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1、 唾液淀粉酶最适 ph 值的实验测定论文广西医科大学基础医学 2015 级摘要：了解唾液淀粉酶的最适 ph，把酶学知识应用于临床诊断与应用治疗。本实验 目的掌握精测唾液淀粉酶最适 pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722 分光光度计的使用。 通过测定碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应后的吸光度，测出唾液淀粉酶的最适 PH 值，约为 6.2。关键词：淀粉酶 ph 吸光度 前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括 PH 值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。PH
2、值对酶反应活力的影响： 1、 酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变 PH 值后可使活力恢复。2、 酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。3、 酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。4、 酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的 PH 值范围。实验原理：ph 的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的 PH 值称为最适 PH 值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受 ph 影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底
3、物越少， A 值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A 值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。1利用朗伯比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm 处地吸光度 A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适 PH 值。A 在 ph 值 6.08.0 内范围变化，并且随着 ph 的增大而先减少后增大，ph=6.2 左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适 ph 值约为 6.2。实验仪器与试剂：试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37恒温水箱、 v-1110D 可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10
4、ml）试剂药品：0.4g/L 缓冲淀粉溶液、碘液、0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液、蒸馏水（1）配置缓冲液 2：配置各个 PH 的缓冲液 10ml， 选择 ph 值从 6.0 到 8.0，间隔 0.2.不同 ph 值的测定 用量（10ml）试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0磷酸氢二钠 0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735 磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.
5、65 0.425 0.265 定容到 10ml（2）唾液的获取：蒸馏水漱口 12 次，,然后含一大口水约 1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。（3）淀粉用量的确定：管号 1 2 3 空白7.0PH 缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.92.5g/L 淀粉 0.4 0.5 0.6 -唾液（稀释 10 倍） 0.1 0.1 0.1 0.1混匀，37 水浴 7.5min，然后向每管加 2 滴碘液H2O 5.6 5.5 5.4 6.0混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其中用量 结果： 0.4ml 2.5g/L 淀粉为最适量（颜色最浅）（4)酶液稀释倍数的确定：稀释倍数 5 10 15 20
6、25 30酶液（ml ） 1 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2H2O(ml) 4 4.5 4.6 4.75 4.8 5.8另取试管各取配好的稀释液 0.1ml：管号 1 2 3 4 5 6 7稀释倍数 5 10 15 20 25 30 空白7.0PH 缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L 淀粉 由第 3 步操作确定唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37 水浴 7.5min，然后向每管加 2 滴碘液H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数结果：观察到酶稀释十倍 2 号
7、管颜色最浅，所以酶稀释十倍最适合（5)最适 pH 确定：PH 试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0PH 缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L 淀粉 由第 3 步操作确定某倍数唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1（由第 4 步操作确定）混匀，37 水浴 7.5min，然后向每管加 2 滴碘液H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 混匀，用蒸馏水调零，测定 A660nmA660nm 0.380 0
8、.269 0.352 0.373 0.369 0.346 0.471 0.494 0.608 1.365 0.515以 A660nm 为纵坐标，PH 为横坐标作图唾 液 淀 粉 最 适 PH测 定00.511.50 2 4 6 8 10PH值A660nm A663nm实验结果:A 在 ph 值 6.08.0 内范围变化，根据实验做出平滑曲线最低点对应 ph=6.2，即唾液淀粉酶最适 ph 值为 6.2。讨论： 1.本实验中，当唾液淀粉酶的活性最大时，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A 值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A 值增大。2. 最适 PH 不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液 PH 高于或低于最适 PH 时，酶活性降低，远离最适 PH 时还会导致酶变性。在测定酶活性时，应选用适宜的缓冲液以保持酶活性的相对恒定。3.实验以结果作图不成标准的 V 型，可能是因为操作不规范，不能准确添加试剂，保存时间不符合。参考文献：参考文献：1吴耀生 医学生物化学与分子生物学实验指南 人民卫生出版社 2查锡良、周春燕 . 生物化学 . 第 7 版北京：人民卫生出版社 2008.1：75
