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1、华中科技大学 硕士学位论文 ATP敏感性钾通道对大鼠前脂肪细胞增殖分化影响及其机制 姓名：王曜晖 申请学位级别：硕士 专业：病理学与病理生理学 指导教师：刘声远 20070501 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 ATP 敏感性钾通道对大鼠前脂肪细胞增殖分化 ATP 敏感性钾通道对大鼠前脂肪细胞增殖分化 影响及其机制 影响及其机制 摘摘 要要 一、一、ATP 敏感性钾通道对大鼠前脂肪细胞增殖分化影响敏感性钾通道对大鼠前脂肪细胞增殖分化影响 目的：目的：探讨 ATP 敏感性钾通道在大鼠前脂肪细胞增殖分化中作用。 方法：方法：逆转录 P
2、CR 检测大鼠脑组织、脂肪组织、前脂肪细胞和诱导 5 天获得的脂肪 细胞中 ATP 敏感性钾通道磺脲类受体 mRNA (SURmRNA)亚型，实时定量 PCR 检测 前脂肪细胞和诱导 5 天获得的脂肪细胞中 SURmRNA 表达；ATP 敏感性钾通道阻滞 剂格列本脲和激动剂二氮嗪作用于前脂肪细胞， 实时定量 PCR 检测 SURmRNA 表达， MTT 检测前脂肪细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期分布；油红 O 染色法检测细胞 内脂质含量，ImagePro plus5.0 软件测量细胞直径。 结果：大鼠脑组织中有SUR1mRNA、SUR2mRNA表达，大鼠脂肪组织、前脂肪细胞 和诱导5天获得的脂
3、肪细胞中均有SUR2mRNA表达，而无SUR1mRNA表达，且脂肪细 胞中SUR2mRNA表达明显高于前脂肪细胞；格列本脲抑制前脂肪细胞SUR2mRNA表 达，呈剂量依赖性地促进前脂肪细胞增殖，增加G2/M+S期细胞百分率，增加细胞脂质 含量，使脂肪细胞直径增大；二氮嗪在这些方面的作用与格列本脲相反。 结论：结论：ATP 敏感性钾通道在前脂肪细胞增殖分化中可能起调节作用。 关键词关键词 大鼠；钾通道；磺脲类受体；脂肪细胞；肥胖症 2 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 二、ATP 敏感性钾通道调节大鼠前脂肪细胞增殖分化机制研究敏感性钾
4、通道调节大鼠前脂肪细胞增殖分化机制研究 目的：目的：探索 ATP 敏感性钾通道调节大鼠前脂肪细胞增殖分化机制。 方法：方法：ATP 敏感性钾通道特异性激动剂（二氮嗪） 、阻滞剂（格列本脲）作用于前脂 肪细胞诱导分化 5 天后，逆转录 PCR 检测瘦素 mRNA 表达及过氧化物酶体增殖物激 活受体 (PPAR)mRNA 表达。二氮嗪、格列本脲作用于前脂肪细胞一天，Western blot 检测其细胞内 P21、P27 蛋白表达。 结果：结果：前脂肪细胞分化过程中，二氮嗪组瘦素 mRNA 表达明显增加（p0.05） ，格列 本脲组瘦素 mRNA 表达明显降低（p0.05） ；格列本脲组 PPARm
5、RNA 表达增加 （p0.05） ，而二氮嗪组 PPARmRNA 表达减少（p0.05） 。二氮嗪作用于前脂肪细胞， 使细胞内 P21、 P27 表达增高 （p0.05） ， 而格列本脲作用于前脂肪细胞后， 细胞内 P21、 P27 表达降低（p0.05） 。 结论：结论：ATP 敏感性钾通道调节大鼠前脂肪细胞增殖分化，可能与瘦素 mRNA、P21、 P27 蛋白表达上调，PPARmRNA 表达下调有关 关键词关键词 钾通道；脂肪细胞；细胞增殖；细胞分化 3 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Effects and mechanis
6、m of ATP-sensitive potassium channels on the proliferation and differentiation of rat preadipocytes Abstract Part1 Involvement of ATP-sensitive potassium channels in the proliferation and differentiation of rat preadipocytes Objective: To investigate the effects of ATP-sensitive potassium channels o
7、n the proliferation and differentiation of rat preadipocytes. Methods: We discriminated the subtype of sulphonylurea receptor (SUR) mRNA, which is the receptor of ATP-sensitive potassium channels, in brain and adipose tissue, preadipocytes and adipocytes obtained by inducing for 5 days of rat. The e
8、xpression of sulphonylurea receptor mRNA in preadipocytes and adipocytes obtained by inducing for 5 days and the effects of the inhibitor (glibenclamide) and opener (diazoxide) of ATP-sensitive potassium channels on the expression of SUR mRNA in preadipocytes were measured by Real-time Q-PCR. Preadi
9、pocytes proliferation and cell cycle were measured by MTT spectrophotometry and flow cytometer. The content of lipid was measured by Oil Red O staining , and cell diameter was determined by ImagePro plus5.0 software. Results: SUR2 mRNA and SUR1 mRNA were expressed in brain tissue. SUR2 mRNA, not SUR
10、1 mRNA was expressed in adipose tissue, preadipocytes and adipocytes obtaining by inducing 5 days, and the expression in adipocytes was obviously higher than it in preadipocytes. Glibenclamide inhibited the expression of SUR2 mRNA in preadipocytes, promoted preadipocytes proliferation in a dose-depe
11、ndent manner, increased the cell percentages in G2/M+S phase, increased lipid content, augmented adipocyte diameter. But the actions of diazoxide were contrary to those of glibenclamide. Conclusion: ATP-sensitive potassium channels can regulate the proliferation and differentiation in preadipocytes.
12、 Keywords rat; potassium channels; sulphonylurea receptor; adipocyte; obesity 4 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Part 2. Mechanism that ATP-sensitive potassium channels involve in the proliferation and differentiation of rat preadipocytes Objective: To explore the mechanism that ATP-s
13、ensitive potassium channels involve in the proliferation and differentiation of rat preadipocytes. Methods: After preadipocytes in the course of induction were treated by diazoxide and glibenclamide for 5 days, the expression of peroxisome proliferator-activated receptor mRNA (PPAR mRNA) and leptin
14、mRNA was estimated by RT-PCR. P21 and P27 in preadipocytes treated by diazoxide and glibenclamide were determined by western blot. Results: In the course of the differentiation in rat preadipocytes, leptin mRNA in the diazoxide group increased greatly (p0.05), while leptin mRNA in the glibenclamide
15、group decreased obviously (p0.05). PPAR mRNA in glibenclamide group was raised (p0.05), compared with control group. But PPAR mRNA in diazoxide group was lowered (p0.05). When diazoxide took effect on the preadipocytes, P21 and P27 were promoted, whereas P21 and P27 were inhibited in glibenclamide C
16、onclusion: ATP-sensitive potassium channels involve in the proliferation of rat preadipocytes.This might be related to the increasing of P21, P27 and the decreasing of PPAR-mRNA. Key words potassium channels; adipocyte; cell proliferation; cell differentiation 5 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 缩略词缩略词 缩写 英文全称 中文全称 SUR sulfonylurea receptor 磺脲类药物受体 KATP ATP-sensitive potassium channelsATP 敏感性钾通道 DMSO Dimethyl Sulphoxide 二甲基亚砜 DTT Diethio threitol 二硫代苏糖醇
