明显降低， R g 3 在肠道中的代谢为其生物利用 度低的原因之一。 5 ， 运用体外肠、 肝微粒体模型 研究 人参皂普R g 3的 代谢 运用体外肠、 肝微粒体模型对人参皂

7、昔R g 3的 代谢研究表明， R h 2 要的 代谢产物， C Y P 4 5 0 3 A的特异 性抑制剂酮康陛能抑制其代谢速率。 明， R g 3经胃酸降解及肝、肠首过是其生物利用度低的原因之一。 是其主 研究表 .运 用 流式 细 胞仪 研 究R g 3 , R h 2 及p p d对p 糖蛋白 底 物罗 丹明1 2 3 ( R h 1 2 3 ) 在K 5 6 2 I A 0 2细胞中积累的影响。 结果表明， R g 3 和R h 2 均能明 显增加R h 1 2 3的累积。 7 .小结 在建立了灵敏可靠的分析方法基础上， 通过体外、 在体、 离体、 细胞及分子 生 物学水 平多 方面

8、、多 层次的 实 验结果 表明: 人参皂昔R g 3吸收差 和低生 物利 用度的 原因可能归结于: 1 ) 药 物的 溶 解性差;2 ) 胃内 酸度对纯3 的轻 度降 解; 3 ) 肝、 肠微粒体的 I 相代谢作用;4 ) P - g p的 外 排作 用等等。 R g 3可在胃 肠 中 不断 被降 解或代谢成其脱糖基代谢物R h 2及昔元 p p d ， 从而不断 被机体吸收 而协同 发 挥抗肿瘤药效， 与 此同时 各 种成分 在胃 肠中 又 不断 受到P - g p转运体的 外排 作用， 使得生 物利用度进一 步下降。 R g 3药物分子在肠 腔中可以 重复摄入、 代谢， 外排这几个过程而形

9、成循环， 进一步降低了 药物的吸收及其生物利用度。 中 困 1 6 月 略大 理 卜节 阵侧 七 今 仑文主 界 P h a r ma c o k i n e t i c a n d A b s o r p t i o n Me c h a n i s m S t u d i e s o f G i n s e n o s i d e R g 3 Ab s t r a c t 1 . T o s u p p o r t p h a r m a c o k i n e t i c s t u d i e s o f g i n s e n o s i d e s , a n o v e l L

10、C / MS b ase d m e t h o d t o q u a n t i t a t i v e l y a n a l y z e g i n s e n o s i d e R g 3 ( R g 3 ) , it s p r o s a p o g e n i n g i n s e n o s i d e R h 2 ( R h 2 ) a n d a g l y c o n e 2 0 ( S ) - p r o t o p a n a x a d i o l ( p p d ) i n r a t p l as m a w a s d e v e l o p e d a

11、 n d v al i d a t e d . I t w as b a s e d o n g r a d i e n t s e p a r a t i o n o f g i n s e n o s i d e s p r e s e n t i n r a t p l a s m a u s i n g h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ( H P L C ) , f o l l o w e d b y d e t e c t i o n w it h e l e c t r o

12、s p r a y i o n i z a t i o n ( E S I ) m as s s p e c tr o m e t ry ( MS ) in n e g a t i v e i o n m o d e w i t h t h e m o b i l e p h as e a d d i t i v e , a m m o n i u m c h l o r i d e ( 5 0 0 V M ) . D i ff e r e n t i a t i o n o f g i n s e n o s i d e s w as a c h i e v e d t h r o u g

13、h s i m u l t a n e o u s d e t e c t i o n o f t h e M+ C l - a d d u c t o f g i n s e n o s i d e R g 3 a n d M + C l - a d d u c t s o f i t s d e g l y c o s y l a t e d m e t a b o l i t e s R h 2 a n d p p d , a n d o t h e r i o n s a ft e r s o l i d p h a s e e x t r a c t i o n ( S P E )

14、. T h e s p e c i fi c i o n s m o n i t o r e d w e r e m / z 8 1 9 .5 0 f o r R g 3 , m / z 6 5 7 .3 5 f o r R h 2 , m / z 4 9 5 .4 0 f o r p p d a n d m / z 7 9 9 .5 5 f o r t h e i n t e rn al s t a n d a r d ( d i g i t o x i n u m ) . T h e m e t h o d h a s b e e n d e m o n s tr a t e d t o

15、b e h i g h l y s e n s i t i v e a n d a c c u r a t e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f R g 3 i n r a t p l asm a . 2 T h e p l a s m a c o n c e n t r a t i o n - t i m e p r o f i l e o f R h 2 f o l l o w i n g a s i n g l e i n tr a v e n o u s d o s e o f R g 3 o r R h 2 t o B e a g l

16、 e d o g s w e r e d e c l i n e d i n a n a p p a r e n t b i e x p o n e n t i a l m a n n e r . s e e m a t o d d s w it h r e p o r t s o n t h e i r l o w b i o a v a i l a b i l i t y . Wh e n R g 3 w a s a d m i n i s t e r e d i n tr a - g ast r i c a l l y t o d o g s，R g 3 , R h 2 a n d p p d c o u l d b e m e a s u r e d，a n d t h e d e g l y c o s y l a t e d m e t a b o l i t e s h a v e a c t i v i t i e s c o m p a r a b l e t o o r h ig h e r t h a n t h a t o f R g