《PTI荧光稳态测量系统操作说明书 20101013》由会员分享，可在线阅读，更多相关《PTI荧光稳态测量系统操作说明书 20101013（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 1 荧光 稳态测量系统（ PTI QuantaMasterTM 4CW） 操作 说明书 一 仪器介绍 1 荧光稳态测量系统（ PTI QuantaMasterTM 4CW） 功能 PTI 推出的 QuantaMaster TimeMaster 系列荧光稳态瞬态测量系统具有测量可靠、灵敏度高、使用方便、配制灵活等优点，做稳态时：系统信噪比一般为6000:1，最高可达 12000:1，数据采集速度可达 1000 点 /秒， 波长范围从紫外到近红外，样品所处的环境温度可调。在稳态光谱测量中，通过使用光子计数技术，提供最高的微弱信号检出
2、能力，可对 荧光物质进行定性检测和定量分析。除常规的荧光稳态测量外，还可进行各向异性（偏振）、双发射、化学和生物发光等方面的测量。做瞬态（荧光寿命）测量时，系统采用了先进的频闪分时测量技术和非线性时标据采集技术，具有测量速度快、精度高、灵敏度高、使用方便、配制灵活等优点，是目前测量速度最快、最先进的荧光寿命测量系统。该系统能够探测 7pM 荧光素的寿命，最短测量寿命可达 100ps。激发光源可采用激光、弧光脉冲及 LED 灯以满足不同的应用。通过扩展和升级，可实现电致发光、磷光、荧光比率和比率成像等的测量。 主要应用： 1、光物理 与光化学、光合作用机理； 2、分子反应动力学； 3、突变筛选；
3、 4、缩氨酸结合动力学； 5、 FRET 动力学 ； 6、发射光谱和荧光淬灭；7、荧光量子产率、荧光偏振及导向性； 8、蛋白质结构与折叠的研究； 9、 DNA测序研究 、 ds-DNA 中的染料探针； 10、膜的渗透性及结构研究、膜的流动性和脂相转移 ； 11、药物与生物体系相互作用的检测； 12、溶剂 -溶质相互作用；13、麻醉过程研究； 14、蛋白结构和折叠； 15、核酸动态特性与结构； 16、光合作用机理； 17、激发态特性； 18、层面研究； 19、膜的渗透性与离子转移； 20、膜的 动态特性和结构； 21、分子距离和旋转动态特性； 22、溶剂与溶质的相互作用； 23、微胞结构与反应动
4、力学； 24、污染物质的探测与辨别； 25、聚合物结构和动态特性； 26、药与生物系统的相互作用； 27、混合荧光物质的探测与辨别。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 2 2 主要性能指标 3 仪器主要部分结构图 和光路图 二使用之前注意事项 三 . 常温下 测试 样品 操作步骤 1 开机： 先打开 光源开关 ，然后打开 Motor Drive Box 和 ASOC-10 box 开关，最后打开 电脑 。 图 1-1 2 打开电脑桌面上的 软件 FelixGX，密码为 birmingham，点击 软件右侧的 按钮 （见图 1-2） ，待光源稳定 20min 后，
5、放入样品，才可进行测样 。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 3 图 1-2 3. 若要对样品进行 发射波长 扫描，单击左下角 Setup 按钮 （见图 1-2） ， 出现图 1-3 界面， 单击 Emission Scan 图标 （见 图 1-3） ， 出现图 1-4 界面， 然后单击Acquisition Settings（见图 1-4） ，即切换至 方法 设置界面 （见图 1-5）。 图 1-3 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 4 图 1-4 4. 设定激发波长 和发射波长 ： 设定的发射波长一般要 高于 激发波长 20n
6、m，而且不能为 激发波 长的 倍数 ，如设定激发波 Excitation 为 230nm，可以设定发射波Emission 范围为 250440nm（见图 1-5） 。 设置激发光和发射光的狭缝宽度：若扫描发射波长 ，则 发射光的狭缝宽度设置要小 ， 激发光的狭缝宽度设置要大 ， 如图 1-5， 设置 发射光的狭缝宽度为 0.25mm，设置 激发光的狭缝宽度为 0.5mm；若扫描激发波长，则相反。之后调节仪器的 螺旋调节器 （见图 1-6） ，把狭缝 宽度调到设定值。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 5 图 1-5 图 1-6 5 单击 Detail 按钮 ，设
7、定 Integration 值 （见图 1-7） 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 6 图 1-7 6. 保存所设定方法：单击 Acquisition，单击 Save As （见图 1-8） ，命名，保存 图 1-8 7. 已经保存的 方法，可以在软件界面显示，如方法文件 “Acquisition1”（见图 1-9） ；中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 7 若要取消显示， 单击 按钮 （见图 1-9） ，不打勾即可 图 1-9 8 单击 Start 按钮 （见图 1-2，左下角 ） ，即可以对样品进行分析，结果以纵坐标 小于 1M
8、（ 见图 1-10） 为宜，大于 1M 则不呈线性关系。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 8 图 1-10 9 保存数据。 方法 1： 右键单击 需要保存的文件 （见图 1-11） ，出现如下下拉框， 左键单击 ，保存到目的路径即可 。 图 1-11 方法 2： 单击 左侧第二个图标 ，即可出现目的图 形 的数据表 （见图1-12） ，可以直接复制、粘贴到 Excel 表。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 9 图 1-12 10 关机： 先关电脑，再关 Motor Drive Box 和 ASOC-10 box，最后关光源（
9、切记顺序不能颠倒 ）。 三 液氮制冷机操作说明 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 10 图 1-13 1 连接 长短 缆线， 然后将缆线连接到 2-电线连接器 （见图 1-13，图 1-14） 图 1-14 2. 将真空泵通过真空管连接至 1-低温恒温器真空阀 连接口 （见图 1-13） 3 设定 加热电压 到 15V（ 同时按 “ SET” 和 “ LOWER” 按钮 设定） ， 使真空度更容易达到。 4 打开真空泵， 抽取真空 至少 4 小时 ，整晚也可以。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 11 可以前一天晚上抽取 隔热层
10、真空并且进行加热除湿。 5 把 加热 电压 调节到 0V 6 除 去 步骤 1 中的 短 缆线 ，长 缆线 直接接在 2-电线连接器 （见图 1-13，图 1-14） （长短线连接一起：设定电压； 单独长线：设定温度 ） 7 冷却 2 小时 (持续抽真空 ) 8 关紧 1-低温恒温器真空阀 9 关掉真空泵并且把真空 管 连接至 4-样品 真空阀 连接口 （见图 1-15） 图 1-15 10 将制好的样 品 （见图 1-16） 放入 3-样品 室 （样品不要与光源呈 0 度， 45 度和 90 度） 图 1-16 11 打开真空泵， 抽真空（ 需要 2-5 分钟或者更多） 12 先将 5-排气
11、阀 旋开 3-4圈 ，将温度设到 略低于 77K（ eg.76.8K， 先按 3个 “ AUTO”键，然后 同时按 “ SET” 和 “ LOWER” 按钮 设定温度 ） （见图 1-17） 13 放有过滤纸的 漏斗 接在 6-氮气端口 ， 将 2L（或更多）液氮倒入液氮腔 ，当液氮从 7-氮气端口 溢出时可停止（见图 1-18） 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 12 图 1-17 图 1-18 14 使用气球在 7-氮气端口收集氮气 ，收集满后放好备用 ； 15 当温度降至 77K 时第二次加入液氮 （如需做长时间实验或者多样品时） ，当液氮加满后关紧 5-
12、排气阀 （ 见图 1-13） 后 ， 再 扭开 1/4 到 1/2 圈； 16 打开 4-样品 真空阀 ，把收集到的氮气 充满 样品腔，关闭样品阀门。 17 开始进行低温实验 ，此时注意先 打开 氙灯 光源 、 再开其他开关 、最后开电脑（便于识别系统） ，等 氙灯光源 稳定 15 分钟 后再做实验，如果不是为了得到很好的数据可 以不用等这么长时间。 注意打开光闸和调节狭缝（狭缝要两两保持一致）。 当做完实验后要 最后关闭光源的开关 。 做第二支样品的步骤 ： 18 将温度设到 298K（等于 25 度室温） （ 只是提高样品室温度，和液氮无关 ） 19 到达设定温度 后（ 可能需要 20 分
13、钟也许更长） ， 将 样品室内的样品取出，并放入待测 样品 。 20 抽取样品室的真空。 再重复 11-17 步骤。 注意： 一般高真空可以保持 3 到 4 天。在此期间做实验不用做 1-6 步骤，而是直中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 13 接抽真空，然后步骤 7 及以后的进行。 倒入液氮，如果外面结霜，说明里面的真空度不够，则需要抽真空 。 21 关闭步骤 先使用第 18 步骤 然后将样品取出后清洗样品架 (使用甲醇溶液 清洗 ) 打开真空阀门，排出 真空。 四软件中其它图标使用说明 1 可以改变 图形的显示方式 ，如点击一下，图形由实线变为间断 点 （图 1-19） 。 图 1-19 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 14 2 ，此图标结合键盘上的“ ”和“ ”键可以显示图 形 上点的坐标 （见图 1-20）。 图 1-20 3 Normalize 功能的使用：单击需要 Normalize 的图像，如选择左键单击对象D2 ；单击 ，选择需要 Normalize 的区 域 ；单击 Math 按钮 ，选择 Normalize，选择参考点 （见图 1-21） 。 中国科学院水生生物研究所分析测试中心 荧光稳态测量系统操作说明书 15 图 1-21
