《细胞周期调控对慢性癫痫大鼠反应性星形胶质细胞增殖活化以及神经元凋亡的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞周期调控对慢性癫痫大鼠反应性星形胶质细胞增殖活化以及神经元凋亡的影响（50页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学 硕士学位论文 细胞周期调控对慢性癫痫大鼠反应性星形胶质细胞增殖活化以 及神经元凋亡的影响 姓名：张舒校 申请学位级别：硕士 专业：神经病学 指导教师：王伟 20070501 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 1 细胞周期调控对慢性癫痫大鼠反应性星形胶质细胞增殖 活化以及神经元凋亡的影响 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科 研究生：张 舒 校 导 师：王 伟 教授 摘 要 目的 观察细胞周期素依赖性蛋白激酶（C y c l i n - d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a s e s ， C D K ）的选择性抑制剂
2、o l o m o u c i n e 对戊四氮点燃大鼠慢性癫痫模型反应性星形胶质细 胞（A s t r o c y t e ，A S T ）增殖活化和凋亡的影响，以及对神经元凋亡的影响，探讨细胞 周期调控与慢性癫痫反复发作的关系。 方法 建立戊四氮（P T Z ）点燃的大鼠慢性癫痫模型，随机分为生理盐水对照组， 戊四氮组和o l o m o u c i n e 戊四氮组，在完全点燃后1 d 、3 d 、7 d 、2 1 d 、3 0 d 、4 9 d 断头 取脑行冰冻切片，利用共聚焦显微镜结合免疫荧光化学方法（i m m u n o f l u o r e s - c e n c e s t
3、 a i n i n g ）和原位末端标记法( T d T - m e d i a t e d d U T P - b i o t i n n i c k e n d l a b e l i n g ， T U N E L ) ，观察戊四氮完全点燃后各组不同时期皮层及海马胶质细胞纤维酸性蛋白 （g l i a l f i b r i l l a r y a c i d i c p r o t e i n , G F A P ） 、神经元凋亡（n e u r o n a l a p o p t o s i s ） 、 星形胶质细胞凋亡（a s t r o c y t i c a p o p t
4、o s i s ）的动态变化。 结果 1 . 慢性癫痫模型被完全点燃后大鼠海马及皮层星形胶质细胞( A S T ) 增殖活 化，选择性 C D K抑制剂 o l o m o u c i n e干预后能抑制 A S T的增殖活化；2 . 慢性癫痫模型 完全点燃后星形胶质细胞增殖活化的同时存在 A S T凋亡增加，选择性 C D K抑制剂 o l o m o u c i n e 部分减少 A S T凋亡；3 . 戊四氮完全点燃的慢性癫痫模型各时期神经元凋 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2 亡明显高于生理盐水对照组（p0.05） ； P T Z o l o组与生理盐水相比，早期神经
5、元 凋亡（1 d ，3 d ，7 d ）显著增加（p 0.05） ，晚期无显著性差异（p 0.05） ； P T Z o l o 组与 P T Z 组相比神经元凋亡明显减少（p 0.05） ，o l o m o u c i n e 明显减少了慢性癫痫大 鼠海马及皮层脑区神经元凋亡，具有神经保护作用；4 . 选择性 C D K 抑制剂 o l o m o u c i n e 并不能抑制慢性癫痫模型完全点燃，且早期有促痫性发作。 结论 癫痫反复发作可促使神经细胞细胞周期( c e l l c y c l e ) 启动，A S T 反应性增殖 活化，同时神经细胞凋亡增加。 C D K 选择性细胞周期
6、抑制剂 o l o m o u c i n e 可以调控细胞 周期，抑制 A S T 的反应性肥大、活化和增殖，减少神经元的凋亡，并能部分减少胶质 细胞凋亡，为痫性发作的神经保护提供新靶点。 关键词 癫痫；凋亡；星形胶质细胞；神经元；细胞周期；周期素依赖蛋白激酶； O l o m o u c i n e 。 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 3 E F F E C T O F C E L L C Y C L E R E G U L A T I O N O N P R O L I F E R A T I O N A N D A C T I V A T I O N O F A S T
7、 R O C Y T E S A N D I N D U C E D N E U R O - P R O T E C T I O N I N P E N T Y L E N E T R A Z O L I N D U C E D C H R O N I C E P I L E P T I C R A T S Huazhong University of Science and Technology Master candidate: Shuxiao Zhang Mentor: Prof.Wei Wang Abstract Object：To study the effect of Cyclin
8、- dependent protein kinases selective inhibitor olomoucine on the activation and proliferation and of AST，and on astrocytic apoptosis and on neuronal apoptosis in pentylenetrazol induced chronic epileptic ratsto explore the effect of cell cycle regulation on chronic epilepsy. Methods: The chronic ep
9、ileptic model was induced by Pentylenetetrazol （ PTZ ） .Rats were randomly divided into 3 groups:sham- operated control groups(are treated by physiological saline);PTZ group and Olomoucine+PTZ group.The experimental rats were sacrificed on day 1,3,7,21,30,and 49 after complete kindling.The brain was
10、 taken, and then the apoptosis of neurons and astrocytes was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling (TUNEL)The expression of NeuN and GFAP were observed by immunofluorescence staining.To observed the dynamic change of GFAP、 neuronal apoptosis、astrocytic apo
11、ptosis in cortical or hippocampus after treated with 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 4 Olomoucine - a selective CDK inhibitor. Result：1.After kindling, As a response to “ brain injury” , AST in cortical and hippocampus area appeared hypertrophy 、 proliferation,the number Of the GFAP- positive cells increase
12、d. After treated with Olomoucine，the hypertrophy proliferation of AST mitigated；the number of the GFAP- positive cells decreased. 2.After kindling，the number of TUNEL- positive astrocytes in cortical or hippocampus significantly increased ， After treated with Olomoucine ， the number of TUNEL- positi
13、ve astrocytes in cortical or hippocampus partly decreased.3.After kindling,in the PTZ groups,the number of TUNEL- positive neurons in cortex or hippocampus prominent increased compared with that of the control group(p0.01). Compared with PTZ groups,the number of TUNEL- positive neurons decreased sig
14、nificantly in Olomoucine+PTZ groups(p0.05).In Olomoucine+PTZ groups, the number of TUNEL- positive neurons increased significantly in the early period (1,3,7d), notablely on day 1(p0.01) ,but shows little difference in the later phase( 21,30,49d,p 0.05),compared with that of the control group. 4.Cel
15、l cycle inhibitor olomoucine can not prevent the chronic epilepsia model was complete kindling.In the early period,the chronic epilepsia rats were easily kindled after treated with Olomoucine. Conclusion：After kindling, AST entered cell cycle and appeared proliferation and activation, and astrocytic
16、 apoptosis increased, neuronal apoptosis increased prominently as well.Olomoucine, a selective CDK inhibitor could inhibit the hypertrophy, activation and proliferation of astrocytes effectively through regulating cell cycle. Our results also suggest that cell cycle regulation can reduce astrocytic and neuronal apoptosis after kindling which might provide a new target for neuroprotection during chronic epilepsy. Keyword： Epilepsy； Apoptosis； astrocyte；neuron； cell cyle； Cy
