《三烯丙基三硫醚衍生物对人前列腺癌pc3细胞体外抗肿瘤作用及其机制的初步研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《三烯丙基三硫醚衍生物对人前列腺癌pc3细胞体外抗肿瘤作用及其机制的初步研究（72页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、独创性声明 笠旦盈甚垫剑鲍塑生盈寇 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中 已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋 友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者： 次功 签字日期： 六多1 年月罗日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的 规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁 盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可 以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复制手段保存
2、、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口臣保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名： 协编 签字日期：c M T - 年f 月尸日 锄张锄 签字日期：二珈J1 年 目录 摘要I A B S T R A C T I I I 第1 章文献综述1 1 1 大蒜的化学成分1 1 2 大蒜中烯丙基硫化物的抗肿瘤作用2 1 2 1 体外抗肿瘤作用。3 1 2 2 体内抗肿瘤作用3 1 3 大蒜中烯丙基硫化物的抗肿瘤机制4 1 3 1 抑制致癌物的活化4 1 3 2 对组蛋白修饰修饰作用5 1 3 3 影响细胞周期5 1 3 4 诱导细胞凋亡7 1 3 5 抑制自由基的
3、产生及抗氧化9 1 3 6 抑制肿瘤血管形成9 1 4 与其他抗肿瘤药物的联合应用9 1 5 大蒜中烯丙基硫化物的药代动力学。l O 1 6 结语。10 第2 章引言1 1 第3 章二烯丙基三硫醚( D I A T S ) 衍生物对人前列腺癌P C 3 细胞体外增殖影响1 3 3 1 材料1 3 3 1 1 细胞株来源13 3 1 2 化合物1 3 3 1 3 主要试剂1 4 3 1 4 主要器材与仪器1 4 3 1 5 主要试剂的配制1 5 3 2 方法。1 6 3 2 1 细胞培养与传代1 6 3 2 2M T T 法检测细胞活性。1 6 3 3 统计学分析1 6 3 4 结果1 6 3
4、4 1D A T S 衍生物对P C 3 细胞增殖的抑制作用。1 6 3 4 2D A T S 衍生物抑制P C 3 细胞增殖作用与其结构的关系。1 9 3 5 讨论21 3 6 小结2 2 第4 章二烯丙基三硫醚( D A T S ) 衍生物对人前列腺癌P C 3 细胞凋亡的影响2 3 4 1 材料。2 3 4 1 1 细胞株来源2 3 4 1 2 化合物2 3 4 1 3 主要试剂2 3 4 1 4 主要器材与仪器2 4 4 1 5 主要试剂的配制2 5 4 2 方：法2 9 4 2 1 细胞培养与传代2 9 4 2 2H o c h e s t 3 3 3 2 4 染色2 9 4 2 ：
5、； D N AL a d d e r 2 9 4 2 4A n n e x i nV - F I T C P I 双标法检测细胞凋亡3 0 4 2 5 流式细胞仪检测细胞周期变化3 l 4 2 6 细胞总蛋白的提取3l 4 2 7 蛋白质浓度的测定3 2 4 2 8w e s t e r nb l o t 分析相关蛋白表达变化3 2 4 3 统计学分析j 。3 3 4 4 实验结果：。3 3 4 4 1D A T S 衍生物作用后P C 3 细胞凋亡的细胞形态学变化3 3 4 4 3D | A T S 衍生物作诱导D N A 片段化。3 5 4 4 2A n n e x i nV - F I
6、T C P I 法分析D A T S 衍生物对P C 3 细胞凋亡率的影响3 5 4 4 4D A T S 衍生物对P C 3 细胞周期的影响3 8 4 4 5D A T S 衍生物对P C - 3 细胞凋亡相关蛋白表达的影响。4 1 4 5 讨论。4 3 3 6d 、结4 5 全文总结4 7 展望4 9 参考文献5l 至I 谢5 9 攻读学位期间发表论文与参与课题6 1 摘要 二烯丙基三硫醚衍生物对人前列腺癌P C - 3 细胞体 外抗肿瘤作用及其机制的初步研究 药物分析专业硕士研究生陈敏 指导教师李逐波教授 摘要 本实验的研究目的是从本实验室早期合成的一系列新的二烯丙基三硫醚( D A T
7、 S ) 衍 生物中筛选出能够有效抑制肿瘤细胞增殖的化合物，初步探讨其可能的作用机制，为研 发具有自主知识产权的D A T S 衍生物抗肿瘤新药奠定基础。 本实验以体外培养的人雄激素非依赖性前列腺癌P C 3 细胞为研究对象，选取其中五 种不饱和的D A T S 衍生物：- - ( 3 丁烯基) 三硫醚、二( 2 甲基2 一丙烯基) 三硫醚、二( 4 戊烯基) 三硫醚、- - 0 甲基2 丁烯基) - - 硫醚、二( 5 己烯基) 三硫醚，采用M T T 法检 测研究D A T S 及其衍生物对P C 3 细胞增殖抑制作用。采用H o c h e s t 3 3 3 4 2 荧光染色及荧 光显
8、微镜观察经D A T S 及其衍生物作用后，人前列腺癌P C 3 细胞中凋亡细胞的形态学变 化；采用D N AL a d d e r 实验进一步验证D A T S 及其衍生物可诱导P C - 3 细胞凋亡；并采用 A n n e x i n P I 双染，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。选取- ( 3 丁烯基) 三硫醚、二( 2 甲 基- 2 丙烯基) 三硫醚、二( 4 戊烯基) 三硫醚三种化合物进行抗肿瘤机制的研究，采用 P I 单染流式细胞仪分析细胞周期的分布；W e s t e r nb l o t 检测c 鹊p 鹬e 3 及细胞内凋亡相关 蛋白B e l 2 和B a x 蛋白表达的影响
9、。 不同浓度D A T S 及其衍生物处理P C 3 细胞2 4 h 、4 8 h 后，均可抑制P C 3 细胞体外增 殖，抑制率呈明显的剂量、时间依赖性；其中二( 2 甲基2 丙烯基) 的增殖抑制作用最 好，三硫醚- - - ( 3 丁烯基) 三硫醚和二( 4 戊烯基) 三硫醚两种衍生物的增殖抑制作用与 D A T S 相当，而二( 3 甲基2 丁烯基) - - - 硫醚和二( 5 己烯基) 三硫醚的的增殖抑制作用相- 比于D A T S 有所减弱。用D A T S 及其衍生物作用后，H o c h e s t 3 3 3 4 2 染色用荧光显微镜观 察P C 3 细胞中出现细胞核固缩、染色
10、质聚集及核裂解等典型凋亡细胞形态改变；D N A 琼脂糖凝胶电泳可以观察到明显的阶梯状条带D N AL a d d e r ，说明此时细胞发生了凋亡， 西南大学硕士学位论文 并且处在晚期凋亡阶段。A n n e x i nV P I 双染流式结果表明P C 3 细胞经过D A T S 及其衍生 物作用后，细胞凋亡率与对照组比较有显著性升高，证实D A T S 及其衍生物能诱导P C 3 细胞凋亡。流式细胞周期检测显示，D A T S 及其D A T S 及z ( 3 丁烯基) - - 硫醚、二( 2 甲 基2 丙烯基) 三硫醚、二( 4 戊烯基) 三硫醚三种衍生物可诱导P C 3 细胞发生在G 2 M 期阻滞，G o G l 期细胞减少，G 2 M 期细胞增多，S 期细胞无明显变化。W e s t e mb l o t 结果 表明D A T S 及- ( 3 丁烯基) 三硫醚、二( 2 甲基2 丙烯基) 三硫醚、二( 4 戊烯基) 三硫 醚三种衍生物能刺激c a s p a s e 3 的分解，及抑制B c l 2 蛋白的表达且上调B a x 蛋白表达。 以上结果说明，D A T S 衍生物能
