《诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达 医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达 医学论文（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达 医学论文 本文由中国论文范文收集整理。 作者：曾曙光， 陈伟良， 杨 岚， 邱钧琦 张积仁， 章锦才 艾伟健， 郑俊发 【摘要】 【目的】 探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF） 在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达，为进一步 研究 iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【 方法 】 采用逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA 和蛋白表达情况进行检测。【结果】 RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iN
2、OSVEGF mRNA条带明显，SP免疫组化检测到iNOSVEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】 iNOSVEGF mRNA 和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。 【关键词】 诱生型一氧化氮合酶； 血管内皮生长因子； 舌； 肿瘤 Abstract:【Objective】 To investigate the expression of inducible nitric oxide synthase ( iNOS) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in Tca8113 and provide basement
3、of experiment for further study on the role of iNOS and VEGF in tongue carcinoma angiogenesis. 【Methods】 iNOS and VEGF mRNA and protein were detected by RT-PCR and SP immunohistochemistry. 【Results】 The band of iNOS and VEGF mRNA were obvious and the expression of iNOS and VEGF protein were strongly
4、 positive by immunohistochemistry in Tca8113 cells. 【Conclusion】 There were overexpression of iNOS and VEGF mRNA and protein in Tca8113cells. Key words: inducible nitric oxide synthase; vascular endothelial growth factor; tongue; neoplasms 一氧化氮（nitric oxide, NO）是生物体内一种小分子气体。近期的研究发现NO同时也参与包括肿瘤在内的许多病理
5、过程。内源性NO是由一氧化氮酶（nitric oxide synthase, NOS）以L-精氨酸为底物氧化合成的。生物体内的NOS至少有3种类型，其中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）主要由活化的巨噬细胞，肿瘤细胞诱导产生，作用缓慢而持久，其产生的NO量也较多。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）是由正常细胞或肿瘤细胞产生的。近期的研究表明： iNOS和VEGF在头颈肿瘤中高水平表达，由iNOS诱导产生的NO在肿瘤血管的形成中起着关键的信号传导作用，并调控VEGF，共
6、同促进肿瘤血管的生成。舌鳞癌是口腔最常见常见的恶性肿瘤，iNOS和VEGF是否共同促进舌癌肿瘤血管生成，尚不甚清楚。我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)法和SP免疫组化法对舌癌细胞株Tca8113细胞株中iNOSVEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测, 为探讨iNOS和VEGF 在口腔癌肿瘤血管生成中的相互作用奠定实验基础。 1 材料和方法 1.1 细胞的来源及培养 将冻存的舌鳞癌Tca8113细胞株(由上海 交通 大学第九人民 医院 何荣根教授惠赠)复苏后，置于含10胎牛血清(杭州四季青)的DMEM低糖培养基(美国Gibco公司)，37 ，5CO2恒温细胞培养箱中培养。每隔34
7、d传代一次。掌握Tca8113细胞株基本生长 规律 。 1.2 所用材料及设备 细胞培养所需1640购自Gibco公司,含0.2%EDTA的0.2%的胰酶购自sigma公司。提取总RNA的Trizol试剂购自Invitrogen公司。行RT实验的试剂盒购自捷克的Fermentas公司。PCR实验所需试剂购自Takaca公司的试剂盒。100 bp的Marker购自天为 时代 公司。PCR所需的iNOS、VEGF、以及内参GAPDH的引物经Primer 5软件设计,由上海生物工程公司合成。引物如下： iNOS基因：上游引物，5GGA GCC AGC TCT GCA TTA TC3；下游引物，5TT
8、T TGT CTC CAA GGG ACC AG3。VEGF基因：上游引物，5GAT CCT GCC CTG TCT CTC TG3；下游引物，5GAC TCG CCC TCA TCC TCT T3。SP超敏免疫组化试剂盒购自Santer Cruze公司，抗VEGF多克隆抗体、抗iNOS抗体购自Sigma公司。3-3-Diaminobenzidine(DAB)显色剂购自武汉博士德公司。 1.3 实验方法 1.3.1 细胞总RNA 的提取 取两瓶对数生长期Tca8113细胞(约5106/瓶)原培养基,冰PBS洗两遍,在每瓶中加1 mL Trizol液,静置约15 min,待细胞裂解后移入EP管中
9、，加0.2 mL 氯仿，再静置1015 min，,然后4 12 000 r/min 离心15 min,吸取上层水相置一新的EP管中，加入等量的异丙醇，静置10 min左右，4 12 000 r/min 离心10 min，弃上清液，加入预冷等体积75%冰乙醇1 mL。再4 10 000 r/min 离心5 min。弃上清液，开管干燥5 min左右，将产物溶于约30 L经DEPC处理过的无RNase水中。取约5 L进行OD值检测。另取约3 L, 与上样buffer约2 L，金染料1 L混匀后上样于1%的琼脂糖凝胶电泳电泳。其余产物置于-20 冰箱中保存。 关键词:因子,表达,生长,血管,诱导,VEGF,医学论文,诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达 内容摘要:本文由中国论文范文收集整理。 作者：曾曙光， 陈伟良， 杨 岚， 邱钧琦 张积仁， 章锦才 艾伟健， 郑俊发 【摘要】 【目的】 探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF） 在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达，为进一步 研究 iNOS和VEGF在舌鳞癌肿
