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1、 毕业设计（论文） 题 目 红掌组培过程中污染分析 指导教师 系 部 生化工程系 专 业 生物技术及应用 姓 名 学 号 2012年06月25日 保存期限：三年 保存部门：专业教研室红掌组培过程中污染分析摘要：红掌（拉丁名：Spathiphyllum floribundum），亦叫安祖花，红鹤芋等， 天南星科火烛属。其花色艳丽，花茎挺拔，叶型翠绿美观，是当今世界著名 的切花和盆栽花卉之一，市场潜力大，具有极高的观赏价值和经济价值。红 掌的繁殖方法通常采用分株繁殖、扦插繁殖和组织培养繁殖。但分株繁殖、 扦插繁殖很难满足当前市场的需求，组织培养是红掌快速繁殖的有效途径。 由于组织培养中经常出现不同
2、程度的污染问题，造成很大的损失，因此控制 污染是植物组织培养苗工厂化生产中重要的技术环节。本文从灭菌方法、内 源性污染、继代培养中污染防治等方面，进行了红掌组培快繁过程中污染原 因的分析及对策的探讨。 关键词：红掌，组织培养，灭菌，污染，防治 Tissue cultureprocess ofpollution analysis ABSTRACT： Anthurium, also called Andrew Flower, lines such as flamingo, a Fire Araceae. Its bright colors, tall and straight stem, gree
3、n leaf-type appearance, are well-known in todays world of cut and potted flowers, one large market potential, with high ornamental value and economic value. Flower andraeanum breeding methods commonly used ramets propagation, cutting propagation and tissue cultur e propagation. However, ramets propa
4、gation, cutting propagation is difficult to meet current market demand, tissue culture andraeanum Flower Express are an effective way of breeding. Tissue culture because of the frequent occurrence of various degrees of pollution, resulting in great loss, so control of pollution are industrial plant
5、tissue culture vaccine production technology in the important aspect. This article from the sterilization method, endogenous pollution subculture in such areas as pollution prevention, to discuss how to minimize the emergence of tissue in the pollution problems. KEY WORDS: Anthurium， tissue culture，
6、 sterilization， pollution， prevention and treatment目录前言 1第 1 章 培养基的灭菌 21.1 一般培养基的灭菌 21.2 不耐热物质的灭菌 2 第 2 章 外植体材料的消毒与灭菌 4 2.1 外植体的消毒与灭菌 4 第 3 章 接种前的准备工作 5 3.1 器皿、工具的灭菌 5 3.1.1 器皿与金属器械的灭菌 5 3.1.2 布质制品的灭菌 5 3.2 培养室的灭菌 5 3.3 无菌操作和无菌操作技术 5 第 4 章 红掌诱导与继代培养过程中的污染 7 第 5 章 污染的原因和预防措施 8 5.1 通常污染 8 5.2 内源性污染 8
7、5.3 污染原因判断及污染苗抢救 8 5.4 预防方法和措施 9 5.4.1 基本方法 9 5.4.2 经常检查消毒锅的灭菌质量 9 5.4.3 检查培养容器是否存在问题 10 5.4.4 继代培养中污染的控制 10 5.4.5 减少培养基中的有机成分 10 结论 11 参考文献 12谢辞 13 前 言红掌（拉丁名：Spathiphyllum floribundum），天南星科火烛属，原产地 哥伦比亚。其花色艳丽，花茎挺拔，叶型翠绿美观，是当今世界著名的切花 和盆栽花卉之一，市场潜力大，具有极高的观赏价值和经济价值。其繁殖方 法通常采用分株繁殖、扦插繁殖和组织培养繁殖。但分株繁殖、扦插繁殖很
8、难满足当前市场的需求，组织培养是安祖花快速繁殖的有效途径。 植物组织培养中经常会出现不同程度的污染问题，污染是在组织培养 过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。它是影响植物 组织培养的一个重要因素，它通常会导致培养失败造成很大的损失。植物 组培苗的工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养技术日趋完善，但在 组织培养中通常会出现不同程度的污染，因此预防和控制污染是植物组织 培养苗工厂化生产中重要的技术环节。在植物组织培养过程中，存在两种 类型的污染：一类是通常所说的污染，即外植体消毒不彻底，无菌操作和 培养过程中，如：培养基、接种工具、接种室消毒不严格或操作不规范而 导致的污染；另一
9、类是内源菌污染，内源菌包括真菌和细菌，内源污染一 般是指内源细菌所致的污染。 本文从一般的污染的控制、内源性污染的控制、继代培养中污染防治、 减少培养基中的有机成分等方面， 讨论了怎样减少组培中出现的污染问题， 如：对于一般的污染来说，主要从操作环境、操作人员、仪器；对于内源 性污染主要是从外植体预处理到外植体灭菌方法；对于继代培养污染的控 制主要是从对无菌外植体进行检验和反复进行茎尖培养或分生组织培养； 至于对培养基有机成分的减少措施主要是减去培养基中的 VB 1 、VB 6 或除去 培养基中的蔗糖这几方面加以论述。第 1 章 培养基的灭菌1.1 一般培养基的灭菌培养基是在有菌的环境中配制的
10、，在该过程中会使培养基带有各种杂 菌，因此，每次培养基配制完毕和分装后应尽快灭菌，否则培养基中就会滋 生各种杂菌，改变培养基的营养成分和pH值，影响培养效果。常用灭菌方法 是用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，将培养基置于高压灭菌锅中，从达到要求温 度的时刻 算起，在0.105Mpa的压力 下（121 。 C）灭菌15-40min。灭菌的 时间 取决于温度，而不是直接取决于压力。由于容器的体积不同，瓶壁的厚度不 ，对经过高压灭菌后不会变质的物品， 同时，所需灭菌时间也不同 1 如无菌水、培养皿、器械等，可延长灭菌时间和增加压力。培养基灭菌时间 不能过长，否则容易引起培养基中营养成分的损失，并且琼脂也会随
11、灭菌时 间的延长，凝固能力下降，甚至不能凝固。因此，所需的灭菌时间应随着要 进行灭菌的物体体积而变化。当灭菌锅里的热溶液冷却时，必须十分小心，如果压力下降过急，超过 了温度下降的速率，就会使液体滚沸，从培养容器之中溢出。另外，只有当 高压锅的压力表指针回到零时，才能打开灭菌锅。1.2 不耐热物质的灭菌某些生长调节物质（GA 3 、Zt、IAA、IBA） 、尿素以及某些维生素等不耐 热的物质遇热易分解，不能进行高压蒸汽灭菌处理，通常只能采用单独液体过滤灭菌方法。热分解化合物溶液的灭菌是通过过滤膜进行过滤灭菌的，然 后将其加入经过高压灭菌过的并未凝固的培养基中。 如果是制备固态培养基，方法是先将没
12、有不耐热物质而包含其他化合物 的培养基倒入培养瓶中进行高压蒸汽灭菌，灭菌后置于超净工作台上冷却。 当其冷却至45 。 C左右（即琼脂凝固温度） ，琼脂将要凝固之前，加入经过滤 灭菌的各项不耐热成分的溶液，然后混匀放置，待冷凉凝固后备用，但不能 在琼脂培养基温度较高时加入，以防止不耐热物质的分解 2。第 2 章 外植体材料的消毒与灭菌2.1 外植体的消毒与灭菌用红掌茎尖作外植体时，要尽量选取带菌少的材料，如果室外栽培 的材料污染太严重，可先将植物样本挖出，改为室内盆栽，喷布杀虫剂和 杀菌剂，不便移栽的，可套塑料袋，待长出新枝条后，再行采样接种。 2、对污染严重的外植体，可以在培养基中加入杀菌剂。
13、也可在菌类长 入组织内部时，除去韧皮组织，只接种内部的分生组织可防止材料带菌。 3、外植体消毒常用药剂有：70%75%的酒精，0.3%0.6%的次氯酸钠 溶液和 0.1%的升汞溶液等。选用何种灭菌剂和灭菌时间根据不同情况及操 作者的经验来掌握，既要求将外植体表面的微生物彻底杀死，又要求尽可 能少伤害外植体组织和表层细胞。先用 75%的酒精棉花擦拭外植体材料再 使用消毒药剂常能取得较好的消毒效果 3。第 3 章 接种前的准备工作3.1 器皿、工具的灭菌3.1.1 器皿与金属器械的灭菌 1、玻璃器皿的灭菌 可采用湿热灭菌法，即将玻璃器皿包扎后置入蒸汽灭菌器中进行高温 高压灭菌，灭菌时间可长到 2530min。也可采用干热灭菌法，即将玻璃 器皿置入电热烘箱中进行灭菌；还可以把玻璃器皿放入水中煮沸灭菌4 。2、金属器械的灭菌 一般用火焰灭菌法，即把金属器械放在 95%的酒精中浸一下，然后放 在火焰上灼烧灭菌。这一步在无菌操作中有要反复进行。3.1.2 布
