三子养亲汤对支气管哮喘大鼠肺组织il5mrna、血清ige表达水平的影响及临床观察

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1、成都中医药大学 硕士学位论文 三子养亲汤对支气管哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA、血清IgE表达水 平的影响及临床观察 姓名:车虹 申请学位级别:硕士 专业:中医内科学 指导教师:董滟 2009-05 成都中医药大学硕士学位论文 1 中文摘要 动物实验部分动物实验部分:实验目的实验目的:观察三子养亲汤对哮喘大鼠肺组织白细胞介素-5 (IL-5)基因 mRNA 表达及血清免疫球蛋白 E(IgE)水平的影响,探讨三子养亲汤 治疗支气管哮喘的分子生物学机制。 方法:方法:将 SD 大鼠随机分成正常组、哮喘模型组、地塞米松组、三子养亲汤大、 中、小剂量组,共六个实验组,以卵蛋白(Ovalhumin ,O

2、VA)致敏、激发的方式建 立大鼠哮喘模型, 通过 HE 染色观察形态学变化, 通过逆转录聚合酶联反应 (reverse transcriptase,RT-PCR)测定哮喘大鼠肺组织 IL-5mRNA 表达以及酶联吸附法检测 大鼠血清 IgE 水平。 结果结果:三子养亲汤能改善气道炎症;降低肺组织 IL-5mRNA 表达及血清 IgE、血 清炎性细胞含量。 临床观察部分临床观察部分:目的目的:评价三子养亲汤联合信必可都保治疗哮喘的有效性、安 全性以及对哮喘的控制状态。方法方法:随机分两组,治疗组 15 例,对照,组 15 例。通 过对比治疗前后各自症状改善的情况、肺功能、血清 IgE 含量及外周

3、血中嗜酸性粒 细胞(EOS)水平的改变来验证三子养亲汤治疗哮喘的疗效。 结果:结果:治疗组与对照组治疗 12 周后,其控制状态、肺功能改善、临床综合疗效、 主要症状积分、血清 IgE 含量及血嗜酸性粒细胞数均较对照组改善明显,两组差别 有明显统计学意义。 综述部分:综述部分:综述祖国医学与现代医学对支气管哮喘的认识及相关的研究进展。 关 键 词 : 关 键 词 :支气管哮喘 三子养亲汤 IL-5 IgE 成都中医药大学硕士学位论文 2 Abstract Part I :Animal experiment Objective: observe the effect of sanziyangqin

4、tang on the levels of bronchial asthmatic rats IL-5mRNA in the lung tissue and IgE in blood. Method: SD rats were divided into six groups randomly, they were normal group, asthma model group, dexamethasone group, low dose group of sanziyangqintang, middle dose group, high-dose group. All the rats we

5、re sensitized and provocated by ovalhumin into model of asthma except those of the normal group. Observe the change of rats lung tissues though stained with HE, determine the levels of bronchial asthmatic rats IL-5mRNA in the lung tissue , IgE and inflammatory cells in blood though the method of RT-

6、PCR. Result: sanziyangqintang can improve the inflammatory airway; lower the levels of bronchial asthmatic rats IL-5mRNA in the lung tissue , IgE and inflammatory cells in blood. Part II:Clinical observation Objective: estimate the control level ,the efficacy and the safety of the sanziyangqintang t

7、o cure the athmatic patients wih SYMBICORT symbicort turbuhaler. Method: patients were randomly divided into two groups, divided into conventional treatment group and the fomula group , each group includes 15 patients. by comparing the symptoms before and after treatments to improve the situation, t

8、he level of pulmonary function, blood IgE and eos changes to verify the formula of sanziyangqintang treatment of asthma. Result: sanziyangqintang can obviously improve the patients symptoms, improve lung function and reduce the levels of blood IgE and EOS, there are obvious differences in statistica

9、l significance. Part :Summary Summary of Chinese medicine with modern medicines understanding of bronchial asthma and related research. Key words: bronchial asthma ,sanziyangqintang,IL-5 ,IgE 成都中医药大学硕士学位论文 61 附件附件 2 申 明 申 明 硕士学位论文 硕士学位论文三子养亲汤对支气管哮喘大鼠肺组织 IL-5 及三子养亲汤对支气管哮喘大鼠肺组织 IL-5 及 血清 IgE 表达水平的影响及临

10、床观察血清 IgE 表达水平的影响及临床观察 是本人在成都中医药大学 攻读硕士学位期间在导师的指导下完成的。该论文成果归成 都中医药大学所有,有关学位论文成果的开发、转让、论文 发表等,均需征得导师及成都中医药大学同意。 硕士生(签名) : 导 师(签名) : 2009 年 4 月 是本人在成都中医药大学 攻读硕士学位期间在导师的指导下完成的。该论文成果归成 都中医药大学所有,有关学位论文成果的开发、转让、论文 发表等,均需征得导师及成都中医药大学同意。 硕士生(签名) : 导 师(签名) : 2009 年 4 月 成都中医药大学硕士学位论文 6 引 言 引 言 支气管哮喘(bronchial

11、 asthma,简称哮喘)是世界范围内严重威胁公众健康 的主要慢性疾病之一。资料表明,目前全球有 3 亿哮喘患者,而我国的哮喘病人约 有 0.25 亿。 在过去的几十年中世界各地支气管哮喘的发病率和死亡率一直呈逐年增 高的趋势 1,已引起世界各国学者的高度重视和广泛关注,哮喘已成为患者家庭及 社会一个沉重负担,世界卫生组织指出:在全球,哮喘所带来的经济成本已经超过 了肺结核和艾滋病成本的总和 2。 支气管哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病,许多细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大 细胞、 T 淋巴细胞、 中性粒细胞、 气道上皮细胞等) 和细胞组分 (cellular elements) 参与此过程的发生。其

12、发病机制目前尚不明确,其主要病理特征是以嗜酸性粒细胞 (EOS)为主的气道变应性炎症。其主要血清学特征是总 IgE 水平和特异性 IgE 水平 增高。近年来,现代医学对本病的病因、病机已深入到分子水平,免疫遗传学认为 哮喘患者的气道高反应性和气道炎症与受基因调控的血清总 IgE 和特异性 IgE 阳性 率密切相关,同时 T 细胞的免疫失衡是导致支气管哮喘患者体内 IgE 合成增多,灭 活减少的重要原因。目前认为引起 IgE 增多的细胞因子主要为白介素-4(IL-4) ,而 IL-5 可以通过促进 B 细胞分化和增殖来增强 IL-4 促进 B 细胞合成 IgE 的能力,还 能提高嗜碱性粒细胞活化

13、释放组胺、白三烯等化学介质。同时大量研究表明,IL-5 是嗜酸细胞炎症的关键调控因子,它具有免疫活性,能够诱导、促进 EOS 活化、增 殖和分化 3 。西医在发病机制及临床治疗上也进行了诸多的探索,取得了一定的进 展。西药虽起效快,但有些药物易引起骨质疏松、声音嘶哑、咽部不适、念珠菌感 染、肌肉震颤、低血钾、心律紊乱等副作用,并且容易反复发作。而在儿童、老年 人或合并其他基础疾病的哮喘患者,这些药物副作用更是不能忽视。另外在我国, 哮喘防治不够规范、教育面不够广,再加之西药治疗哮喘费用高昂,我国 95%以上 的哮喘患者尚未得到规范化诊断与治疗 2 2。因此西医以治疗哮喘方面尚有许多不足。 病情

14、既能得到有效控制,治疗费用又能降低的治疗方法是广大哮喘患者所期望的。 哮喘属中医“哮病”范畴,早在黄帝内经中就有类似哮喘特征的记载,如 “喘鸣” 、 “喘呼”之类的名称,即是指喘息并伴有声响之病证,与本病的发作特点 相似,是对本病特征的最早记载。此后众多医家通过临床经验总结,从不同方面概 成都中医药大学硕士学位论文 7 括了哮病的病因病机,如金匮要略认为, “哮病”以膈上伏痰为主因,以寒热之 邪为诱因;元朱丹溪尚有“哮喘专主于痰”之说;明戴元礼指出“宿有此根” 以及临证指南医案有“幼稚天哮”之说等等。通过对哮病病因病机的认识,中 医药在治疗哮喘方面上也取得了很好的疗效,因此运用中医药治疗哮喘成

15、为目前研 究的热点。随着免疫学、分子生物学、细胞生物学的发展,中医药对本病治疗的研 究也从单纯的对症状表现的评估,发展到对电子显微镜下超微结构的分析,但对于 其作用机制的研究尚不够深入。 三子养亲汤组方简单、严谨,临床运用治疗哮喘疗效显著,近年来药理研究显 示其镇咳、祛痰、平喘作用确切,但对于治疗哮喘作用靶位点尚缺乏实验研究。本 研究通过实验与临床相结合的方式,旨在证实三子养亲汤在治疗哮喘具有良好临床 效果的同时,探讨其在微观分子领域发挥平喘效用的机制,以及通过本研究确立古 方三子养亲汤治疗支气管哮喘机制所在。 成都中医药大学硕士学位论文 8 实验研究 实验研究 主要技术路线 主要技术路线 大

16、鼠哮喘模型给药 外周血浆 RT-PCR 检 测 IL-5 的基因表 达 ELISA 法检测 IgE 肺组织 HE 染色 成都中医药大学硕士学位论文 9 1 实验材料 1 实验材料 1.1 实验动物 1.1 实验动物 健康、成年、清洁级雄性 SD 大鼠 54 只,鼠龄 2-3 月龄,体重 164.909.6g, 由成都中医药大学实验动物中心提供(合格证号:SCXK(川)200411) 。 1.2 饲料及饲养环境 1.2 饲料及饲养环境 实验大鼠饲养于成都中医药大学医学实验动物中心,室温 18-24,相对湿度 45%70,空气流通,12 小时光照维持,昼夜循环。实验期间,各组大鼠自由摄 食、饮水。 1.3 主要设备及仪器 1.3 主要设备及仪器 荧光定量反应仪器:iCycler iQ,Bio-Rad, USA 离心机: 8RS,heraeus,Germany 自制密闭有机玻璃箱 :大小约 20cm20cm30cm YC-Y800 医用雾化器:勃林格殷格翰公司提供,雾化微粒大小为 23 m; 电子

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