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1、博士学位论文基于寡核苷酸芯片的地中海贫血特异性DNA甲基化的研究指导教师高天梁志清教授第三军医大学西南医院妇产科，400038申请学位级别博士科学学位专业名称妇产科学论文提交日期2009年11月论文答辩日期2009年12月学位授予单位和日期第三军医大学2009年月答辩委员会主席塑匕途j兹评阅二Oo九年十一月第三军医大学研究生学位论文独创性声明秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与
2、我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：益。日期：第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：目录英文缩写一览表l英
3、文摘要3中文摘要6论文正文基于寡核苷酸芯片的地中海贫血特异性DNA甲基化的研究自订言8日U舌6第一部分DNA甲基化DMH芯片平台的构建10材料与方法11结果17讨论20，J、结2l第二部分基于DMH芯片的B地中海贫血DNA甲基化的研究22材料与方法23结果28讨论33，J、结37第三部分Sequenom甲基化质谱测序在地中海贫血中的应用及IGSF4基因在地贫中甲基化状态及其意义研究38材料与方法39结果43讨论48，J、结52全文结论53致谢54参考文献55文献综述DNA甲基化与产前诊断62参考文献69攻读博士期间发表论文72英文论著73缩写MSODMHPCRMSPOligoDMSoSDSEB
4、SSCRQ英文全称MethylationSpecific甲基化特异性OligonucleotideMicroarray寡核苷酸微阵列DifferentialMethylationHybridization甲基化差异性杂交PolymorasechainreactionmethylationspecificPCRoligodeoxythymidylicaciddimethylsulfoxidesodiumdodecylsulfateethidiumbromideesodiumsodiumcitratebufferRealtimequantitativemethylationMSPCRspecifi
5、cpolymerasechainreactionR1、PCRRealTimePCRMASGoTSSLCRHBBEKLFNFE2MolecularannotationsystemGeneontologytranscriptionstartsitelocuscontrolregions13-globingeneerythroidspecifictranscriptionfactornuclearfactor(erythroidderived2)GATA-IGATAbindingprotein1LARP2THRA聚合酶链式反应甲基化特异性的PCR寡聚脱氧胸苷酸二甲基亚砜十二烷基硫酸钠溴化乙锭柠檬酸钠
6、(缓冲液)实时定量甲基化特异性聚合酶链反应实时定量PCR分子注释系统基因本体注释转录起始位点基因座控制区13珠蛋白红系kruppel样因子红系特异性转录因子GATA结合蛋白1Laribonucleoproteindomainfamily，memberIB核糖核蛋白lBerythroblasticleukemiaviral，verba成红细胞增多型CBFBcore-bindingfactor，betasubunitHDAC3histonedeacetylase3ILl2Ainterleukinl2a白血病致病因子核心结合因子，p亚基组蛋白脱乙酰基酶3白细胞介素120【第二军医大学博十学位论文pl
7、asminogenactivator，tissue(血)纤维蛋白溶酶原激活荆DNArepairandrecombinationproteinDNA修复重组蛋白prostaglandinendoperoxidesynthase1前列腺素内过氧化物合酶1deoxyguanosinekinasemeioticrecombination11homologAthrombopoietinhematopoieticprogenitorcellsinterleukin113Colonystimulatingfactorproteintyrosinephosphatase，receptortype，C脱氧鸟苷激
8、酶减数分裂重组1l同系物A血小板生成素定向造血祖细胞白细胞介素lB集落刺激因子蛋白(质)酪氨酸磷酸酶受体Cimmunoglobulinsuperfamilymember4免疫球蛋白超基因家族4azurocidinlhematopoieticprogenitorcells2人天青杀素定向造血祖细胞ineffectiveerythropoiesisTodate，comparedtothethetraditionaldiagnosisofthalassemia，ourgrouphaspursuedanothergenewideprofilingapproachfordiagnosing13-thal
9、assemia，becauseofthelackofasharplyandvalidatedscreeningapproachforearlydetectionAdditionallythetraditionaldiagnosisofthalassemianeedslongcyclesofexperiment，andthereisverylittledatalinkinggenomewideinationofitsmRNAexpressionlevelInordertocontroltheoccurrenceandspreadofthisdisease，Weonlydependonthegen
10、eticscreeningandprenataldiagnosistOmakeselectiveeliminationforsuchanemiasfetalInclinicTherefore，allurgentneedtOfindanewandtissuespecificmoleculartargetswillprovideanewwayforprenataldiagnosisinthalassemiafromepigeneticinheritanceperspectiveAtpresent，Tounderstandthemolecularmechanismsontheoccurrencean
11、ddevelopmentofthehighdegreeofheterogeneityofgeneticdiseasesingenomewidelevelbecomesthenewtrendsofmodernbiomedicalresearchAdditionally，moreandmoreapplicationsofthebiochiptechnologyhavebeenusedbyitsadvantagesoflowconsumption，highthroughputinthevariousfieldsofbiomedicineBecauseconventionalgeneandproteo
12、meCantbesatisfiedwiththeneedofclinic，especiallyforthepatientsofrepeatedpregnancyormitisthalassemiaForthispartofcases，classicaltheoryofgeneticscannotexplainthepathogenesyWiththedevelopmentofepigenetics，theepigeneticsmodificationoffersthepossibilitytoexploreanddiscovermoreconvenient，preciseandeasytOsp
13、readforthalassemiaEpigeneticregulationisaprocessbywhichphenotypeismodifiedwithoutalterationsingenotype，thisheritableprocessislinkedtoepigeneticstatesinvolvingDNAmethylationandchangesinchromatinconation，whichmaintaintranscriptionalstatusthroughout第二二军医大学博十学位论文mitosisandDNAreplicationIncurrentstudyepigeneticsincludesXchromosomedosagecompensation，DNAmethylation，histonecode，genomicimprinting，andtheepigeneticgenomicsandhumangenomeprojectandotherproblemsAsitreported，DNAmethylationinchromatinplaycrucialroleinthedev
