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1、中药色谱指纹图谱 操作规范与评价探讨 祝晨蔯 博 士 教 授 广州中医药大学中药学院 zhuchenchen Date 1 主主 要要 内内 容容 色谱指纹图谱的缘起、属性、特点和作用 中药色谱指纹图谱方法学 中药色谱指纹图谱试验的规范化 中药色谱指纹图谱的定性评价方法 应用实践 Date 2 色谱指纹图谱的缘起 、属性、特点和作用 Date 3 中药质量控制现状中药质量控制现状 中国药典中国药典关于药材所收录的信息关于药材所收录的信息 【浸出物浸出物】 【炮制炮制】 【性味性味与归经与归经】 【名称名称】 【性状性状】 【鉴别鉴别】 【检查检查】 【含量测定含量测定】 【功能与主治功能与主治
2、】 【用法与用量用法与用量】 【贮藏贮藏】 【来源来源】 宏观特征鉴别宏观特征鉴别 微观特征鉴别微观特征鉴别 生药学 动物分类学 植物分类学 矿物学 微生物分类学 药物分析学 经验鉴别经验鉴别 定性鉴别定性鉴别含量测定含量测定 指标成分、对照药材指标成分、对照药材 Date 4 齐墩果酸、熊果酸齐墩果酸、熊果酸、大黄酸、槲皮素、小檗碱大黄酸、槲皮素、小檗碱 目前中药质量控制的局限目前中药质量控制的局限 缺乏化学对照品缺乏化学对照品 化学对照品缺乏专属性化学对照品缺乏专属性 物质群体间的量化特征无法体现物质群体间的量化特征无法体现 黄柏、黄连黄柏、黄连 小檗碱、巴马亭的比例小檗碱、巴马亭的比例
3、人参、西洋参或三七人参、西洋参或三七几种人参皂苷的比例几种人参皂苷的比例 中药整体的用药的特色无法体现中药整体的用药的特色无法体现 Date 5 中药色谱指纹图谱的提出中药色谱指纹图谱的提出 中药依赖其所含的多种化学成份发挥疗效 任何单一的活性成份或指标成份都难以有效地 评价中药的真伪优劣 利用现代分析技术分析不同中（成）药的整体 特征以提高鉴别的准确性 色谱指纹图谱分析色谱指纹图谱分析（ Chromatographic Fingerprint Analysis） 梁逸增梁逸增（中南大学中南大学） Date 6 中药色谱指纹图谱的特点及属性中药色谱指纹图谱的特点及属性 中药指纹图谱同传统鉴别方
4、法的区别在于：它不是中药指纹图谱同传统鉴别方法的区别在于：它不是 从一个从一个“ “点点” ”，而是从一个，而是从一个二维的二维的“ “面面” ”（一个在特定条件（一个在特定条件 下的完整色谱的整体特征信息）来鉴别真伪，同时在定下的完整色谱的整体特征信息）来鉴别真伪，同时在定 量操作的前提下，得到量操作的前提下，得到“ “量量” ”方面的信息还可以估量待测方面的信息还可以估量待测 样品之间样品之间总体量总体量的差别，从而从量的角度给以动态的质的差别，从而从量的角度给以动态的质 量评价。量评价。 色谱指纹图谱不强调个体的绝对唯一性，色谱指纹图谱不强调个体的绝对唯一性， 而强调统一药材群体的相似性
5、，及物种群体而强调统一药材群体的相似性，及物种群体 内的唯一性内的唯一性 Date 7 中药色谱指纹图谱的特点及属性中药色谱指纹图谱的特点及属性 整体性整体性 模糊性模糊性 对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同 比较色谱的比较色谱的“ “完整面貌完整面貌” ”，在不同环境的样品色谱中搜索和，在不同环境的样品色谱中搜索和 提取与该药材指纹图谱提取与该药材指纹图谱“ “面貌面貌” ”相关的特征，加以区别相关的特征，加以区别 因此，中药色谱指纹图谱强调的是准因此，中药色谱指纹图谱强调的是准 确的辨认，而不是精确的计算确的辨认，而不是精确
6、的计算 Date 8 中药色谱指纹图谱中药色谱指纹图谱 方法学方法学 Date 9 柱色谱柱色谱 Column ChromatographyColumn Chromatography 平面色谱平面色谱 Planar ChromatographyPlanar Chromatography 液相色谱液相色谱 Liquid Chromatography (LC) Liquid Chromatography (LC) 气相色谱气相色谱 Gas Chromatography (GC)Gas Chromatography (GC) 薄层色谱薄层色谱 Thin Layer Chromatography Th
7、in Layer Chromatography (TLC)(TLC) 毛细管电泳毛细管电泳 Capillary ElectrophoresisCapillary Electrophoresis（CECE） Date 10 反相高效液相色谱反相高效液相色谱 (RP-HPLC)(RP-HPLC) Reversed Phase High Performance Liquid ChromatographyReversed Phase High Performance Liquid Chromatography 适用范围广适用范围广 分离性能好分离性能好 分析速度快分析速度快 流动相选择范围宽流动相选择
8、范围宽 灵敏度高灵敏度高 色谱柱可多次重复使用色谱柱可多次重复使用 流出组分可以收集流出组分可以收集 采用多种检测器，可同时获采用多种检测器，可同时获 取保留值信息和化合物的光谱取保留值信息和化合物的光谱 、值谱信息、值谱信息 对较为复杂的色谱实对较为复杂的色谱实 验条件要求比较苛刻，由验条件要求比较苛刻，由 此带来不同实验室之间重此带来不同实验室之间重 现性的难度增大现性的难度增大 Date 11 薄层色谱薄层色谱 Thin Layer Chromatography (TLC)Thin Layer Chromatography (TLC) 可在同板同时分析多达可在同板同时分析多达1818个样
9、品个样品 ，时效高，时效高 所用的是正相展开剂，其组成变化所用的是正相展开剂，其组成变化 灵活，可适应多种成分的分离灵活，可适应多种成分的分离 离线操作，即可直观比较图谱，又离线操作，即可直观比较图谱，又 可扫描得到轮廓图和处理数据可扫描得到轮廓图和处理数据 占机时间短占机时间短 具有色彩参数，可获得色彩丰富的具有色彩参数，可获得色彩丰富的 色谱图像，直观性强；同时辅以功能色谱图像，直观性强；同时辅以功能 团显色剂还可提示成分的类别，提高团显色剂还可提示成分的类别，提高 鉴别的专属性。鉴别的专属性。 展距局限在展距局限在 10cm20cm10cm20cm ， 柱效柱效 相相 对较低，对复杂组分
10、不对较低，对复杂组分不 提高分离度则难以提取提高分离度则难以提取 指纹特征的药材受到限指纹特征的药材受到限 制。制。 开放系统，对环境温开放系统，对环境温 度、相对湿度要求较高度、相对湿度要求较高 Date 12 气相色谱气相色谱 Gas Chromatography (GC)Gas Chromatography (GC) 分离效能高分离效能高 分析速度快分析速度快 适用于植物适用于植物 的挥发油成分的挥发油成分 及其它易挥发及其它易挥发 性成分或可转性成分或可转 化为可挥发的化为可挥发的 成分测定成分测定 可提供保留可提供保留 值信息，与质值信息，与质 谱联用，还可谱联用，还可 提供更丰富的
11、提供更丰富的 化学结构信息化学结构信息 分辨率高，分辨率高， 得到的色谱组得到的色谱组 份非常复杂，份非常复杂， 尤其是含挥发尤其是含挥发 油药材，单萜油药材，单萜 类成分组成很类成分组成很 不稳定，样品不稳定，样品 间差异可能很间差异可能很 大，处理数据大，处理数据 和判别相似度和判别相似度 时一定程度的时一定程度的 取舍取舍 毛细管电泳毛细管电泳 Capillary ElectrophoresisCapillary Electrophoresis 分离效能高分离效能高 分析速度快分析速度快 高分辨率高分辨率 可与紫外、荧光、电化学、质可与紫外、荧光、电化学、质 谱、拉曼光谱等联用，可提供更
12、谱、拉曼光谱等联用，可提供更 丰富的化学结构信息丰富的化学结构信息 Date 13 虽然我国人民的健康水平显著提高，但依然面临着心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病和慢性呼吸系统疾病等慢性病带来的挑战。那些可防可控的慢性病危险因素，如吸烟、过量饮酒、身体活动不足和膳食不合理等不健康生活方式仍未得到有效控制。 中药色谱指纹图谱中药色谱指纹图谱 试验的规范化试验的规范化 Date 14 中药指纹图谱的建立中药指纹图谱的建立 指纹图的获取指纹图的获取方法验证方法验证指纹图的校验和复核指纹图的校验和复核 中药材指纹图谱中药材指纹图谱 饮片指纹图谱饮片指纹图谱 中药提取物指纹图谱中药提取物指纹图谱 中药生产中
13、间产品指纹图谱中药生产中间产品指纹图谱 中药各类制剂和相关产品指纹图谱中药各类制剂和相关产品指纹图谱 中药指纹图谱中药指纹图谱 Date 15 指纹图谱的获取指纹图谱的获取 指纹图谱建立和辨识指纹图谱建立和辨识 指纹图谱试验研究指纹图谱试验研究对照品（参比物）对照品（参比物） 供试品收集供试品收集供试品制备供试品制备 Date 16 供试品的收集供试品的收集 真实性、代表性；收集量不少于真实性、代表性；收集量不少于 10 10 批批 原始纪录原始纪录 药材名称药材名称 供试品来源供试品来源 药材名称收集时间及收集人药材名称收集时间及收集人 货源情况调查货源情况调查 基原鉴定及鉴定人基原鉴定及鉴
14、定人 质量评估质量评估 供试品的留样、贮藏和标签供试品的留样、贮藏和标签 原料药材原料药材 Date 17 半成品半成品 原始纪录原始纪录 半成品名称半成品名称 混批前批号混批前批号 日期日期 提取方法（关键技术）提取方法（关键技术） 混批后批号混批后批号 中药指纹图谱中药指纹图谱 供试品的留样、贮藏和标签供试品的留样、贮藏和标签 Date 18 成成 品品 原始纪录原始纪录 供试品批号供试品批号 生产单位生产单位 供试品数量供试品数量 供试品的留样、贮藏和标签供试品的留样、贮藏和标签 Date 19 供试品制备供试品制备 取样取样称样称样制备制备 定容定容放置 放置标签标签 避光、低温、密闭
15、容器避光、低温、密闭容器 条件下短期放置条件下短期放置 标标 示示 浓浓 度度 溶剂萃取、固相萃取溶剂萃取、固相萃取 、其他方法、其他方法 供供 试试 品品 与与 选选 样样 1:1: 1010 具具 有有 代代 表表 性性 与药材标号一致与药材标号一致 Date 20 对照品（参照物）对照品（参照物） 对照品（参照物）的作用对照品（参照物）的作用 考察指纹图谱的稳定程度和重现性考察指纹图谱的稳定程度和重现性 有助于指纹图谱的辨认有助于指纹图谱的辨认 对照品（参照物）的选择对照品（参照物）的选择 供试品种的活性成分或指标成分供试品种的活性成分或指标成分 指纹图谱中的稳定的指纹峰指纹图谱中的稳定
16、的指纹峰 内标物内标物 对照品（参照物）溶液制备对照品（参照物）溶液制备 Date 21 色谱方法选择的原则色谱方法选择的原则 专属性专属性 建立的指纹图谱必须能够表达该品种的特征建立的指纹图谱必须能够表达该品种的特征 重现性重现性 同一品种同一样品指纹图谱中构成指纹特征的各同一品种同一样品指纹图谱中构成指纹特征的各 特征峰（或斑点）作为整体（峰位、峰数、峰的丰特征峰（或斑点）作为整体（峰位、峰数、峰的丰 度、各峰的大致比例）在不同实验室和不同操作者度、各峰的大致比例）在不同实验室和不同操作者 之间得到的色谱整体特征应有较高的相似度之间得到的色谱整体特征应有较高的相似度 普遍适用性普遍适用性 色谱方法和实验条件应易于推广和便于操作色谱方法和实验条件应易于推广和便
