《常见性病实验室检测技术20111119讲解》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常见性病实验室检测技术20111119讲解（103页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、,常见性病实验室检测技术,性病实验室检测工作概述,病原体 淋球菌 梅毒螺旋体 生殖器疱疹病毒 生殖道沙眼衣原体 乳头瘤病毒 HIV病毒 杜克雷噬血杆菌 衣原体 念珠菌 滴虫 疥虫 阴虱 肝炎病毒 ,病 种 淋病 梅毒: 生殖器疱疹: 生殖道沙眼衣原体感染: 尖锐湿疣: HIV感染/艾滋病: 软下疳: 性病性淋巴肉芽肿: 念珠菌性阴道炎: 滴虫性阴道病: 疥疮: 阴虱病: 肝炎（乙、丙）： ,性传播疾病(STD)/性传播感染(STI),梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿 非淋菌性尿道炎 生殖器疱疹 尖锐湿疣 HIV/AIDS,梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿,50-60年代 经典性病,80
2、-90年代 监测性病,目 前 传染法报告病例 监测性病,梅毒 淋病 沙眼衣原体感染 生殖器疱疹 尖锐湿疣,我国目前重点防治性传播疾病（性病）,沙眼衣原体: 30%50% 生殖支原体: 10%40% 其它: 20%30%,梅毒 淋病 HIV/AIDS,1995-2010全国淋病流行状况,全国性病流行状况,1995-2010全国梅毒流行状况,卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年） 卫生部2011年2月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案 性病防治管理办法（修订征求意见稿）即将下发,6,近期卫生部相关政策/规划文件,预防与控制措施 广泛开展
3、宣传教育，普及梅毒防治知识 开展综合防治，阻断梅毒传播 提高监测检测质量，开展主动检测， 梅毒早期发现 提供规范化梅毒医疗服务 预防和控制先天梅毒 加强国际合作和应用性研究,7,中国预防与控制梅毒规划,性病防治管理办法(各级机构职责),第十一条 国家级性病预防控制机构： （三）组织制定和完善性病实验室检测等技术规范，开展性病实验室检测质量控制，定期开展性病诊断试剂临床应用质量评价。 第十二条 省级及以下性病预防控制机构 （四）组织开展本行政区域性病实验室检测质量控制 第十三条 性病诊疗业务的医疗机构： 开展实验室检验质量控制,8,性病检测实验室能力建设 与发展规划(2011-2015) （上报
4、稿）,工作目标及原则,加强各级性病实验室的能力建设 （1）国家性病参比实验室应具备。 （2）省级中心实验室应具备开展常见重要性病病原体的检测、药物敏感性检测以及质量评价的能力。 （3）县（区）级以上医疗卫生机构应具备开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌培养以及生殖道沙眼衣原体抗原或核酸检测的能力；县（区）级以下的基层医疗机构至少应具备开展梅毒快速血清学检测的能力。,10,建设任务和标准,1）95%的省级以上医疗卫生机构能够开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测或核酸检测。60%的省级以上医疗卫生机构能够开展淋球菌药物敏感性检测。 2）90%的地市级医疗卫生机构能够开展梅
5、毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测或核酸检测。 3）85%的县区级医疗卫生机构能够开展梅毒血清学初筛和确证试验、淋球菌镜检和培养、衣原体抗原检测。 4）85%的县区级以下医疗卫生机构至少能够开展梅毒快速血清学检测。,11,常见性病实验室检测技术介绍,梅毒 淋病 生殖道沙眼衣原体感染 生殖器疱疹及其他,一、梅 毒,梅毒概述（一）,性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母 婴 传 播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染
6、给胎儿,病期越长，传染性越小;,梅毒概述（二）,一期梅毒 硬下疳和(或)腹股沟淋巴结肿大 二期梅毒 可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等 三期（晚期）梅毒 可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上 皮肤黏膜损害等，包括神经梅毒、心血管梅毒 隐性（潜伏）梅毒 早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征 胎传（先天）梅毒 早期：在2岁前发生；晚期：在2岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现,梅毒概述（三）,疑似病例、确证病例诊断依据： 病史 症状 实验室检查 梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测 血清学检测,梅毒病原体,小
7、而纤细的螺旋状微生物 长520m，粗细0.2m 有6 12个规则的螺旋 基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕 行动缓慢而有规律 - 围绕其长轴旋转中前后移动 - 伸缩其圈间之距离而移动 - 全身弯曲如蛇行,病原学检查,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,病原学检查的临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特
8、点。 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，,21,梅毒血清学检测方法,梅毒血清学检测分类,(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） (2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。 问题1：为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免应答，在3周-4周产生抗类脂抗原的抗体（反应素）。抗体主要是IgM和IgG混合抗体。 未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期
9、存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。 问题2：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法,非梅毒螺旋体抗原血清学原理,所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样 方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似,非梅毒螺旋体抗原血清学原理,VDRL试验USRRPR/TRUST,VDRL试验 抗原组成：0.03%心磷脂 0.21%卵磷脂
10、0.90%胆固醇 抗原需新鲜配制 不能保存 待检血清需灭活 目前主要用于脑脊液检查 显微镜观测结果,USR试验 是VDRL试验的改良 抗原组成：同VDRL，另含 （1）乙二胺四醋酸(EDTA) 使抗原可长期保存，能维持一年； （2）含有氯化胆碱 对血清能起到化学灭活的作用 不必加热灭活 （3）制成试剂盒 使用方便,RPR试验 在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉淀的指示物 用白色的硬纸片替代玻片 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒 携带方便 操作简单 价格便宜,非梅毒螺旋体抗原血清学原理,TRUST 其原理和成分与RPR试验相同 用红色的甲苯胺红替代
11、了碳颗粒 其余的特点均与RPR相同,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理示意图,非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点,1、仪器：水平旋转仪。,2、定性试验 加样：吸取0.05mL血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内 加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原 反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果,3、定量试验 稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐水作系列稀释，并涂布整个圈内。 下同定性试验。,RPR,TRUST,VDRL,非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断,滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍
12、数。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,非梅毒患者的梅毒血清反应呈阳性，此现象称为梅毒血清
13、反应假阳性。 技术性假阳性反应 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 生物学假阳性反应 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,梅毒假阳性反应的处理 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,前带现象 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，
14、该现象称为前带现象。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,耐血清性（血清固定） 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。 问题3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？,梅毒螺旋体抗原血清学试验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫
15、吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,TPPA/TPHA,TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。 TPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照标准。,+,Sheep red cell,T.pallidum,+,Sensitised cell,Sensitised
16、cell,Specific Antibody,Hemagglutination,TPPA(TPHA)试验原理示意图,FTA-ABS试验,FTA-ABS试验原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 FTA-ABS试验是检测梅毒的经典“金标准”试验。但由于操作比较步骤比较繁琐，所以不适用于常规实验室检测。,FTA-ABS试验示意图及结果,TPELISA试验原理,TPELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定
