《alox5ap基因多态性与缺血性脑卒中的相关性》由会员分享，可在线阅读，更多相关《alox5ap基因多态性与缺血性脑卒中的相关性（43页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、摘要 研究目的探讨5 一脂氧合酶激活蛋白( A L O X S A P ) 基因的$ G 1 3 S 1 1 4 ( r s i 0 5 0 7 3 9 ) 和S G l 3 S 3 2 ( r s 9 5 5 1 9 6 3 ) 两个位点基因多态性与缺血性脑卒中( I S ) 的关系。 研究方法采用病例对照研究的方法，对4 4 0 例I S 患者( 病例组) 和4 8 6 例非 I S 人群( 对照组) 进行比较，对照组在年龄及性别方面与病例组相匹配，应用聚 合酶链反应限制性片段长度多态性( P C R - R F L P ) 的方法，检测S G l 3 S 1 1 4 T A 和 S G
2、l 3 S 3 2 C A 两个位点基因多态性，比较两个位点基因型及等位基因在病例组及各 亚组与对照组之间的差异。用多因素L o g i s t i c 回归分析其基因型、等位基因与I S 的相关性。 研究结果( 1 ) S G l 3 S 1 1 4 位点基因型病例组较对照组有明显差异( X 2 = 1 5 7 6 ， P O 0 5 ) 。而病例组在吸烟，高血压，糖尿病病史及H D L 水平方面较对照组 有显著差异( P O 0 5 ) 。C E 组基因型( X 2 = 2 4 8 ，P O 0 5 ) 与A 等位基因 ( X 2 - 1 9 7 ，P O 0 5 ) 与对照组相比无明显差
3、异。 2 4S G l 3 S 3 2 位点基因分型 ( 1 ) S G l 3 S 3 2 位点P C R 扩增片段经酶切反应处理后行电泳检测，根据电泳结果成 像中的条带信息判断样本基因型，如下图2 5 所示 图2 5A L O X 5 A P 基因S G l 3 S 3 2 位点P C R 产物经酶切后电泳图 M 为l O O b pi 艟r k e r ， 1 、2 、8 、9 、1 1 、1 3 、1 5 、1 6 为从基因型( 3 7 0 b p ) ，3 、5 为C c 基因 型( 1 7 7 、1 9 3 b p ) ，4 、6 、7 、1 0 、1 2 、1 4 为A C 基因
4、型( 3 7 0 、1 7 7 、1 9 3 b p ) ( 2 ) 各个基因型取部分样本行D N A 测序，测序结果与P C R F L A P 所得结果一致， 说明P C R F L A P 所得结果可信，各基因型测序图如下： 一 1 3 青岛大学硕士学位论文 1 4 0 1 5 01 6 0 1 7 01 8 0 C C TC CC C CG GG G G TTG CT - GA TG G A TCCTTCCC C C G G A TTT C T 图2 8S G , 1 3 S 3 2 位点从基因型 图2 8S C , 1 3 S 3 2 位点c 基因型 1 4 第二章实验结果 1 4
5、0 l S 0 1 6 0 1 7 01 8 01 9 1 CCTC A CC , t CCG G G G G TTG CT CG TG G TCCT TCCC C C GG T t 下C 图2 8s G l 镐3 2 位点0 c 基因塑 ( 3 ) 根据电泳结果判定样本基因型，病例组包括各亚组及对照组中S G l 3 S 3 2 位点 基因型及等位基因频率汇总见下表2 3 ，并对所有研究对象进行拟合优度检测，I S 组及对照组的基因型分布符合H a r d y - W e i n b e r g 平衡，说明样本具有群体代表性。 表2 3S G l 3 S 3 2 位点基因型及等位基因分布 s
6、 G l 3 S 3 2 1 1 基因型等位基因型 C C ( )C A ( )从( ) PC ( )A()P 2 5S G l3 S 3 2 位点基因型与等位基因频率的组间比较 S G l 3 S 3 2 位点基因型较对照组无显著差异( X 2 = 1 7 0 ，P O 0 5 ) ，等位基因在 两组间无差异( X 2 ：o 0 0 ，P O 0 5 ，O K = 1 0 1 ，9 5 C I = 0 8 2 一1 2 2 ) 。L 从组中基因型 与对照组比较无显著差异( X 2 - 1 0 9 ，P O 0 5 ) ，等位基因差异亦无统计学意义 1 5 一一I 一 青岛大学硕士学位论文 (
7、 X 2 = O 0 4 6 ，P O 0 5 ，O R = O 9 8 ，9 5 C I = 0 7 8 - 1 2 1 ) 。S V D 组基因型( i 2 = 1 0 4 ， P O 0 5 ) 与等位基因( X 2 = O 3 7 ，P O 0 5 ，O R = I 1 1 ，9 5 C I = 0 7 9 1 5 6 ) 较对照组差 异不显著。C E 组基因型( X 2 = 1 1 1 ，P O 0 5 ) 及等位基因( X 2 = O 0 2 7 ，P O 0 5 ， O R = O 9 5 ，9 5 C I = 0 5 5 一1 6 6 ) 与对照组比较差异无统计学意义。 1 6
8、 第三章讨论 第三章讨论 A L O X 5 A P 基因是2 0 0 4 年D E C O D E 研究组首先发现的。研究人员应用全基因组扫 描的方法对冰岛7 1 3 例心肌梗死患者的遗传基因进行了分析，结果发现1 3 q 1 2 1 3 区域与冰岛地区心肌梗死明显相关，此遗传片段即为A L O X 5 A P 基因，随后的研究 指出，此基因的变异也极大影响男性缺血性卒中的发病率。 A L O X 5 A P 基因长度约为3 1 k b ，包括5 个外显子和4 个内含子，编码5 一脂氧合 酶激活蛋白( F L A P ) 。F L A P 是一种膜蛋白，为5 一脂氧合酶白三烯途径中的关建 酶
9、，能够与花生四烯酸( a r a c h i d o n i ca c i d ，A A ) 结合并激活5 - L O ，调节炎症递 质白三烯C 4 ( L T C 4 ) 的产生，参与A S 的炎症反应。 D e c o d e 研究组对A L O X 5 A P 基因进行深入研究，筛选出基因外显子及内含子中 多个S N P 进行缺血性卒中相关性分析，发现其缺血性脑卒中的风险性主要来源于 H a p A 单倍型( S G l 3 S 2 5 G 、S G l 3 S 3 2 A 、S G l 3 S 8 9 G 、S G l 3 S 1 1 4 T ) ，在男性群体中尤为 突出。他们对5 -
10、 L O 途径的相关产物进行测定以明确具体作用机制，结果发现与对 照组相比，缺血性卒中组的L T C 4 含量明显增高，所以推断，A L O X 5 A P 基因变异导 致L T C 4 表达增多从而增加缺血性卒中的发病风险“ 3 。 H a p A 单倍型不仅与冰岛人群的动脉粥样硬化性血管病相关，同样影响苏格兰 人群心肌梗死及缺血性卒中的发病，这种相关性已通过实验证明，H a p A 单倍型能 使苏格兰人群的缺血性卒中发病风险增加1 3 6 倍n 3 1 。A L O X 5 A P 基因有多个单核苷 酸基因突变，不同的S N P 影响不同人群，由D E C O D E 研究组进行的另一项研
11、究显 示，在A L O X 5 A P 基因中由S G l 3 S 3 7 7 、S G l 3 S 11 4 、S G l 3 S 4 1 和S G l 3 S 3 5 4 个位点组成 的H a p B 单倍型与英国地区人群的心肌梗死的发生显著相关n 3 。 随后全世界各地区科学家针对不同人群进行重复实验，所得结果不一。 L S h m u s s a a r 等n 耵选取中欧人群为研究对象，通过比较缺血性卒中病例组与对照组 A L O X 5 A P 基因上的2 2 个S N P s 的差异，结果发现S G l 3 S 1 1 4 和S G l 3 S 1 0 0 两个位点与 缺血性卒中的
12、关系最为密切，并认为基因多态性通过A S 对缺血性卒中产生影响。 E 1 i n L O h m u s s a a r 等n 朝研究发现单独标记( S G l 3 S 1 1 4 ) 的单元型与卒中相关，在男性 比女性更明显。H a k a nL o _ - v k v i s t 等n 町的研究显示A L O X 5 A P 基因中的$ G 1 3 S 2 5 位 点多态性与I S 相关，其A 等位基因是非高血压患者缺血性脑卒中的风险来源。 K a u s h a l 等n 7 3 通过病例对照研究探讨A L O X 5 A P 基因多态性与I S 的相关性在人种之 间的差别，结果显示A
13、L O X 5 A P 基因S G l 3 S 1 0 6 A G 、S G l 3 S 8 9 A G 多态性在白种人无 论基因型还是等位基因型或是单倍型均明显相关，但黑人中并没有这种相关性， 说明遗传因素对疾病的作用具有人种差异性。我国国内亦做过相关研究，中国协 和医科大学张伟丽等剐开展的研究A L O X 5 A P 基因与缺血性卒中在中国地区相关性 1 7 青岛大学硕士学位论文 的实验结果显示，S G l 3 S i l 4 基因变异与男性L A A 型脑梗死患者相关，A 等位基因 可使男性L 从型脑卒中的发病风险增加1 6 2 倍，但单倍型并未显示与缺血性卒中 相关。该研究组随后的研
14、究发现M T H F R 基因6 7 7 C T 位点的T T 基因型可与 S G l 3 S 1 1 4 的A A 基因型产生协同作用，共同增加男性缺血性卒中的患病风险n 引。国 内贾建平教授领导的研究小组发现A L O X 5 A P 启动子区的3 个单核苷酸多态性的单 体型与缺血性卒中密切相关，但病例数较少，还需要大规模的研究证实u 们。 然而，部分有关该基因与脑卒中相关性的研究所得结论却是否定的。 K o n s t a n t i n o sK o s t u l a s 。等昭们对瑞典人群进行的调查研究显示H a p A 虽然可对A S 产 生轻微作用，却未显示出与缺血性脑卒中的相
15、关性，说明基因多态性的影响具有地 区差异性。A I E L L O 瞄等在一个前瞻性的巢式病例对照研究中，显示等位基因，基因 型和单体型分布在病例组和对照组中相似，A L O X S A P 基因变异与动脉粥样硬化血栓 性事件发病风险没有明显相关。最新一篇关于该基因与脑卒中相关性的M e t a 分析 指出，由于研究资料的不足，故无法证明或否定该基因与脑卒中疾病的关联，仍需 要进一步的文献支持控羽。另一篇近期综述也以“不确定“ 来形容A L O X S A P 基因与脑 卒中之间的关系乜引。如此争议，其原因不仅与实验设计的不同有关，而且基因对疾 病的影响确实存在种族和地区差异。因此，在全球范围
16、内进行更广泛的相关性研 究，能够使我们对这种基因多态性在人类缺血性脑卒中的影响有更加深入细致的了 解。 本文比较I S 患者及4 8 6 例对照组A L O X 5 A P 基因S G l 3 S 11 4 和$ G 1 3 S 3 2 两个单核 苷酸多态位点基因型及等位基因的频率，结果显示两组S G l 3 S 1 1 4 位点基因型频率 差异有显著性( X 2 = 1 5 7 6 ，P O 0 5 ，O R = I O l ，9 5 C I = 0 8 2 - 1 2 2 ) ，可以认为S G l 3 S 3 2 位点多态性 、与I S 无关。 综上所述，本研究显示在A L O X 5 A P 基因的多个S N P 中S G l 3 S 1 1
