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1、血清CINC浓度在大鼠肝移植后急性排斥反应中的意义【摘要】目的探讨嗜中性粒细胞趋化因子(CINC)在肝移植后再灌注损伤和急性排斥反应发生时的作用。方法施行了3组大鼠原位肝移植。即：(1)ACI大鼠-LEW大鼠组；(2)BN大鼠-LEW大鼠组；(3)LEW大鼠-LEW大鼠组。分别为高度排斥反应组，中度排斥反应组和对照组。结果大鼠肝移植后血清CINC浓度与正常大鼠相比明显增加(P0.001)，同时嗜中性粒细胞总数和天冬氨酸转氨酶(AST)及丙氨酸转氨酸(ALT)值也增加。急性排斥反应发生时，随着血清CINC浓度的上升，嗜中性粒细胞总数和AST、ALT值也增加，其增加幅度与排斥反应强度有关。结论CI
2、NC不仅参与再灌注损伤，而且参与急性排斥反应。因此，CINC可以作为诊断急性排斥反应的指标之一。【关键词】再灌注损伤急性排斥反应肝脏/移植嗜中性粒细胞趋化因子 The role of serum CINC level in acute rejection after liver transplantation in rats.ZOU Xiaoming, YUAN Youping, YANG Weiliang, et al.Department of General Surgery, Second Affiliated Hospital, Harbin Medical University, H
3、arbin 150086【Abstract】ObjectiveIn order to investigate the role of CINC in reperfusion injury and acute rejection after rat liver transplantation.MethodsThree groups of rats underwent the orthotopic liver transplantation: the high rejection group, the middle rejection group and the contol group. The
4、 blood was taken from the tails vein at 12th h, 1st day after liver transplantation. The same operation was repeatedly perfomed every 2 days from then on. The serum CINC level was examined by using ELISA method.ResultsAs compared with control group, the serum CINC level was obviously increased after
5、 liver transplantation in the rats (P0.001). At the same time, the amount of neutrophils and the level of AST and ALT were also increased with the increase of serum CINC level. As the acute rejection occurred, with the serum CINC level increasing, the amount of neutrophils, AST and ALT were increase
6、d also, which was related to the severity of rejection (P0.01).ConclusionCINC not only involved in the reperfusion injury, but also acute rejection. So, CINC could be used as one of the indicators for diagnosis of acute rejection.【Key words】Reperfusion injuryAcute rejectionLiver/transplantationCINC肝
7、移植后再灌注损伤和急性排斥反应发生时，免疫活性细胞向肝组织内游走、浸润，从而引起组织破坏，这与细胞因子有关。细胞因子之一嗜中性粒细胞趋化因子(CINC)，再灌注损伤时血中浓度升高1，但其机理并不清楚。我们通过大鼠原位肝移植实验，探讨了大鼠的相当于IL-8分子CINC的血中浓度变化，现报告如下。材料与方法一、实验动物和原位肝移植法：选用体重200250g雄性ACI大鼠、BN大鼠、LEW大鼠做供体，230250gLEW大鼠做受体，均由日本生物材料中心提供。用改良的Kamada法2分别施行以下3组原位肝移植，每组供、受体大鼠均为10只。(1)ACI大鼠-LEW大鼠组(简称ACI-LEW组)，该组为高
8、度排斥反应组。(2)BN大鼠-LEW大鼠组(简称BN-LEW组)，该组为中度排斥反应组。(3)LEW大鼠-LEW大鼠组(简称LEW-LEW组)，该组为对照组。供体肝脏在4乳酸林格氏液中保存约2个小时，无肝期25分钟以内，供、受体均未给与免疫抑制剂。二、标本采取法：移植后12小时，24小时，以后每隔2天从大鼠尾静脉采血，测定末梢血嗜中性粒细胞总数。血清在-70保存后，测定CINC浓度、AST、ALT值。三、CINC测定法：CINC的测定，是使用日本免疫生物研究所(IBL)的测定盒，采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定。四、统计学处理：肝移植后血清CINC浓度、未梢血嗜中性细胞总数、AST值、AL
9、T值均采用t检验进行分析，以P0.05为差异显著。结果一、血清CINC浓度：正常LEW、BN、ACI大鼠血清CINC浓度的正常值范围是172.751.1ng/L。同种同系肝移植和同种异系肝移植血清CINC浓度于再灌注后12小时明显升高，与正常大鼠的血清CINC浓度相比，差异非常显著P0.001，24小时以内降低(附)。其中ACI-LEW组均于术后第10天前后因发生急性排斥反应而死亡。急性排斥反应发生时与移植后同日的对照组相比，血清CINC浓度明显升高(P0.001)。BN-LEW组在移植后1个月内除1/3例死亡外，平均生存3个月。血清CINC浓度于术后10天再次轻度升高，30天以内降低，以后，
10、排斥反应发生时再次升高。LEW-LEW组平均生存一年左右。血清CINC浓度于手术后7天轻度升高外，均末超过500ng/L。 附肝移植后血清CINC浓度二、大鼠肝移植后末稍血嗜中性粒细胞总数与CINC浓度：末稍血嗜中性粒细胞总数与血清CINC浓度一致，于再灌注后急速上升，24小时以内下降。在急性排斥反应发生时，嗜中性粒细胞总数，随着血清CINC浓度的升高而增加。三、AST和ALT值：再灌注后LEW-LEW组与ACI-LEW组相比，AST和ALT值很快降低，两组差异显著，P0.01。讨论IL-8是炎症性细胞因子，对粒细胞有强大的趋化作用。使粒细胞脱颗粒，产生氧自由基，促使骨髓内嗜中性粒细胞向末梢血
11、循环释放，促进嗜碱性粒细胞释放组胺和白三烯，增强粒细胞穿透内皮细胞层，从血管内向组织游走，吸引粒细胞进入感染区，发挥其抗感染作用3，IL-8有4个亚型，CRO/MGSA、IP10、PF4和PBP4。大鼠没有IL-8，有与IL-8GRO/KC亚型的结构相似的蛋白5，称为CINC。CINC/GRO/KC是嗜中性粒细胞特异性趋化因子。肝移植后，所发生的冷缺血再灌注损伤，其基本病理变化是IL-8所介导的急性炎症反应。本实验中，肝移植后血清CINC浓度于再灌注后12小时明显升高，与正常大鼠的血清CINC浓度相比，差异非常显著。同时，末梢血嗜中性粒细胞总数和AST、ALT值也升高，说明再灌注损伤与IL-8
12、(CINC)有关。其中，ACI-LEW组与LEW-LEW组相比，CINC浓度、嗜中性粒细胞总数、AST和ALT值均有显著差异(P0.05)，提示着再灌注损伤的程度与排斥反应的强度有关。有文献报道，在使用抗IL-8抗体而减轻肺的再灌注损伤的报告中指出1，为了使抗体发挥作用，抗体的投与必须在再灌注数小时以内，与我们的结果相吻合。急性排斥反应的发生，是由宿主的T细胞发现移植器官上的移植抗原是非已而引起，继而使TH亚群T细胞产生细胞因子，而决定是细胞性还是体液性为主的免疫应答。被激活的TH亚群T细胞产生的细胞因子，可作用于细胞毒性T细胞，NK细胞、单核巨噬细胞、嗜中性粒细胞和B细胞等，并且作用于血管内
13、皮细胞、MHC，增强各种细胞因子的发现，促进排斥的的发生，加重组织的破坏。在我们的研究结果中，ACI-LEW组及BN-LEW组在急性排斥反应发生时血清CINC浓度比移植后同日的LEW-LEW组明显升高(P0.001)，同时，末梢血嗜中性粒细胞总数，随着血清CINC浓度的升高而增加。提示IL-8促进了嗜中性粒细胞和NK细胞等炎性细胞向局部游走，与内皮细胞粘连，向组织内浸润。但是，本实验测定大鼠的CINC，与人类的IL-8不同，是特异性的嗜中性粒细胞趋化因子。由于这个差异，虽然不能这样简单地将大鼠的CINC值的变化应用于临床，但是据Tilg的报道6，在19例临床肝移植患者中，急性排斥反应发生时末梢
14、血中IL-8浓度也升高。从这两方面的结果可以认为，急性排斥反应发生时IL-8促使嗜中性粒细胞、NK细胞等炎性细胞参与非特异性排斥反应。本实验结果可以认为，肝移植后再灌注损伤和急性排斥反应时，末梢血中嗜中性粒细胞总数的增加，是由于IL-8促使骨髓中嗜中性粒细胞向末梢血循环中释放、并使炎性细胞向肝组织内浸润的结果。说明IL-8不仅促进再灌注损伤，而且参与急性排斥反应。因此，可以认为肝移植后血清IL-8浓度可作为诊断急性排斥反应的指标之一。如果临床上出现不能解释的发热、疲劳、胆红素或转氨酶升高，胆汁量少，而且血清IL-8浓度升高，除外解剖因素所至肝功能改变者，可诊断为急性排斥反应。作者单位：1500
15、86哈尔滨医科大学第二临床医学院普外科(邹小明、袁友萍、杨维良、聂刚、王夫景、姜学海)；日本国札幌市，札幌医科大学第一外科(平田公一)参考文献1Sekido N, Mukaida N, Watanabe Y, et al. Prevention of lung reperfusion injury in rabbits by a monoclonal antibody against interleukin-8. Nature, 1993, 365:654-657.2Kamada N, Calne RY. A surgical experience with five hundred thir
16、ty liver transplants in the rat. Surgery, 1983, 93:64-66.3Larsen CG, Oppenheim JJ, Matsushima K, et al. The neutrophilactivating protein (NAP-1) is also chemotacitc for lymphocytes. Science, 1989, 243:1464-1468.4Anisowicz A, Bardwell L, Sager R. Constitutive overexpression of a growth-regulated gene in transformed
