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1、中医睫状体平坦部滤过术治疗慢性兔高眼压模型的实验研究 英文缩略语 英文全称与缩写中文名称 A c y l - C o A - b m d m gp r o t d n ，A C B P酰基辅酶A 结合蛋白 A T Ps y n t h a s e线粒体A T P 合酶 C a r b o m e r卡波姆 L i g h tm i c r o s c o p e光学显微镜 E p i t h e l i a ll a y e r ，R P E视网膜色素上皮层 G u a n i n en u c l e o t i d eb i n d i n gp r o t e i n ，Gp r o t
2、 e i n鸟苷酸结合蛋白；G 蛋白 F i l t e r a t i o nS u r g e r y滤过性手术 H e m a t o x y l i n - e o s i ns t a i n i n g苏木素一伊红染色 5 - f l u r o u r a c i l 5 F u 5 氟脲嘧啶 I n t r a o c u l a rp r e s s u r e ，I O P 眼压 M a s ss p e c t r u m质谱分析 M i t o m y c i nC ，M M C丝裂霉素C M a c r o p h a g em i g r a t i o ni n
3、h i b i t o r yf a c t o r ，M I F巨噬细胞移动抑制因子 P e n t o b a r b i t a ls o d i u m 戊巴比妥钠 P e p t i d eM a s sF i n g e r p r i n t i n g ，P M F肽指纹图谱 中国中医科学院2 0 0 7 级博士研究生学位论文 P r o t e o m i c s蛋白质组学 R e t i n a lh e i n ef i b e rl a y e r ，R N F L 视网膜神经纤维层 R e f r a c t o r yg l a u c o m a难治性青光眼 T
4、w od i m e n s i o n a lg e le l e c t r o p h o r e s i s ，2 - D E双向凝胶电泳 U l t r a s o u n db i o m i c r o s c o p y ，U B M超生生物显微镜 1 0 中医睫状体平坦部滤过术治疗慢性兔高眼压模型的实验研究 1 厶1 ， 月吾 青光眼是全球第2 位的不可逆致盲性眼病。根据W H O 研究资料显示，2 0 0 0 年全 球约有6 6 8 0 万原发性开角型和原发性闭角型青光眼患者以及约6 0 0 万继发性青光眼 患者，其中约有6 7 0 万患者因青光眼致盲。根据流行病学研究资料
5、推算，我国共有约 9 4 0 万患者患有青光眼性视神经损害，其中5 2 0 万患者因青光眼而单眼致盲，1 7 0 万 患者双眼致盲。我国非选择人群的原发性青光眼( 不包含先天性青光眼和各种类型继发 性青光眼患者) 患病率为O 5 2 ，致盲率为9 4 。青光眼患者后期往往致盲，成为家 庭和社会的沉重负担。 青光眼的发病率高，目前的药物和手术治疗远期效果欠佳。而临床治疗中又以难 治性青光眼最为棘手，因其疗效差、预后不佳，成为现代眼科临床治疗的难题之一。 目前常用的难治性青光眼的手术方法成功率仅为1 1 5 0 ，且费用昂贵。随着显微镜的 广泛使用，抗青光眼滤过性手术的成功率己大大提高，但一般情况
6、下手术失败率仍有 1 0 3 0 。而在难治性青光眼手术失败率更高达4 9 8 9 。因此对难治性青光眼应探 索新的思路和手术方法。 睫状体平坦部滤过术是唐由之研究员在1 9 5 8 年起始的白内障针拨术有关临床研 究和病理基础上，提出了中医抗青光眼手术的思路和方法。唐由之研究员根据目经 大成1 7 7 4 年所载金针拨障术“针锋就金位，去风轮于锐眦相半正中插入，毫发无偏” 即睫状体平坦部为切口，做白内障手术数千例。在遇到白内障针拨术继发青光眼时采 用其自行设计的巩膜环钻在睫状体平坦部做巩膜、睫状体环形切除，有效的解决这类 青光眼。其后的病理研究证实，睫状体平坦部切口不再愈合，为选择此处做青光
7、眼滤 过术提供了依据。1 9 7 4 年国外学者才开始选择睫状体平坦部作为后节手术常规切口。 唐由之研究员回顾当时解决继发性青光眼的思路，多次改进手术方法，同时汲取了现 代小梁滤过术思想，设计了在睫状体平坦部做滤过性手术的方案，定名为“睫状体平 坦部滤过术”。 青光眼属于中医“绿风内障”、“青风内障”范畴，“绿风内障“ 发病急剧，“青风 内障”发病轻缓，临床上难治性青光眼因其眼压高、症状重、治疗棘手常将其归为“绿 风内障”范畴。外台秘要称为“绿翳青盲”，指出“此疾之源，皆从内肝管缺，眼 孔不通所致也“ 。古代中医已认识到眼内有“肝管”、“眼孔”，“不通则痛“ ，青 光眼的头目胀痛实质是房水不能
8、通过房角排出，眼压升高所致。目前西医抗青光眼手 中国中医科学院2 0 0 7 级博士研究生学位论文 术的滤过性手术方式主要为小梁切除术，手术切除部位在前房小梁网。睫状体平坦部 滤过术采用中医传统的手术切1 1 3 将青光眼手术切1 3 部位从传统的角膜缘后部向后移 位到睫状体平坦部，另建“眼孔”，疏导房水，以达到“肝管无滞“ ，恢复正常眼压的 目的。“睫状体平坦部滤过术”是一种具有中医特色的创新的抗青光眼手术方法。 我院在临床应用该手术已治疗7 0 多只难治性青光眼，疗效肯定。临床观察显示， 该手术治疗难治性青光眼疗效较好，对眼内组织比较安全，无明显并发症。该手术可 用于治疗所有采用其他方法治
9、疗失败的青光眼患者。为了进一步明确该手术方法的疗 效、可能出现的并发症、术后滤过泡增殖以及该手术对视神经的保护作用，我们应用 复方卡波姆前房注射诱导慢性高眼压模型( 该模型的眼部表现与临床难治性青光眼中 新生血管性青光眼相近) ，对模型眼施行睫状体平坦部滤过术。观察术中、术后并发 症、术后眼部表现、眼压情况、术后滤过泡增殖情况及视网膜组织病理学变化，进一 步为睫状体平坦部滤过术这种抗青光眼手术的新方法奠定理论基础。同时行对各组实 验兔视网膜进行蛋白质组学研究，初步为青光眼的发病机制提供依据。 中医睫状体平坦部滤过术治疗慢性兔高眼压模型的实验研究 第一部分睫状体平坦部滤过术治疗慢性兔高眼压模型的
10、 实验研究 第一章复方卡波姆溶液诱导慢性兔高眼压模型的实验研究 为研究睫状体平坦部滤过术对高眼压模型的降眼压及视神经保护作用的研究，需 制作持久、稳定的高眼压动物模型。我们考虑要对高眼压眼行睫状体平坦部手术， 除猴眼外，兔眼在大小及结构与人眼最为相似。青紫蓝兔为色素兔，睫状体含棕黑色 色素，手术中易于识别，故选择对青紫蓝兔眼造模。 。材料与方法 1 动物与器材 1 1 实验动物 选取健康成年青紫蓝兔6 0 只( 购自北京市天坛生物制品有限公司动物实验室) ， 生产许可证编号：S C X K ( 京) 2 0 0 4 0 0 0 2 ，体重2 - 2 5 k g ，雌雄不限，于中国中医科学院 眼
11、科医院动物实验室饲养，室温保持在2 5 “ ( 2 ，空气流通，1 2 h 光照维持昼夜循环，动 物自由摄食饮水，实验室饲料喂养l 周后开始实验。实验动物使用符合美国眼科和视 觉研究协会( A R V O ) 关于在眼科和视觉研究中动物使用宣言的规定。 1 2 实验药品及器材 1 2 1 实验药品 卡波姆( C a r b o m e r9 4 0 ) 由北京国人逸康科技有限公司提供。戊巴比妥钠 ( P e n t o b a r b i t a lS a d i u m ) 由武汉博士德生物工程有限公司提供。 1 2 2 器材 眼压计为日本K o w a 公司H A 一1 型P e r k
12、i n s 手持压平眼压计。 1 2 3 溶液配制 将卡波姆9 4 0 配制成含0 3 卡波姆和0 0 2 5 地塞米松的复方卡波姆溶液，p H 值 为4 1 1 。 2 实验方法 2 1 实验分组：将6 0 K 青紫蓝兔连续测量3 天眼压后，右眼行复方卡波姆溶液造模， 左眼不做处理。右眼为模型组，左眼为正常对照组。造模后眼压2 3 咖H g 并维持一周 为造模成功( 造模成功后1 周随机选取3 0 只兔右眼行睫状体平坦部滤过术，为手术组； 中国中医科学院2 0 0 7 级博士研究生学位论文 剩余3 0 只兔右眼为高眼压组。详见第二章) 。 2 2 造模方法 倍诺喜( 奥布卡因) 滴眼液术眼表
13、面麻醉，以l m l 注射器在兔右眼颞上或鼻上角 膜缘2 点或1 0 点前房穿刺，抽出房水0 1 0 2m l 。留置针头不出针，更换已抽取复方卡 波姆溶液的针管，注入0 1 0 2 m 至前房。出针后以棉棒按压针孔至不渗液。 2 3 观察内容 对造模眼分别于术后第3 天、1 周、2 周、1 个月、3 个月、6 - - 月进行眼压测量，并 观察术后模型眼部情况，行眼底照相记录眼底变化。U B M 观察模型眼前房、房角及眼 轴变化。 结果 1 正常兔眼眼部表现 正常兔眼眼部检查：球结膜无充血，角膜透明，前房深，虹膜呈灰黑色，瞳孔圆， 直径约4 m m ，对光反射灵敏。晶状体、玻璃体透明。眼底：视
14、盘横椭圆形，上下边界 。 清楚，鼻侧、颞侧不清。视网膜色红，由视盘向鼻侧、颞侧发出2 支动脉与静脉，自 视盘沿血管走形为放射状的亮白色神经纤维，后级部网膜呈亮毯状。视网膜下可见灰 黑色脉络膜色素。 正常兔眼眼压范围：最小值8 m m H g ，最大值1 8m m H g ，平均1 4 5 3 8m m H g 。造 模后眼压1 2 3m m H g 为高眼压。 2 高眼压眼眼部情况 眼前节：复方卡波姆溶液注入前房后可见前房内产生白色絮状混浊。术毕局部角 膜穿刺处轻微混浊、发白，球结膜局部轻微充血。术后l 天，球结膜充血明显，上方 角膜轻微混浊，部分兔眼瞳孔区可见灰白色膜状物。术后3 天，球结膜
15、充血明显，角 膜上方混浊，部分瞳孔区白色膜状物向中心萎缩。术后l 周，睑缘充血，球结膜混合 充血，角膜雾状水肿，眼压升高明显者角膜周边血管翳，部分角膜扩张，角膜大泡， 3 只眼角巩膜缘葡萄肿，前房混浊，虹膜隐见新生血管，瞳孔散大，对光反射消失。 术后1 5 天，球结膜混浊充血，角膜周边血管翳，角膜水肿增厚、灰白色，3 只角膜扩 张呈圆锥状，角膜大泡，虹膜新生血管，瞳孔区灰白色膜消失。角膜增大，前房加深， 眼轴增长，术后1 个月，球结膜充血减轻，角膜血管翳角膜水肿减轻，大泡消失，角 膜较前光滑，部分形成角膜云翳，虹膜新生血管，瞳孔散大，晶状体清，- - I 艮晶状体 中医睫状体平坦部滤过术治疗慢
16、性兔高眼压模型的实验研究 脱位。术后2 个月，球结膜充血充血减轻，角膜水肿消失，虹膜新生血管粗大，部分 虹膜阶段性萎缩，虹膜膨隆，瞳孔散大，直径约6 m m ，眼球不再扩张。术后3 个月， 球结膜充血消失，角膜血管翳深入角膜基质层者不再变化，角膜穿刺1 3 周围呈均匀一 致灰白色，虹膜广泛脱色素，新生血管减少。眼球扩张未回退。术后6 个月，大部分 兔眼眼压降低后再次造模者，表现同前。2 只眼发生晶状体脱位。1 只眼眼压持续高眼 压，未再造模，球结膜无充血，角膜周边环形云翳，血管翳深入基质层，虹膜表面新 生血管，瞳孔散大，晶状体脱位。 眼底：高眼压造模后l 周至2 周内，由于角膜水肿及前房炎症反应，眼底看不清楚。 1 5 - 月时，眼底欠清楚，视网膜颜色变淡，呈橘黄色，视盘凹陷增大、加深，盘沿变 窄，血管变细，从视盘边缘呈屈膝状爬出，视盘两侧神经纤维层模糊。2 个月时，视 盘颜色进一步变淡，凹陷加深，神经纤维层放射状纹理消失。“亮毯”变短，视盘周 围脉络膜
