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1、专题2 细胞工程 动物细胞融合与单克隆抗体 学习目标: 举例说出动物细胞融合与 单克隆抗体的原理和应用 回顾复习：细胞工程常用技术? 专题2细胞工程 植物组织培养技术 植物体细胞杂交技术 植物细胞工程 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体 2002年12月30日， 两场筹备了10年的“ 太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行， 植物细胞“新人”黄花烟草和革新一号 烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人 ”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新 人同时在 “产房”电融合仪内孕育新生 命。 “太空婚礼” 这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是实质是 哪两项细胞工程技术哪
2、两项细胞工程技术 植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术 (1) (1) (2) (3) (4) (5) 复习：植物体细胞杂交过程 A细胞B细胞 人工诱导 杂交细胞 一、动物细胞融合 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂 ，形成完整的杂交细胞 诱导的方法？ 融合后细胞的类型？ AB杂种细胞遗传物质 有什么特点？ 三种AA、AB、BB 含两种生物的遗传物质 原理？ 细胞膜的流动性 灭活丧失感染性 保留融合活性 一、动物细胞融合 为什么细胞融合过为什么细胞融合过 程中使用的病毒需程中使用的病毒需 要要灭活灭活？ 比较 项目 细胞融合 的原理 细胞融合的 方法 诱导手段用途 植物体 细胞杂
3、 交 细胞膜的 流动性 纤维素酶、 果胶酶去除 细胞壁后诱 导原生质体 融合 离心、电刺 激、振动、 聚乙二醇 克服远源 杂交不亲 和，获得 杂种植株 动物细 胞融合 细胞膜的 流动性 用胰蛋白酶 使细胞分散 后诱导细胞 融合 除应用植物 细胞杂交手 段外，还有 灭活病毒 获得杂种 细胞、 制备单克 隆抗体 讨论:比较动、植物细胞杂交技术 【例1】能使动物细胞融合的特有 的 诱导因子是 （ ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】动物细胞融合的用途中最 重 要的是（ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 B B 典例巩固 强调：强
4、调：效应效应B B淋巴淋巴 细胞是能够产生抗细胞是能够产生抗 体的体的B B淋巴细胞，淋巴细胞， 下文将其简称为下文将其简称为B B 淋巴细胞淋巴细胞(B(B细胞细胞) ) 能产生抗体的细胞 是: 二、单克隆抗体 抗体的性质：抗体的性质： 特异性 特异性 浆细胞 （效应B细胞） 抗体的主要分布：抗体的主要分布： 血清（主要）血清（主要） 读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞 可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只 分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的 单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.1单克隆
5、抗体的概念 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性 质单一、特异性强的抗体 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 产量低、纯度低 ，且抗体的特异 性差。 单克隆抗体！单克隆抗体！ 该法制备抗体的缺点： 提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？ 请尝试设计一个方案。 2.2单克隆抗体的制备 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术单克隆 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 19751975年英国科学家年英国科学
6、家米尔斯坦米尔斯坦和和科勒科勒的实验的实验 为什么给小鼠注射特定 的抗原蛋白？ 会有几种融合方式？ 杂交瘤细胞是如何筛 选出来的？有何特点？ 是否所有的杂交瘤细 胞都能产生同一种抗体？ 如何大规模进行培养 得到大量的单克隆抗体？ 1、单克隆抗体的制备 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择 性培养基：只 有杂交瘤细胞 才能存活 获得产生相应 抗体的B细胞 （二选）：选能 产生所需专一抗 体的杂交瘤细胞 体外培养体外培养 小鼠腹腔小鼠腹腔 内培养内培养 杂交瘤细胞特点杂交瘤细胞特点 ：既能大量增殖既能大量增殖 ，又能产生专一，又能产生专一 的性抗体。的性抗体。 得到多种杂 交瘤细胞 诱导
7、其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞， 杂交瘤细胞有何优点 注射抗原的目的是什么? 为何要进行克隆化培养和 专一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞 获得单抗的方法 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代 表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按 正确顺序连接起来。顺序是？ 及时巩固： 2、单克隆抗体的应用 最广泛应用 单克隆抗体最主要的优点： 特异性强，灵敏度高，并能大量制备。 准确、高效、简易、快速 诊断试剂 “生物导弹”单克隆抗体药物 单抗导向， 药物为弹头 治疗疾病和运载药物治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体， 运载抗癌药物，形
8、成“生物导弹”，准确杀伤癌 变细胞。 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 一个新细胞 一个优势单克隆抗体 灭活病毒 杂交瘤细胞 特异性强、灵敏度高的优势 【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 ，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆 抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 ( ) A.B淋巴细胞 BT淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞 A D 典例巩固 【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体， 下列实验步骤中错误的是（ ） A将抗原注入
9、小鼠体内，获得能产生抗体的B 淋 巴细胞 B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细 胞 C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B 淋 巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体 的 细胞群，培养后提取单克隆抗体 B 典例巩固 一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞 灭活病毒 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 、灵敏度高的优势 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一个新细胞杂交瘤细胞 一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 B BB B瘤 瘤瘤 瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞？ 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这 两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠 骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分 裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加 PEG促融，在筛选培养基上筛选获得杂种细 胞。 幻 灯 片 15
