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1、GE Healthcare凝胶选择指南凝 胶 选 择 指 南20112011SephadexSepharoseSepharose CLSepharose FFSuperoseSepharose HPSuperdexSepharose Big beadsStreamlineSepharose XLCaptoMabselect SuRe,XtraDextrin Sepharose HPStreptactin Sepharose HPNi Sepharose HPGlutathione Sepharose HPProtein G Sepharose HPProtein A Sepharose HPS
2、OURCEMabselectGlutathione Sepharose 4BSephacryl1960 1970 1980 19902000Mono beadsHiTrapTM20years内容技术资料HiScaleTMcolumns如何选择凝胶凝胶过滤预装柱离子交换预装柱亲和预装柱疏水预装柱反相预装柱工艺开发用层析柱SOURCE 高速低反压介质(填料)凝胶过滤填料离子交换填料亲和层析填料疏水层析填料whatman反相层析填料在位清洗和消毒可自行装填的实验室用层析柱直接回答实验室和工业规模的层析和过滤技术问题llllllllllllllllllll 1llllllllllllllllllll
3、2llllllllllllllllllll 3llllllllllllllllllll 5llllllllllllllllllll 6llllllllllllllllllll 8llllllllllllllllllll 11llllllllllllllllllll 12llllllllllllllllllll 14llllllllllllllllllll 16llllllllllllllllllll 17llllllllllllllllllll 20llllllllllllllllllll 23llllllllllllllllllll 26llllllllllllllllllll 27llll
4、llllllllllllllll 28llllllllllllllllllll 29llllllllllllllllllll 301注意：手册中标价为参考价格，本公司保留无需通知随时调整价格的权力，有关事宜请向您所在地销售人员垂询。为了满足近年生物技术进入产品化的收成期需要，GE Healthcare 相继推出了许多特别适合生产应用的BioProcess 凝胶，它们的特点是：高重复性：适用于实验室至大规模工业生产的工艺放大。高物理、化学稳定性：易于清洗、消毒及再生，所以介质寿命特长。高动力载量、流速快：易于装于生产柱内，缩短生产周期和次数。每种凝胶均有完整的文献、档案及 Regulatory
5、Support File。在下游纯化中，可应用不同层析技术在纯化生物分子的同时，去除各种污染物。去除内毒素内毒素又称热原。含脂肪A 、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。内毒素的脂肪A 部份有很强的疏水性。但在高盐下会凝集，无法上疏水层析。利用疏水层析试验盒(17-1349-01) 可选择结合目标蛋白的介质而去除内毒素。内毒素与阴离子交换介质Q 或 DE AESepharose Fast Flow有较强结合。可洗脱目标蛋白后用高盐缓冲液或NaOH去除。利用CNBr 或 NHS Sepharose FF 可偶联内毒素底物如LAL,PMB,自动成亲合层析介质结合内毒素。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层
6、析可有效地将之去除。去除蛋白中的核酸大量核酸增加样本黏度，令区带扩张，反压增加，降低分辨率和流速。药审和食检对核酸含量也有严格限制。胞内表达蛋白的核酸问题尤其严重。核酸带阴电荷，在初步纯化时利用阳离子交换介质如STREAMLINESP ，SP Sepharose Big Beads， SP 或 CMSepharose FF， SP SepharoseXL结合目标蛋白，可除去大量核酸。核酸在高盐下会和蛋白解离，疏水层析介质很适合用来结合目标蛋白，在纯化蛋白的同时去除核酸。利用核酸酶将核酸切成小片断，用凝胶过滤做精细纯化时便很容易去除了。去除病毒和微生物病毒和微生物可成为病原，应尽量减除。结合不同
7、层析技术，使用注射用水，用 NaOH定期进行仪器和凝胶的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。病毒大都有脂外壳。可用与目标蛋白电荷相反的S/D (solvent/detergent) 处理，使病毒失活，如Triton和 Tween。再用适当的离子交换介质如CM Sepharose FF 结合目标蛋白，去除S/D。其它污染物可以改变pH 和离子强度使其从目标分子中解离或失活，凝胶过滤介质Superdex 及多种吸附性介质，SOURCE 都是很好的精细纯化介质，可去除多种微量污染物。BioProcess Media图 1 HiScale 层析柱能使用 1/16”(HiScale 16 and 2
8、6) 和 1/8” Valco 手拧接头， 能更方便管路的更换。图 3 和端盖配套的扳手可以作为附件选定。在装柱时使用扳手能更方便进行装填，特别是对于那些高反压填料的装填。图 4 使用QuickLock 设计的卡口能更快更方便的控制Adapter 的移动。QuickLock由两个卡簧组成, 这样增加了使用的便利性以及稳定性。图 6 “anti-rotator plate”设计的引入使柱头在进行轴向压缩运动时不会旋转，这样能增加装柱时的安全性并且能延长Adapter 的寿命。图 5 HiScale 由两个Adapter 构成,这样能实现更宽范围的装柱高度 (0-200 mm, 5-400 mm)
9、。货号 28-9644-4128-9644-2428-9645-1428-9645-1328-9644-4528-9644-44产品 HiScale 16/20HiScale 16/40HiScale 26/20HiScale 26/40HiScale 50/20HiScale 50/40空柱尺寸内径(mm)161626265050柱高(mm)204020402040柱床高度(cm)0-208-400-2013-400-2014-40体积(ml)4080106212393785HiScale柱子的很多创新性设计简化和改善了柱子的功能性。HiScaleTMcolumnsAnti rotator
10、plate非螺旋式位移（径向位移）2网孔尺寸20m尼龙操作压力20bar新产品新产品HiScale是一种新型的耐压达到20Bar 的玻璃空柱系列产品，其主要应用于工艺开发和实验室级别的层析，和经典的xk系列空柱的构成了完整的产品线。HiScale柱操作简便并具有一致的可重复性。该系列柱更加适合于新一代高流速填料如Capto和 MabSelect系列，与 KTA平台配合，用于生物分子的工艺开发与毫克到克级别的实验室制备，配合AKTA avant 用于工艺开发，更是锦上添花。产品特点如下：耐受的 压力更高，最高至20bar ，与现代的BioProcess 介质的完美配合设计的非旋转活塞装置可以实现
11、轴向压缩的方式装柱，同时不会引起连接管路打结柱头QuickLock 机制，使柱头的操作和清洗更快方便快捷标配有两个柱头对装柱高度提供了较高的灵活性能适用于目前所有使用GE Healthcare 的 XK柱的方法和应用图 2 通过创新设计的端盖的旋动，能很轻松的实现Adapter 的轴向运动，从而实现柱床的轴向压缩，这样的设计将使柱子的装填更加便利。价格（人民币）询价询价询价询价询价询价如何选择凝胶生物分子下游纯化的对象一般包括蛋白、酶、重组蛋白、单抗、抗体及抗原、肽类、病毒、核酸等。纯化前首先需要测定生物分子的各物理和化学特性，然后通过实验选择出最有效的纯化流程。测定分子量、PI当目标蛋白的物
12、理特性如分子量、PI 等都不清楚时，可用PAGE 电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR 预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同pH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳pH。选择层析方法若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：一 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose 、 Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。二 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高
13、纯度样品。三 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱 样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。纯化大量粗品处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用Sepharose Big Beads 、 SepharoseXL、 SepharoseFast Flow 等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。纯化硫酸氨样品硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品
14、，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新的技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用 HiTrap HIC Test Kit 和 RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。纯化糖类分子固化外源凝集素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上 外源凝集素的Sepharose 6MB 亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。纯化膜蛋白膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，籍此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。新推出的膜蛋白纯化试剂盒可轻松筛选出适合于组蛋白标签膜蛋白溶解和纯化的去污剂。通过His Mag Sep
