《江苏省新沂市高中生物 第四章 生物化学与分子生物学技术实践 4.1 蛋白质的分离与纯化方法教案(选修1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《江苏省新沂市高中生物 第四章 生物化学与分子生物学技术实践 4.1 蛋白质的分离与纯化方法教案(选修1)（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、蛋白质的分离与纯化方法教学目标：1、知识与技能：掌握蛋白质的分离与纯化方法， 知道从生物材料中提取芳香油2、过程与方法：掌握蛋白质的分离与纯化三种方法的比较过程3、情感态度价值观：培养学生科学实验的观点。教学重点：蛋白质的分离与纯化 教学难点：蛋白质的分离与纯化， 从生物材料中提取芳香油教学方法：自主、合作、探究学习。教具使用：无共案部分个案部分教学过程教师主导活动学生主体活动课前： 布置学习目标和预习提纲，要求学生完成预习任务，下发及收缴批改导学案（附导学案）学生进行预习，完成导学案。课中：对上节课存在问题进行点拨。新授：根据学生自学情况，引导学生分析主要的问题。强调以下几点。【思维点拨】1
2、说明用透析法、离心沉降法和电泳等方法纯化蛋白质的原理和大致过程。 2影响电泳泳动速度的主要因素有哪些?这些因素是如何影响泳动速度的? 3“血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳”实验最关键的一步是什么?你能说出这一步的操作要求吗?4漂洗后的薄膜上可以看到几条色带?分别代表什么? 5植物芳香油提取的常用方法有哪些?这些方法的原理各是什么? 【疑难解析 】 1蛋白质的分离纯化： 根据蛋白质溶解度不同的分离方法蛋白 质的盐析： 中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质
3、溶液中，高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO：一和NH)有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失永”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。 根据蛋白质分子大小的差别的分离方法透析： 透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。 根据蛋白质带电性质进行分离电泳法： 各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同从而得以分开。值得重视的是等电聚焦电泳，这是利用一种两性电解质作为载体，电泳时两性电解质形成一个由正极到负极逐渐增加的pH梯度，当带一
4、定电荷的蛋白质在其中泳动时，到达各自等电点的pH位置就停止，此法可用于分析和制备各种蛋白质。 2实验原理： 醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在pH为86的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、1一球蛋白、2一球蛋白、球蛋白、 一球蛋白5条区带，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。布置学生课堂检测，并重点提示。学生对上节存在问题进行讨论。学生自学基础知识
5、。 学生根据导学案内容讨论并展示个人、小组成果。思考：蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法：抽提方法：纯化主要是根据：常用的方法：醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤：色带：学生完成课堂检测课后：布置课外作业及下一节预习提纲。（见导学案）学生完成课外作业及下一节预习。板书设计生物成分的分离与测定技术蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法：抽提方法：纯化主要是根据：常用的方法：醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤：色带：教学札记三、其他补充教学资料（各位教师根据各班教学特点选择补充资料，可另附纸）高二生物生物成分的分离与测定技术导学案 使用时间： 编制人： 一、学习目标： 知道蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法，蛋
6、白质抽提方法，掌握蛋白质的分离与纯化方法。二、知识构成：1蛋白质的分离常用的细胞破碎的方法有： 根据蛋白质的不同特性，分别可选择哪些抽提方法？ 、 、 蛋白质的纯化主要是根据 之间以及 之间在 、 、 、 等方面存在的差异进行的。常用的方法包括 、 、 等。 2用电泳分离纯化蛋白质时，泳动速度主要取决于 ，即 。此外， 、 等因素对泳动速度也有影响。 3血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的实验的基本步骤包括： 、 、 、 、 、 、 、 、 。 4浸泡醋酸纤维薄膜前，用笔做记号是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；点样是在 (填“光泽面”或“非光泽面”)；平悬薄膜时， (填“光泽面”或“非光泽面”)朝上
7、。 5经电泳后，可以在薄膜上看到 条色带，它们分别是 、 、 、 、 。6植物芳香油的提取方法有 和 等。三、学法和自检：本节内容主要通过看书、分析蛋白质的提取、分离、纯化的不同方法。动手试一试：1盐析法分离蛋白质的原理是 ( ) A破坏蛋白质的一级结构 B破坏蛋白质的二级结构 C破坏蛋白质水化膜而改变溶解度 D使蛋白质发生变性沉淀 2利用透析法将蛋白质和其他小分子物质分离的原理是 ( )A 利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性 B利用蛋白质分子的水溶性C利用蛋白质分子的胶体性 D利用蛋白质分子所带电荷3下列关于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的说 法不正确的是 ( ) A实验所用的巴比妥缓冲液的p
8、H为86 B点样是在薄膜的光泽面上进行的 C实验后可以得到五条色带 D整个实验最关键的步骤是点样4有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pH分别为 45、52、66、72，电泳时欲使其中三种泳向正极，则缓冲液的pH应该是 ( ) A20 B50 C60 D70课题 生物成分的分离与测定技术四、达标检测1(多选)在蛋白质粗提取时，破碎细胞的方法有 ( ) A研磨法 B超声波法 C酶解法 D机械破碎2分离水溶性蛋白质所选用的提取溶剂是( ) A酸性溶液 B碱性溶液 C中性缓冲液 D有机溶剂3(多选)纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之 间以及蛋白质与其他分子之间在哪些等方面存 在的差异进行的 ( ) A分
9、子大，B溶解度 C所带电荷的多少 D吸附性质4某蛋白质等电点为75，在pH6O的缓冲液中进 行自由界面电泳，其泳动方向为 ( ) A向负极移动 B向正极移动 C不运动 D同时向正极和负极移动5在pH 512时进行电泳，哪种蛋白质既不向正极 移动也不向负极移动 ( ) A血红蛋白：pI(等电点)一707 B鱼精蛋白：pI一1220 Ca1一球蛋白：pI一506 DB一球蛋白：pl=5126血清蛋白电泳时通常用pH 86的缓冲液，此时 各种蛋白质所带的电荷为 ( ) A清蛋白带正电荷，其他蛋白带负电荷 B清蛋白带负电荷，其他蛋白带正电荷 C各种蛋白均带正电荷 D各种蛋白均带负电荷7(多选)支持物电
10、泳常采用的支持物有 ( ) A滤纸 B醋酸纤维薄膜 C大分子凝胶 D纤维素五、学习小结和课外作业：1、学习小结：2、上本作业：列举蛋白质粗提取时次报的破碎、蛋白质的抽提、纯化方法。3、课本：64页1 2 3 4 5 4、补充练习：8请根据血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验回答下 列问题： (1)实验所用的主要试剂有： (2)实验所用的缓冲液的pH为 ，因为 。 (3)点样应点在薄膜的 面，方法是用 在血清中蘸一下，在离薄膜一端 cm处轻轻按下，随即提起。 (4)实施电泳时，所用电压为 ，膜宽电流强度 ，时间 。 (5)实验结果时，薄膜上呈 条色带，分别代表 。9选择正确答案的序号。、清蛋白一球蛋白、
11、一球蛋白、一球蛋白、球蛋白 A清蛋白 B1一球蛋白 C2-球蛋白 D一球蛋白 E一球蛋白 (1)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最快的是 ( ) (2)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中泳动最慢的是 ( ) (3)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最深的是 ( ) (4)在正常人血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱中区带最浅的是 ( ) (5)正常人血清中的各种蛋白质，在pH86的缓冲液中负电性最强的是 ( ) (6)正常人血清中的各种蛋白质，在pH86的缓冲液中负电性最弱的是 ( )10醋酸纤维薄膜电泳可把血清蛋白分成五条带，由负极数起它们的顺序是 ( ) A一球蛋白、1一球蛋白、2一球蛋白、
