三株刺松藻内生真菌次生代谢产物及其生物活性研究

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1、, I 、l ,公 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文,是在导师指导下,独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集 体,均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定,同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版,允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文,同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到中国学位论文全文数据库,并向社会公

2、众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名:旁f 向垃 导师签名:夏鼬参 日 J k 符号说明 HN M R :P r o t o nN u c l e a rM g a n e t i eR e s o n a n c e ,质子核磁共振 b CN M R :C a r b o n13 N u c l e a rM a g n e t i eR e s o n n a c e ,1 3 碳原子核磁共振 E S I M S :E l e e r t o s p r yI o n i z a t i o nM a s sS p e c t r u m ,电喷雾离子源质谱 E

3、1 M S :E l e c t r o nI m p a c tM a s sS p e c t r u m ,电子轰击离子源质谱 H R M S :H i g hR e s o l u t i o nM a s sS p e c t r u m ,高分辨率质谱 2 DN M R :T w o D i m e n t i o n a lN u c l e a rM a g n e t i cR e s o n a n c e ,二维核磁共振 H M B C :( 1 HD e t e c t e d ) H e t e r o n u e l e a rM u l t i p l eB o

4、n dC o r r e l a t i o n , ( 检出。H 的) 异核多键相关 H S Q C :( 1 HD e t e c t e d ) H e t e r o n u c l e a rS i n g l eQ u a n t u mC o h e r e n c e , ( 检出H 的) 异核单量子相干 1 H 1 HC O S Y :1 H _ l HC o r r e l a t i o nS p e c t r o s c o p y ,氢氢直接相关 N O E S Y :N u c l e a rO v e r h a u s e rE e f f e tS p e

5、c t r o s c o p y ,二维核O v e r h a m e r 效应谱 I R :I n f r a r e da b s o r p t i o ns p e c t r u m ,红外吸收光谱 H P L C :H i g hP e r f o r m a n c eL i q u i dC h r o m a t o g r a p h y ,高效液相色谱 T L C :T h i nL a y e rC h r o m a t o g r a p h y ,薄层色谱 P T L C :P r e p a r a t i v eT h i nL a y e rC h r

6、o m a t o g r a p h y ,制备薄层色谱 C C :C o l u m nC h r o m a t o g r a p h y ,柱层析 M p :M e l t i n gP o i n t ,熔点 D M S O :D i m e t h y lS u l f o x i d e ,二甲基亚砜 M T T :3 - ( 4 ,5 - d i m e t h y l - 2 一t h i a z o y l ) 一2 ,5 - d i p h e n y l - t e t r a z o l i u mb r o m i d e , 3 ( 4 ,5 二甲基噻畔一2 )

7、 - 2 ,5 一二苯四氮唑溴盐 I C 5 0 :H a l fm a x i m a lI n h i b i t o r yc o n c e n t r a t i o n ,半数抑制浓度 P A F :p l a t e l e ta c t i v a t i n gf a c t o r ,血小板活化因子 - , 目录 中文摘要I 英文摘要I I I 化合物结构V 1 前言。1 1 1 海洋真菌次生代谢产物结构类型2 1 1 1 生物碱类2 1 1 2 萜类和甾体类3 1 1 3 聚酮类4 1 1 4 肽类6 1 1 5 其他类型化合物8 1 2 海洋真菌产生的生物活性物质1 0

8、 1 2 1 抗菌物质l O 1 2 2 细胞毒活性1 l 1 2 3 酶抑制剂1 l 1 2 4 抗原生动物活性1 2 1 2 5 细胞周期抑制剂1 2 1 2 6 抗血小板活性因子1 2 1 2 7 其他1 2 1 3 研究的目的意义及内容13 2 材料与方法1 4 2 1 仪器与试剂1 4 2 1 1 主要试剂1 4 2 1 2 主要仪器1 4 2 2 材料来源l5 2 3 菌株发酵培养l5 2 4 提取与分离:l5 2 5 生物活性试验方法l7 2 5 1 抑制细菌活性1 7 2 5 2 卤虫生物致死活性l8 2 5 3 乙酰胆碱酯酶抑制活性。l8 2 5 4 抗肿瘤生物活性体外筛选试

9、验一1 9 3 结果与分析2 l 3 1 菌株的I T S 区序列信息2 l 3 1 1 玉米赤霉菌菌株的I T S 区序列信息2 l 3 1 2 焦曲霉菌株的I T S 区序列信息2 l 3 1 3 杂色曲霉菌株的I T S 区序列信息2 l 3 2 菌株玉米赤霉菌次生代谢产物结构鉴定2 2 3 2 1 新化合物结构鉴定2 3 3 2 2 已知化合物结构鉴定2 5 3 3 菌株焦曲霉次生代谢产物结构鉴定2 7 3 3 1 新化合物结构鉴定:2 8 3 3 2 已知化合物结构鉴定2 9 3 4 菌株杂色曲霉次生代谢产物结构鉴定3 1 3 4 1 新化合物结构鉴定3 1 3 4 2 已知化合物结

10、构鉴定3 3 3 5 化合物物理常数与波谱数据3 7 3 6 生物活性研究4 5 3 6 1 抑菌活性。4 5 3 6 2 卤虫生物致死活性4 5 3 6 3 乙酰胆碱酯酶抑制活性4 6 3 6 4 抗肿瘤生物活性体外筛选试验4 7 4 讨论4 8 5 结论4 9 参考文献5 0 附录5 7 致谢6 6 攻读学位期间发表论文情况6 7 , 山东农业火学硕士学位论文 中文摘要 海洋微生物捌有丰富多样的次生代谢途径,其中海洋生物内生真菌次生代谢产物 研究同益受到天然产物化学界的重视。本论文选择了三株刺松藻内生真菌分别为玉米 赤霉菌( G i b b e r e l l az e a e ) 、焦曲霉( A s p e r g i l l u su s t u s ) 和杂色曲霉( A s p e r g i l l u sv e r s i c o l o r ) 进 行了规模发酵和次生代谢产物研究,并对分离得到的部分化合物进行了初步的生物活 性评价。 菌丝体和发酵液提取物采用常规的硅胶柱层析、凝胶S e p h a d e xL H 2 0 柱层析、制 备薄层层析、制备高效液相色谱以及重结晶

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